国产Bio—dUTP和35SdATP标记HBV DNA探针用于分子杂交初步报告

生物素(Bio)探针用于分子杂交于1983年Leary等已有报告。目前,BRL公司有试剂供应,但在国内尚未广泛应用。本所用国产Bio—dUTP,~(35)SdATP标记探针用于分子杂交,并与BRL Bio—DNA试剂盒和~3H、~(32)P探针杂交进行比较,现将初步试验结果     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

基因免疫诱导小鼠产生抗丙型肝炎病毒E2糖蛋白抗体

目的：通过基因免疫诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗Ⅲ型中国株ＨＣＶ来源Ｅ２糖蛋白的体液免疫应答。方法：质粒ｐ３Ｗ１４在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中能够表达Ｅ２糖蛋白，纯化该质粒并用于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠直接肌注，于加强注射后不同时相采血，以重组的Ｅ２糖蛋白检测特异性抗Ｅ２抗体。结果：接种ｐ３Ｗ１４质粒的小鼠中可检出抗Ｅ２抗体（５／６），抗体滴度１∶１５～１∶１２０。结论：采用含Ｅ２／ＮＳ１基因的质粒ＤＮＡ免疫，成功地诱导小鼠产生抗Ⅲ型株来源的Ｅ２抗体。     

双PCR检测丙型肝炎病毒RNA

本文报告了丙型肝炎病毒RNA检测方法的建立及临床初步应用结果。应用该方法的特点是:(1)微量,可从100μl血清中提取RNA;(2)操作程序精简,不用超速离心机等特殊设备;(3)快速,从提取HCV RNA-逆转录可在4小时内完成,1～2天可报告结果。临床初步应用结果表明,在14例输血后肝炎血清中13例检出HCV RNA,此结果表明输血后肝炎主要为HCV感染引起发病,提示供血员筛选的重要性。     

干扰素两种方案治疗丙型肝炎效果观察

本文对急慢性丙型肝炎１３１例患者，应用两种干扰素方案治疗，在初次干扰素治疗时，早期，大量，连续给药，并延长疗程至半年以上，对于急性丙肝患者血清ＡＬＴ的复常率可提高至８３．３％，ＨＣＶＲＮＡ阴转率８３．３％；对于慢性丙肝ＡＬＴ的复常率为８６．７％。ＨＣＶＲＮＡ阴转率７３．３％。     

慢性丙肝患者外周CTL对HCV抗原位点的特异性识别及受HLA的限制

我们对9例慢性丙肝患者外周CTL对HCV核壳蛋白(NP)的反应进行了研究，发现其中3例HLA B44阳性的患者，其CTL对此位点有明显的细胞毒作用，而其余6例HLA B44阴性的患者及2例正常人，均无此种细胞毒作用。这种HCV合成肽诱导的CTL能识别G 个HCV NP位点，而此位点的识别受HLA-1类分子B44的限制。该位点位于HCV核壳蛋白的第81-100个氨基酸残基之间。在HCV感染后机体可产生一系列的细胞免疫反应，而其确切的功能尚需进一步研究。我们的结果为HCV感染后，体内细胞免疫在病毒消除及发病机理中的作用的研究提供了方法和线索。     

丙型肝炎病毒PCR直接序列分析方法的建立及应用

目的为探讨快速完成丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ（ＨＣＶｃＤＮＡ）序列分析的方法。方法将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析技术相结合，以ＰＣＲ产物为测序模板，以ｒ３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＰＣＲ引物为测序引物，以ＴａｑＤＮＡ聚合酶直接测序。结果与结论ＰＣＲ直接测序方法简便、快速、经济。还发现，以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收ＰＣＲ产物制备测序模板可获得最佳测序效果。在需要测定大量标本时，为进一步简化操作步骤，可降低套式ＰＣＲ中第一次扩增反应的ｄＮＴＰ与引物浓度，以第一次ＰＣＲ扩增产物为模板，也可得到较好的测序结果。ＰＥＧ沉淀回收法不能去除非特异性ＰＣＲ产物，对ＰＣＲ直接测序有一定影响。     

乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究

目的探讨庚型肝炎感染患者是否存在双重感染和多重感染。方法应用庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＮＳ３区逆转录聚合酶链反应技术检测了ＨＧＶ系列稀释的质控血清及ＡｂｂｏｔＧＢＶ－Ｃ参比样品中ＨＧＶＲＮＡ，并对９０例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ阳性和１２例乙型肝炎、丙型肝炎双重感染献血员进行了ＨＧＶＲＮＡ的检测。结果ＨＧＶ系列稀释质控血清１０－１～１０－５均为阳性；１０－６为阴性。２份ＡｂｂｏｔＧＢＶ－Ｃ样品均为ＨＧＶＲＮＡ阳性。９０例ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中，８例ＨＧＶＲＮＡ阳性（１７．８％）；１２例乙、丙双重感染者中４例（４／１２）ＨＧＶＲＮＡ阳性。结论不仅存在ＨＣＶ及ＨＧＶ双重感染，也存在多重感染。     

乙型肝炎病毒DNA转染人T淋巴细胞株的研究

本文试用磷酸钙DNA共沉淀法将HBV DNA转染于培养的人T淋巴细胞株-CEM细胞中,HBV可在转染后的细胞中复制和转录,转染后的细胞培养液中,用酶联免疫吸附法可检测出HBsAg,细胞中可检测出3.2Kb和2.2Kb的HBV DNA片段,HBV DNA对体外培养的人 T淋巴细胞株的成功转染将有助于HBV致病机理的研究。