抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

狂犬病防制工作不容忽视

我国在公元前300多年就有狂犬病的记载,从发现狂犬病的那一天就开始了狂犬病的防治,并且随着医学生物学的发展和新技术的应用,有关狂犬病研究的各个领域也取得了可喜的成果。如狂犬病毒全基因序列的测定和分子结构的阐明,狂犬病毒致病的分子机理日益明确和狂犬病毒基因工程口服疫苗的研究和应用。我国在狂犬病预防和研究领域也取得了可喜的成绩,如人狂犬病已从80年代的每年数千例降至目前的数百例;Vero细胞纯化狂犬病疫苗的研制成功;人腺病毒和禽痘病毒为载体表达狂犬病毒糖蛋白和/或核蛋白制备基因工程疫苗已在动物实验中证实有保护作用。与此同时我们也应看到仍有许多问题有待于继续努力和解决。     

肾综合征出血热疫苗研究现状

流行性出血热是由一种抗原性及其遗传特性相似的病毒群所致 ,又称肾综合征出血热[1 ] ,30年代在我国东北地区即有孙吴热、二道岗热、虎林热、黑河热等的称谓。至今已有70多年的历史。该病病死率高 ,严重危害着我国人民身体健康和生命安全 ,是我国重点的防治传染病之一 ,世界卫生组织将本病命名为肾综合征出血热 (hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome ,HFRS)。 1976年 ,南朝鲜李镐旺在Hantaan河捕获的黑线姬鼠肺组织中分离到 (Koreanhemorrhagicfever,KHF)病原 ,并于 1978年证实为引起流行性出血热的病原体 ,后命名为Hantaan病毒 76～ 118…     

基因工程乙型肝炎疫苗免疫原性和免疫效果的评价

80年代第一个基因工程疫苗———乙肝疫苗研制成功 ,以后随着对目的基因选择、抗原表达系统、质量评价等方面的研究进展 ,对其质量问题产生了不同见解。不同乙肝疫苗抗原来源于不同的表达系统 ,糖基化程度和生产工艺有所不同 ,由此引起保护率、抗体水平和免疫持久性的差异如何 ?以及以何种方法评价方能较科学地反映疫苗质量 ,均为乙肝预防工作中亟待解决的重大问题。开展这方面的研究 ,对确定我国乙肝疫苗生产发展的方向 ,即选择、推广何种类型的乙肝疫苗十分重要 ,为制定疫苗更新换代的行政决策提供依据。本文对疫苗免疫效果考核和保护机制…     

国产丙型肝炎病毒NS3抗原的质量检定

目的为了研究我国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）诊断试剂用抗原的质量，加快改进丙型肝炎病毒抗体诊断试剂。方法特选国内“八五”攻关课题研究出的丙型肝炎ＮＳ３抗原和目前我国的主要使用的两种国外丙型肝炎ＮＳ３抗原，建立了单片段检测ＮＳ３抗体的试剂，对ＮＳ３抗原质量利用我国抗－ＨＣＶ第二代国家检验参考品以及中国药品生物制品检定所最近收集的部分血清样品，对其抗原性进行了比较研究。结果发现我国生产单位对ＮＳ３抗原的纯化条件及在试剂中的组装条件的研究尚嫌薄弱，使得在利用这些ＮＳ３抗原组成诊断试剂检测时出现了检出率较低及假阳性等问题。结论提示国内有关单位应加强对这方面的研究。     

乙型肝炎病毒表面抗原国家定量标准品的研制

目的 研制乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)国家定量标准品及定量线性参考品.方法 收集各地乙型肝炎患者和健康献血员血样,用不同厂家乙型肝炎、丙型肝炎病毒血清学试剂盒筛选.6个协作单位用7种试剂以世界卫生组织(WHO)HBsAg定量标准品标定1份HBsAg国家定量标准品,稀释后得到HBsAg国家定量线性参考品.结果经7种试剂共21次协作标定,得到HBsAg国家定量标准品的浓度为1226 IU/ml,各次检测结果的变异系数均小于15%.将国家定量标准品系列稀释后得到由8个不同浓度血清组成的HBsAg国家线性参考品,经检测后表明其浓度与理论浓度的差值均<15%,通过加速试验检测该参考品的稳定性效期暂定为5年.将其作为HBsAg国家线性参考品并初步限定检测结果的允许值范围.结论 标定1份HBsAg国家定量标准品并建立了由8份血清组成的HBsAg国家定量线性参考品.     

登革4型病毒Ban18-30减毒株的生物学特性研究

目的将登革4型病毒(DEN_4)Ban18原株及其减毒株Ban18_30株在vero细胞传代后进行生物学特性比较研究,以了解Ban18_30株的毒力和免疫原性及其是否为一株有希望的DEN_4减毒活疫苗候选株。方法Ban18原株及在原代地鼠肾细胞传代减毒的Ban18_30株在vero细胞中增殖,将两毒株进行中和实验,确证两株的型别,研究传代毒株的病毒滴度、毒力和免疫原性。结果两株病毒与抗DEN_4特异性抗体进行中和实验,中和指数≥316,证明两株病毒确为DEN_4;空斑滴定两株病毒,滴度约为2×106~2.5×106PFU/ml;Ban18_30株对乳鼠的脑内毒力较Ban18原株低,≥1.7logLD50;Ban18_30株对幼鼠脑内接种不致病,而原株的logLD50值为4.3;腹腔免疫小鼠后用原株进行脑内攻击,能够抵抗大于1 000 LD50致死剂量的病毒攻击。结论两株病毒在vero细胞内增殖良好,滴度较高,Ban18_30对乳鼠和幼鼠的致病力明显减弱,在减毒的过程中仍保留了较高的免疫原性,有望成为一株DEN_4的减毒活疫苗候选株。     

人巨细胞病毒低基质蛋白pp65亲水性片段的克隆与表达

目的 为建立人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染检测方法，表达HCMV早期复制的标志物pp65蛋白，以制备相应的抗体。方法 将pp65全基因和其亲水性强、有抗原代表性的片段（pp65 hp）分别克隆到表达载体pET22b（＋）中诱导表达，并以免疫印迹考察重组蛋白的抗原性。结果 重组rpp65全蛋白表达量低于全菌体蛋白的5％，而rp65 hp蛋白获得高效表达，约为全菌体蛋白的40％，并与HCMV IgG抗体特异性结合。结论 亲水性pp65 hp片段有较好的抗原性，可以制备相应的抗体，来检测HCMV活动性感染。     

汉坦病毒四川分离株S85-46 的遗传学特征

目的：了解汉坦病毒四川分离株S85－46株分子流行病学特征。方法：将特异性引物从S85－46病毒感染细胞PCR扩增的产物克隆于T载体,正确的克隆纯化后测序,应用DNASTAR软件比较分析。结果：S85－46株M片段与HTN型毒株同源性为84．1％－99．7％,而与SEO型毒株同源率仅为70．4％－70．9％,表明S85－46毒株属HTN型。核苷酸同源性比较显示,S85－46与韩国分离的76－118株高度同源,而与国内一些HTN型病毒差异较大。而且同一地区的毒株也以差异很大。S片段全基因序列同源性比较也支持以上的观点。结论：不同地区汉坦病毒的流行株基因序列可以高度同源。     

国产新型人用狂犬病疫苗临床观察及免疫学效果评价

1994年后,我国部分狂犬病疫苗的生产厂家在中国药品生物制品检定所的倡议下,开始研究纯化狂犬病疫苗,现完成新药临床观察的有十余家企业。笔者就这些疫苗的临床效果进行综合评价。