桃红四物汤对大脑中动脉闭塞大鼠环状RNA表达谱的影响

目的 筛选和研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction, THSWD)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠环状RNA(circular RNA,circRNA)表达的影响,探讨THSWD的可能作用及分子机制。方法 采用下一代RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠circRNA表达谱,并与MCAO模型组和对照组进行比较。生物信息学分析预测潜在的靶向微小RNA(micro RNA, miRNA)和mRNAs。应用GO富集分析和KEGG通路富集分析方法分析差异表达的circRNAs的潜在作用。对表达差异显著的circRNA进行RT-qPCR验证。结果 MCAO组与对照组之间存在87个差异表达的circRNA,MCAO组与THSWD组之间存在86个差异表达的circRNA。其中,THSWD可逆转MCAO模型诱导的17个circRNAs。为了证明DECs靶向的mRNAs的作用,使用了GO和KEGG数据库。进一步分析表明,5个表达差异显著circRNAs表达量与测序结果相似。结论 首次确定了THSWD治疗后M...     

丹参注射液对糖尿病大鼠肾小管TLR4蛋白表达的影响

目的研究丹参注射液对糖尿病大鼠肾小管Toll样受体4 (TLR4)蛋白表达的影响。方法高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,40只大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、丹参注射液组,每组10只。给药6周后,HE染色观察大鼠肾组织病理变化,免疫组化染色观察TLR4蛋白表达,Western blot检测高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)增殖及TLR4蛋白表达。结果丹参注射液缓解了大鼠肾小管病变。与模型组比较,丹参注射液组TLR4蛋白表达显著降低(P0. 01);高糖环境下其质量浓度为30 mg/m L时可显著促进NRK-52E细胞增殖(P0. 05),并呈剂量依赖性地显著降低TLR4蛋白表达(P0. 05,P0. 01)。结论丹参注射液可保护糖尿病大鼠肾小管,降低高糖环境下NRK-52E细胞TLR4蛋白表达,从而改善糖尿病肾病。     

苍术苷体外对大鼠精子线粒体膜电位及凋亡的影响

目的:观察中药苍耳子的毒性成分苍术苷(Atractylodesin,ATR)体外对大鼠精子线粒体膜电位、超微结构及凋亡的影响,分析苍耳子可能存在的生殖毒性。方法:取雄性SD大鼠,麻醉、分离附睾精子,分别与不同浓度苍术苷(1.51、3.02、6.04、12.08 mmol/L)共同孵育。观察精子线粒体通透性开放情况,经流式细胞仪检测精子线粒体膜电位(MMP)和凋亡,并在电子显微镜下观察精子线粒体超微结构的改变。结果:与空白对照组比较,苍术苷(3.02 mmol/L～12.08 mmol/L)组大鼠精子线粒体膜电位明显下降,精子早期凋亡率和总凋亡率显著增加。电镜观察可见,与苍术苷共同孵育后,大鼠精子线粒体出现肿胀、融合,基质缺失,外膜破裂等现象,并呈现明显剂量依赖性。结论:苍术苷(3.02 mmol/L～12.08 mmol/L)体外能明显促进大鼠精子凋亡和降低线粒体膜电位,改变精子线粒体超微结构,促进线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。说明苍耳子可能存在一定的生殖毒性,苍术苷为其生殖毒性的物质基础。     

盐酸氟桂利嗪经眼部给药后在大鼠脑内的递送

目的： 眼部给药是临床上常用的一种给药途径,但大多只用于治疗眼局部性疾病。基于眼部结构的特 殊性,本文主要探索盐酸氟桂利嗪经眼部给药治疗缺血性脑血管疾病的可行性。方法： 150 只健康雄性SD大鼠随机 分为滴眼组、灌胃组和注射组。滴眼组和灌胃组均以14 mg/kg 的剂量给药,注射组剂量为5 mg/kg。采用高效液相色 谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定大鼠血浆和脑组织中的盐酸氟桂利嗪的含量,评价主要药代 动力学参数和生物利用度,并通过药物脑靶向指数(drug targeting index of brain,DTIbrain)研究盐酸氟桂利嗪眼部给药 的脑靶向性。结果： 盐酸氟桂利嗪经眼部给药后血浆Cmax和AUC0-t,脑组织Cmax和AUC0-t均高于经灌胃给药,差异有 统计学意义(均P<0.05)。经眼部给药血浆和脑组织的生物利用度分别为18.67%和34.67%,均高于经灌胃给药的 14.32%和21.56%。滴眼和灌胃两种给药途径的DTIbrain分别为1.84 和1.48。结论： 盐酸氟桂利嗪经眼部给药后能吸收 进入血液和脑组织,眼部给药的生物利用度和DTIbrain高于灌胃给药。     

脑络欣通胶囊的安全药理学研究

目的观察脑络欣通胶囊对小鼠中枢神经系统及犬呼吸系统和心血管系统的影响,了解其潜在的对生理 功能的不良影响,为临床试验提供依据及参考。方法脑络欣通胶囊灌胃小鼠,观察其对小鼠的一般行为、自 主活动、运动协调能力的影响及其对戊巴比妥钠阈剂量和阈下剂量协同睡眠/催眠的影响;脑络欣通胶囊灌胃 犬,观察其对麻醉犬呼吸频率、潮气量、血压、心率、心电图的影响。结果脑络欣通胶囊（40、20、10 g·kg-1） 对小鼠的一般行为、自主活动、运动协调能力均无明显影响（P＞0.05）,与戊巴比妥钠睡眠/催眠无协同作用 （P＞0.05）。脑络欣通胶囊（9、4.5、2.25 g·kg-1）对犬呼吸频率、潮气量、血压均无明显影响（P＞0.05）;脑络欣 通胶囊（9 g·kg-1）给药后15 min 时犬的心率及心电图P 波幅度均明显降低（P＜0.05）,脑络欣通胶囊（4.5 g·kg-1） 给药后30、60、120、180 min 时犬心电图T 波幅度均明显抬高（P＜0.05）,脑络欣通胶囊（2.25 g·kg-1）对犬的心 率及心电图均无明显影响（P＞0.05）。结论脑络欣通胶囊对实验动物的中枢神经系统,心血管系统及呼吸系 统均无明显影响。     

加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的 观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁,TGF-β₁）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法 用TGF-β₁（10 μg·L^-1）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca²⁺浓度。结果 TGF-β₁能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（P<0.01）,下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（P<0.01）,上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin）,转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（P<0.01）,并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）,活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1）总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca²⁺胞内蓄积（P<0.01）;而加味小陷胸汤（10,20,40 mg·L^-1）均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^-1效果最佳（P<0.05,P<0.01）;Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路特异性抑制剂（R）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^-1均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β₁介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca²⁺在胞内蓄积（P<0.05,P<0.01）,且（R）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^-1抑制作用效果更强（P<0.05,P<0.01）。结论 以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路抑制TGF-β₁介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。     

防风提取物影响芍药苷肠道吸收的效应研究

目的考察防风提取物对芍药苷肠吸收的影响。方法采用大鼠外翻肠囊模型,以表观吸收系数（Papp） 为评价指标,研究防风提取物对芍药苷在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收情况;在吸收最佳的肠段,采用 大鼠在体单向肠灌流模型考察不同质量浓度的芍药苷对肠吸收的影响,以及防风提取物、P-糖蛋白（P-gp）抑 制剂（盐酸维拉帕米）、多药耐药相关蛋白2（MRP2）抑制剂（丙磺舒）和抗生素（诺氟沙星）对芍药苷肠吸收的影 响。结果防风提取物对各肠段芍药苷吸收均有一定促进作用,以回肠最为显著（P＜0.01）;在回肠段,芍药 苷的吸收速率常数（Ka）和有效渗透系数（Peff）在实验质量浓度范围内（20~80 μg·mL-1）无显著性差异（P＞0.05）; 与芍药苷中浓度组比较,防风提取物、盐酸维拉帕米、丙磺舒和诺氟沙星对芍药苷的Ka 和Peff 具有明显影 响（P＜0.05,P＜0.01）。结论防风提取物对芍药苷肠道吸收有显著的促进作用,芍药苷可能是P-gp 和MRP2 的底物,其吸收机制可能是被动转运。防风提取物促进芍药苷肠道吸收的作用机制可能与其抑制P-gp、MRP2 活性及调节肠道菌群有关。     

超高效液相色谱法比较鲜川芎和川芎药材中6种成分含量

目的 采用超高效液相色谱法(ultra-high performance liquid chromatography, UPLC)比较鲜川芎和川芎药材中6种活性成分(川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯)的含量差异,为该药材的产地加工提供实验依据。方法 采用75%甲醇超声提取,UPLC测定鲜川芎和川芎药材中6种活性成分,根据样品处理条件计算质量分数并进行比较。流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,检测波长为294 nm,柱温30 ℃,进样体积2 μL。结果 经检测,阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯A为鲜川芎和川芎药材的共有成分,鲜川芎中未检测到洋川芎内酯I及洋川芎内酯H。鲜川芎样品中各成分的质量分数为阿魏酸0.003 9%、洋川芎内酯A 0.006 4%、藁本内酯0.54%;川芎药材中各成分的质量分数为阿魏酸0.088%、洋川芎内酯I 0.20%、洋川芎内酯H 0.031%、洋川芎内酯A 0.76%、藁本内酯 1.3%。结论 川芎药材与鲜川芎中化学成分存在差异,推测在川芎的产地加工及贮藏过程中存在成分的转化。     

苓桂术甘汤含药血清对过氧化氢诱导的乳鼠原代心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的 观察苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响。方法 建立H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型,将心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2模型组、空白大鼠血清（20%）组、苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）组,用苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）,分别预处理心肌细胞12 h后,加入100 μmol/L H2O2继续培养6 h,用MTT法测定心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase ,GSH- Px）活性及丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）水平,用荧光核染色法观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术（Annexin Ⅴ- FITC/PI）检测细胞凋亡率,荧光探针法测定氧自由基水平。结果 与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显降低（P<0.05）,氧自由基、LDH活性及MDA水平均显著升高（P<0.05）,SOD及GSH- Px活性均显著降低（P<0.05）,细胞核浓染数目增加,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,苓桂术甘汤含药血清组心肌细胞活力明显升高（P<0.05）,GSH- Px、SOD活性均显著升高（P<0.05）,LDH活性,氧自由基、MDA水平均显著降低（P<0.05）,心肌细胞核浓染减少,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤能够清除细胞内氧自由基,抑制心肌细胞凋亡,增强细胞活性,对心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用。     

高效液相色谱法同时测定大黄碳酸氢钠片中5种成分的含量

目的建立高效液相色谱法测定大黄碳酸氢钠片中5种成分的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱,检测波长为254 nm;柱温为30℃;流速1.0 mL·min~(-1)。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在3.488～34.875μg·mL~(-1)(r=0.9996)、3.010～30.100μg·m L~(-1)(r=0.9997)、4.566～45.660μg·mL~(-1)(r=0.9996)、3.236～32.357μg·mL~(-1)(r=0.9996)、1.867～18.671μg·mL~(-1)(r=0.9981)与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率分别为96.8%、98.3%、99.7%、101.4%、103.2%,RSD分别为2.4%、2.5%、1.9%、1.8%、0.76%。结论该实验方法准确性可靠、重复性和稳定性良好,专属性强,可作为大黄碳酸氢钠片含量测定的质控方法。