HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定

目的：构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GenBank中的HTERT启动子（HTERTp）序列设计引物,以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板,PCR扩增HTERTp,并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中,构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp;NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中,构建成pSG—HTERTp／pA—NK4穿梭质粒,脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒;噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒;RT-PCR检测NK4基因的转录;Western Blot检测NK4蛋白的表达。结果：成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,滴度为4．5×10^9空斑形成单位（pfu）／mL,且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论：成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础。     

急性髓细胞白血病染色体核型分析及临床意义

目的探讨染色体核型分析对急性髓细胞白血病的诊断、治疗、预后的临床意义。方法采用培养法处理患者骨髓样本,经G显带技术进行染色体核型分析,并观察患者的治疗效果与染色体核型分析之间的关系。结果 58例患者中异常核型为69%（40/58）,以结构异常为主,以M3的检出率最高。伴有复杂核型异常AML患者CR率、总生存期均较非复杂核型异常AML患者差。结论染色体核型分析已成为急性髓细胞白血病诊断、个体化治疗、治疗效果监测及判断预后不可或缺的方法。     

鼻咽癌组织中P-Akt的表达及其临床意义

目的检测肿瘤相关分子P-Akt在鼻咽癌组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法收集广州医学院第二附属医院病理科2002—2003年存档的60例手术活检切取的鼻咽癌组织蜡块（鼻咽癌组）,另选择30例鼻咽慢性炎症患者的鼻咽部炎症组织石蜡标本（对照组）。应用免疫组织化学技术（SABC）检测鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织标本中P-Akt的表达,观察P-Akt与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。结果（1）P-Akt在鼻咽癌组织中的阳性着色主要集中在细胞质,阳性21例,阳性率为35.0%,对照组无P-Akt表达,两组P-Akt阳性率间差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）P-Akt表达水平与鼻咽癌组织原发病灶侵犯程度、淋巴结是否转移、远处转移及TNM临床分期有关（P〈0.05）;而与鼻咽癌组织的组织学分型无关（P〉0.05）。结论在鼻咽癌组织细胞质中P-Akt过表达,其表达与鼻咽癌患者的临床病理特征如淋巴结浸润、远处转移和TNM临床分期密切相关。P-Akt表达水平可作为预测鼻咽癌病期和转移的新指标。     

磷酸酰肌醇-3激酶抑制剂对哮喘小鼠呼吸道炎症及巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的 观察磷酸酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY294002对卵白蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠呼吸道炎症及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响.方法 Balb/c小鼠30只,随机分为3组:LY294002处理组、OVA组和正常对照组.通过OVA多次腹腔注射致敏和反复雾化激发,建立哮喘小鼠模型.末次抗原激发后48 h收集其支气管肺泡灌洗液(BALF)和骨髓标本,计数其细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS),并行肺组织学检查,计数细支气管上皮细胞过碘酸雪夫反应阳性和阴性细胞总数.于末次抗原激发 24 h、48 h、72 h采集各组小鼠下腔静脉血3 mL,采用ELISA法测定静脉血清MIF水平.结果 与OVA组比较,LY294002处理组小鼠BALF细胞总数及EOS数明显减少(Pa<0.05).肺组织细支气管、血管周围EOS浸润得到控制,呼吸道黏液分泌减少;抗原诱导的呼吸道炎症完全得到抑制,和正常小鼠肺组织切片基本一致.OVA组末次抗原激发24 h、48 h、72 h血清MIF水平较正常对照组明显升高[t(24 h)=2.105,P=0.04;t(48 h)=2.205,P=0.04;t(72 h)=1.893,P=0.05],LY294002处理组末次抗原激发24 h、48 h、72 h血清MIF水平与正常对照组比较差异无统计学意义[t(24 h)=0.336,P=0.86;t(48 h)=0.291,P=0.90;t(72 h)=0.374,P=0.76],OVA组末次抗原激发24 h、48 h、72 h血清MIF水平较LY294002处理组明显升高[t(24 h)=2.387,P=0.04,t(48 h)=2.155,P=0.04;t(72 h)=2.424,P=0.03].结论 PI3K抑制剂LY294002对OVA致敏的哮喘小鼠呼吸道炎症具有抑制作用,MIF可能在小鼠呼吸道炎症的发展过程中起一定作用.     

热休克蛋白40在卵巢上皮性癌中的表达及其临床病理相关性研究

目的:了解热休克蛋白40(heat shocking protein,Hsp 40)在卵巢上皮性癌中的表达并分析其与临床病理的相关性.方法:用免疫组织化学方法(immunohistochemistry,IHC)检测了45份卵巢上皮性癌、20份卵巢良性肿瘤、20份正常卵巢组织中Hsp 40蛋白的表达情况,将其表达结果与临床病理资料进行统计学分析.结果:Hsp 40蛋白在卵巢上皮性癌组织中表达的强度及阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织,阳性表达率分别为62.2%、25.0%、20.0%,差异有高度统计学意义(P<0.01);卵巢上皮性癌组织中Hsp 40蛋白表达与其临床分期、组织学分级、有无远处转移及有无残余灶无明显相关性.Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank分析显示Hsp 40蛋白表达阴性者的生存时间明显长于阳性表达者,差异有高度统计学意义(P<0.01).Cox模型显示残余病灶的大小单独进入Cox模型,而Hsp 40蛋白表达并不影响预后.结论:Hsp40蛋白可能在卵巢上皮性癌的发生、发展起重要作用.     

滤泡树突细胞肉瘤的临床病理分析

目的 探讨滤泡树突细胞肉瘤(FDC肉瘤)的临床病理特征及其鉴别诊断.方法 对10例FDC肉瘤行HE染色、免疫组织化学EnVision法染色,对其中5例进行原位杂交,并对7例进行了随访.结果 10例患者中男5例,女5例,平均年龄42岁.发生于结内的6例,主要位于颈部和腹膜后淋巴结;发生于结外的4例,分别位于扁桃体、盆腔、胰尾部和脾脏.镜下观察瘤细胞呈旋涡状、席纹状或片块状排列.肿瘤细胞呈合体状、胖梭形或上皮样,胞质红染,边界不清,细胞核圆形或卵圆形,空泡状,核仁清楚,核分裂象多少不等.偶见核内假包涵体及多核瘤巨细胞.小淋巴细胞或中性粒细胞夹杂于瘤细胞间或围绕血管周围.瘤细胞CD21、CD23、CD35及D2-40呈弥漫或灶状阳性,少数病例瘤细胞上皮细胞膜抗原、CD68、S-100蛋白阳性,白细胞共同抗原、CD20、CD3、CD1a、HMB45、细胞角蛋白均阴性.EBER原位杂交,1例炎性假瘤样FDC肉瘤阳性,另外4例经典型FDC肉瘤为阴性.随访7例,随访2～39个月(平均14个月).2例伴有副肿瘤性天疱疮的患者分别于确诊半年和7个月后死于肺部感染,其余5例经手术切除或辅以放疗和化疗后,无复发和转移.结论 FDC肉瘤是一种少见类型的低至中度恶性肿瘤.CD21、CD35及D2-40的应用有助于其正确的诊断和鉴别诊断.多数病例局部手术切除或辅以放疗和化疗,预后较好,伴有副肿瘤性天疱疮的患者预后差.     

DDAH/NOS途径参与甲基苯丙胺大鼠纹状体的神经毒性研究

目的 探讨二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(DDAH)/一氧化氮合酶(NOS)途径在甲基苯丙胺(METH)神经毒性中发挥的作用及其相关调控机制.方法 将20只♂ Wistar大鼠,随机分为NS对照组和METH组,分别ip生理盐水或METH 15mg·kg-1,bid,用药4 d.采用HE染色光镜观察大鼠脑组织的病理学改变,Western蛋白印迹法检测大鼠纹状体区的DDAH1蛋白表达水平,以紫外分光光度计检测NOS的活性.结果 METH组大鼠脑组织中出现神经元水肿和明显的噬神经细胞现象,与NS组相比,METH组大鼠纹状体区的DDAH 1蛋白表达水平显著性升高(P＜0.05),NOS的活性显著性升高(P＜0.01).结论 DDAH/NOS途径可能参与METH引起的大鼠纹状体区的神经损伤.     

2D-PAGE电泳和质谱分析筛选鼻咽癌中NESG1调控蛋白

[目的]利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因NESG1在鼻咽癌中可能调控蛋白.[方法]提取NESG1稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱.选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(PMn和数据库检索技术给予鉴定.荧光定量PCR和Western Blot验证差异基因表达水平.[结果]质谱分析显示,PKM2 、ERO1L和BCAS2在NESG1过表达的3D8细胞中表达下调,其下调倍数分别为-5.25,-3.65和-4.52倍.荧光定量PCR在mRNA水平验证了PKM2、ERO1L和BCAS2(-3.65、-3.42和-4.55倍)以及Westem Blot在蛋白水平验证了PKM2和ERO1L蛋白在3D8细胞中表达下调.[结论]PKM2、ERO1L和BCAS2可能是NESG1调控的靶基因,参与了NESG1介导的鼻咽癌生长抑制     

细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4在食管癌中的表达及其意义

目的：获得食管癌发生过程中调节Ｇ１细胞周期各种因子的作用。方法：采用抗ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４的单克隆抗体对１０例下沉食管和５０例食管鳞状上皮癌标本进行免疫组织化学染色。结果：ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４在正常食管上皮呈现较低水平的表达,在食管鳞状上皮癌中则过表达。２７／５０食管鳞状上皮癌ｙｃｙｃｌｉｎＤ１染色阳性,其中８例强阳性,１２例只表达ＣＤＫ４,１１例只表达ｃｙｃｌｉｎＤ１,１４例既表达ｃ     

肝酶灵对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

 目的：研究肝酶灵对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。方法：每天给药一次，连续8 d，第8天小鼠腹腔注射鸡红细胞，根据巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数，评定肝酶灵对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果：肝酶灵能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数。结论：肝酶灵可以提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的功能。