髓系抑制性细胞调节炎症性疾病中Th17应答的研究进展

髓系抑制性细胞(MDSC)是一群具有免疫抑制功能的调节性细胞。MDSC与炎症性疾病的发生密切相关。Th17细胞属于CD4＋ T细胞亚群,主要通过分泌白细胞介素(IL)-17、IL-22等细胞因子在炎症性疾病中发挥重要作用。MDSC可通过表达精氨酸酶-1、IL-1β及分泌转化生长因子-β等调控Th17活化,进而影响炎症性疾病的过程。本文综述MDSC调控Th17细胞的作用方式及其在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎及哮喘等炎症性疾病中的作用。     

日本血吸虫童虫细胞与免疫调节剂联用诱导小鼠免疫保护性效果观察

目的观察单用日本血吸虫（SJ）童虫细胞（SC）和联用免疫调节剂诱生小鼠免疫保护性的效果。方法制备感染后第18dSC;实验昆明小鼠分为8组：A组（PBS）、B组（SC）、C组（IL-2）、D组（IL-2＋SC）、E组（IFN-γ）、F组（IFN-γ＋SC）、G组（香菇多糖）、H组（香菇多糖＋SC）。腹股沟皮下间隔2w免疫1次,共3次。于末次免疫第4w攻击感染,第35d后剖杀小鼠计数虫荷及每克肝卵数（LEPG）,计算减虫率和LEPG减少率。ELISA测定第2、3次免疫后及攻击前小鼠血清中特异性抗童虫可溶性抗原（SWSA）的抗体。结果保护性效果显示：与A组比较,B、C、D、E、F、G和H组的减虫率分别为43.3%、13.5%、36.1%、32.7%、46.2%、18.3%和33.7%,LEPG减少率分别为59.8%、26.6%、52.1%、47.7%、57.7%、34.0%和53.7%。各免疫调节剂与SC联合免疫组与单用SC组比较,特异性抗体水平差异无统计学意义。结论SC能诱生小鼠较明显的免疫保护性,单用IFN-γ也有一定的减虫和减卵效果,但免疫增强剂均未能显著提高SC诱生的免疫保护性效果和体液免疫应答水平。     

肺炎支原体诱导单核细胞产生IL-6的分子机制

目的探讨肺炎支原体诱导人单核细胞产生IL-6的分子机制。方法将灭活的肺炎支原体刺激分离的单核细胞。ELISA检测IL-6的诱生情况，并用RT—PCR检测其mRNA的表达。并用酪氨酸激酶和核因子KB（NF—KB）特异性抑制剂处理单核细胞以分析其相应的信号转导通路。结果HIM能以时间-剂量依赖方式诱导单核细胞产生IL-6，并能诱导其。RNA的表达。酪氨酸激酶特异性抑制剂除莠霉素A和NF—KB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）能明显抑制IL-6产生。结论肺炎支原体能诱导单核细胞产生IL-6，这可能是其致病的因素之一，该效应与细胞酪氨酸磷酸化和NF-κB的激活有关。     

GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位

目的 构建GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，并在巨噬细胞中表达，为研究ICP0对巨噬细胞分泌活性的影响提供实验依据。方法 将ICP0片段亚克隆入载体pEGFP—Cl，构建GFP-ICP0融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP／ICP0转染巨噬细胞，Western blot鉴定表达产物，荧光显微镜观察GFP—ICP0融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果 成功构建了GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。结论 pEGFP／ICP0在巨噬细胞中即时高表达GFP-ICP0融合蛋白并定位于细胞核。     

LTB-NspA融合基因原核表达载体的构建及鉴定

目的:构建融合基因LTB-NspA的原核表达载体。方法:用PCR法从淋球菌和大肠杆菌标准株分别扩增出NspA和LTB基因,用重组PCR法通过接头将LTB与NspA融合,将其插入pET-30 a中,并进行PCR、酶切和测序鉴定。结果:经PCR、酶切和测序分析,证实成功构建了LTB-NspA的原核表达载体。结论:LTB-NspA原核表达载体的成功构建,为研制淋球菌高效粘膜免疫疫苗奠定了基础。     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究

目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288 aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据。方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以W estern-b lot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性。结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白。W estern-b lot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%。用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1∶1280以上。结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0463的表达与抗原性鉴定

目的表达梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0463（rTp0463）并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度〉90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。     

肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的表达与临床应用

目的探讨肺炎嗜衣原体(CPN)蛋白酶样活性因子(CPAF)重组蛋白在CPN感染实验室诊断中的应用价值。方法构建CPAF免疫优势区基因重组质粒,诱导表达并纯化重组蛋白,分析其抗原特异性;间接ELISA法检测CPN参考血清、临床血清标本中的特异性IgM和IgG抗体,以及沙眼衣原体(Ct)阳性血清。结果高效表达和有效纯化出一相对分子质量(Mr)约为5.13×103的特异性重组蛋白;间接ELISA法测定用其免疫兔血清中的特异性IgG和IgM抗体效价,分别高达1∶16 000和1∶8 000;检测Cpn IgM和IgG参考血清,阴性和阳性结果符合率均为100.0%;与"金标准"方法MIF比较,检测300份呼吸道感染患者抗血清,IgMI、gG符合率分别为98.3%、99.0%;检测Ct阳性参考血清和阳性临床血清标本,无阳性结果。结论表达的CPN CPAF免疫优势区重组蛋白具有良好的抗原性,在CPN感染的实验室诊断中具有较高的应用价值。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的建立

目的采用SD大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis Carinii pneumonia,PCP)动物模型。方法 20只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组皮下注射地塞米松2.5 mg/只,每周2次,对照组不给药。8周后,分别取肺组织,印片,Giemsa染色检查卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。酚氯仿法提取大鼠肺组织DNA,LAMP法扩增卡氏肺孢子虫DNA。结果诱导后24 d大鼠出现死亡,28 d检获PC,32 d感染阳性率为86%(13/15);LAMP扩增出卡氏肺孢子虫特异DNA。结论成功诱导SD大鼠的PCP模型。     

2 527株临床分离病原菌的耐药性分析

目的 分析粤北人民医院临床分离病原菌对常用抗菌药的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 采用K-B法或MIC法对2013年2 527株临床分离株进行药敏试验。以CLSI 2012为判断标准,应用WHONET5.4和SPSS19.0软件进行数据分析,综合分析医院的耐药情况。结果 金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林菌株占30.9%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的检出率为76.2%,未检出万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。屎肠球菌对所测抗菌药物的耐药性显著高于粪肠球菌,屎肠球菌中未检出糖肽类和利奈唑胺耐药菌株,但是粪肠球菌中检出1株利奈唑胺耐药菌株,检出2株替考拉宁耐药菌株。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中产ESBLs株分别为43.9%和37.5%,检出5株对多黏菌素B耐药的铜绿假单胞菌,多重耐药鲍曼不动杆菌占了63.7%。结论 临床病原菌耐药性较严重,应加强监测,临床应依据药敏结果合理的应用抗生素。