病理生理学实验的信息化教学探讨

信息化教学是高等院校现代化教学工程建设的核心,而虚拟实验室是病理生理学实验信息化教学的集中体现.通过树立现代化教育观念,提高信息化知识与技能,积极开展虚拟实验研究等建立虚拟实验室的平台,才能更好地开展病理生理学的信息化教学.     

Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能。方法用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)。将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠。抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆。利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠。结论利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠。     

脂肪肝小鼠的肝脏脂质代谢相关基因表达特征分析

目的 分析ob/ob肥胖小鼠脂肪肝中脂质代谢相关基因的表达特征.方法 18周龄雄性ob/ob及其同窝对照小鼠各4只,禁食16h后处死.检测小鼠体质量、肝脏湿质量/体质量、肝脏三酰甘油(TG)水平;用H-E和油红O染色观察肝脏的形态结构和脂质沉积情况;用实时荧光定量PCR方法检测肝脏脂质代谢相关基因的mRNA表达情况.结果 Ob/ob小鼠体质量、肝脏湿质量/体质量和肝脏组织TG水平均高于对照小鼠(P＜0.05),H-E和油红O染色显示ob/ob小鼠发生肝脏脂质沉积;肝脏脂肪酸转位酶(CD36)、脂肪酸结合蛋白1(FABP1)、脂肪酸合酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、极长链脂肪酸延长酶6(ELOVL6)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)等mRNA表达水平在ob/ob小鼠肝脏均高于对照小鼠(P＜0.05),而过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、软脂酸辅酶A氧化酶1(ACOX1)、载脂蛋白B(ApoB)和微粒体TG转移蛋白(MTP) mRNA在两组小鼠肝脏中的mRNA表达水平差异无统计学意义.结论 Ob/ob小鼠肝脏的脂肪酸摄取和从头合成相关基因的mRNA表达水平升高,而脂肪酸氧化及脂质向肝外转运的相关基因的mRNA表达水平无明显改变.     

心血管系统中微小RNA的作用

miRNA是一类内源性的,小的非编码的RNA,它可以调节人类大约30%的蛋白质编码基因。到目前为止,已有400多个人的miRNA被克隆和测序,其中一些miRNA在心血管组织高表达和特异性表达,参与心脏发育、心肌肥大/心力衰竭、电重塑和血管增殖的调节,miRNA在心血管方面的生理和病理意义越来越被关注,将来也很有希望为心血管疾病的治疗提供新的手段。     

米色脂肪：一种新型的脂肪

人类的脂肪组织一般分为两种：白色脂肪通常被认为是储存脂肪的组织,而棕色脂肪在外在条件的刺激下,可以燃烧产生热量。最近研究发现,在寒冷刺激下或者β肾上腺素能受体激动剂处理后,小鼠皮下白色脂肪组织中会出现散在的棕色样脂肪细胞,并将这种脂肪细胞命名为“米色脂肪”。米色脂肪具有白色脂肪和棕色脂肪的功能,并能在两者之间转换,而且从分子生物学角度,成年人体中的棕色脂肪与这种脂肪十分类似。本文就米色脂肪研究的相关进展做一综述。     

介绍一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的改良方法

目的 建立一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的简便方法.方法 先对胎鼠组织进行碱裂解,然后通过盐析纯化DNA,经琼脂糖凝胶电泳判断DNA大小,检测A260/A280的比值判断其纯度,最后将抽提的DNA进行PCR扩增和基因型分析,检测其作为PCR模板的稳定性.结果 在2h内能分离到胎鼠基因组DNA,片段完整没有明显的降解现象,A260/A280比值＞1.77,能稳定用于PCR基因型鉴定分析.结论 该方法简便、快速、经济,能得到PCR级的高质量胎鼠基因组DNA,为准确和快速地进行胎鼠的基因型分析提供保证,具有很好的稳定性、可靠性和实用性.     

热应激对大鼠肝组织及人前列腺癌PC-3细胞RhoB表达的影响

目的:观察烫伤后大鼠肝脏组织及热应激后前列腺癌PC-3细胞小G蛋白RhoB表达的变化,探讨热应激对体内外RhoB表达的影响.方法:制备雄性SD大鼠30%体表面积Ⅲ度背部烫伤模型,烫伤后2、4、8、16 h取相应大鼠肝脏组织(n=6),应用RT-PCR和Western印迹分析测定RhoB mRNA和蛋白水平,并以正常大鼠肝脏组织作对照(n=6).制备人前列腺癌PC-3细胞热应激模型,热应激后0.5、1、2、4、8 h取细胞检测RhoB的表达,并以未处理细胞作对照.结果:烫伤后4 h,大鼠肝组织RhoB mRNA表达量最高,为正常对照的3.2倍(P＜0.01),8 h开始下降;而RhoB蛋白表达量在烫伤后8 h最高(P＜0.01) .PC-3细胞RhoB mRNA在热应激后2 h时开始上调;4 h时达到最大值,约为对照的2.8倍(P＜0.01);热应激后8 h RhoB蛋白表达量最高(P＜0.01).结论:在体内、体外实验中热应激均能上调小G蛋白RhoB mRNA和蛋白的表达.     

成束蛋白在乳癌的表达及其与雌激素受体的相互关系和意义

目的 探讨与细胞运动相关的成束蛋白在原发性乳癌的表达,及其与雌激素受体（ER）阴性癌细胞的关系。方法 选取乳癌标本共84例,用免疫组织化学法检测成束蛋白的表达情况,并与ER和增殖细胞核抗原（PCNA）染色状况相比较。结果 成束蛋白主要在癌细胞胞浆内弥漫性着色,在53例ER阳性病例中仅3例为成束蛋白表达阳性（5．7％）,相反,在31例ER阴性肿瘤中有21例表达阳性（67．7％）,二者差异显著（P＜0．001）;但成束蛋白表达与绝经状态、肿瘤大小、组织学分级和淋巴结转移状况等无显著相关（P＞0．05）;然而,阳性成束蛋白表达与PCNA表达呈显著的正相关（P＜0．001）。结论 人成束蛋白的过度表达可导致细胞间粘着力的降低和细胞运动活性的增加,可能是由于肌动蛋白动力学中的分子调节对癌细胞的恶性表型具有一定的影响;而肌动蛋白的功能作用受肌动蛋白相关蛋白,如成束蛋白的活性控制。且成束蛋白大多存在于那些高表达PCNA的癌细胞,也可能与高增殖活性的癌细胞有关,这可能是阴性ER乳癌相对于阳性ER组有着更差的预后的原因之一,但具体作用机制和临床意义还有待于进一步研究。     

地塞米松对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶活性诱导能力丧失的机制研究

目的:通过测定人肝癌SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶(TAT)cDNA序列,并观察其糖皮质激素受体(GR)通路是否存在异常,以探讨地塞米松(Dex)丧失诱导SMMC-7721细咆TAT活性的机制.方法:RT-PCR扩增SMMC 7721细胞全长TAT cDNA并进行测序;采用实时定量PCR观察Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA表达的影响,并与HepG2细胞作对照;采用电穿孔法将GR特异性报告基因GRE-tk-LUC及GRE-MMTV CAT分别瞬时转入SMMC-7721细胞中,观察Dex对荧光素酶(LUC)和氯酶素乙酰转移酶(CAT)表达的影响,并与HepG2细胞作对照.结果:SMMC-7721细胞TAT cDNA中第576位碱基存在同义突变;Dex能够诱导SMMC-7721细胞中TAT mRNA的表达.最大诱导倍数为2.22.明显低干HepG2细胞(15.1倍,P<0.01);Dex诱导了SMMC-7721细胞LUC及CAT的表达,与HepG2细胞无显著差异.结论:Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA诱导水平降低,可能是TAT活性不增高的主要原因.     

利用载体介导的RNA干扰技术抑制小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7内糖皮质激素受体表达及功能的研究

目的 :RNA干扰技术是最近几年发展起来的一种用同源双链RNA(siRNA)高效、特异地阻断目的基因表达的新方法。本研究旨在利用最近发展的载体介导的RNA干扰技术建立糖皮质激素受体 (GR)基因阻断的RAW2 6 4 7细胞模型 ,为进一步研究糖皮质激素 (GC)和糖皮质激素受体的功能及作用机制提供了新的手段。方法 :用RT -PCR检测GRmRNA ;用Westernblot检测GR蛋白表达 ;Griess法检测细胞上清中一氧化氮 (NO)生成量 ;利用GR报告基因GRE -tk -luc及双荧光素酶活性检测试剂盒研究细胞内GR转录激活功能的变化。结果 :我们设计了两段针对GR…