醛缩酶B在果糖耐受与血糖稳态中的作用研究

目的：建立全身性醛缩酶B(aldolase B,Aldob)基因敲除小鼠模型,探讨Aldob基因缺陷对小鼠果糖耐受和血糖稳态的影响。方法：利用敲除优先策略和胚胎干细胞基因打靶技术,建立全身性Aldob基因敲除小鼠模型,并通过Western blot验证敲除效果;监测普食喂养小鼠生长发育过程中的体重、体长、血糖和血脂水平;检测果糖灌胃前后小鼠血糖及血浆天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）水平,取材分析肝、肾等器官的大小及形态学变化。结果：Aldob缺陷小鼠普食喂养时出现生长迟滞和低血糖;果糖灌胃后血糖呈降低趋势,血浆AST和ALT水平升高,并伴有肝肾肿大和肝脏病理性损伤。结论：Aldob在维持小鼠生长、血糖稳态和果糖耐受性中发挥重要作用。     

锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株的构建及鉴定

目的 构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法 本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA)，构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA，包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）接种于6 cm培养皿中，分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml（实验组）和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml（阴性对照组）进行转染，48 h后加入嘌呤霉素（优化剂量为1.5μg/ml）以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测两组ZBTB20，采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况，并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果 实验组ZBTB20mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组（P<0.05）。免疫组化试验结果显示，ZBTB20在阴性对照组...     

碳水化合物反应元件结合蛋白条件性基因敲除小鼠模型的建立及鉴定

目的 建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果 利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞（ES细胞）的基因同源重组,在ChREBP基因第8外显子的两侧分别引入loxP位点;将打靶成功的ES细胞显微注射至小鼠囊胚,然后植入假孕雌鼠子宫获得嵌合鼠,进一步获得可种系传代的ChREBP^flox/+小鼠;将ChREBP^flox/+小鼠与Alb-Cre小鼠交配,获得ChREBP的肝脏特异性基因敲除小鼠。结论 建立了ChREBP条件性基因敲除小鼠模型,为揭示不同组织中ChREBP的生理功能和病理学意义提供了重要手段。     

垂体催乳素细胞分化发育的研究进展

垂体前叶主要由5种内分泌细胞组成,其中催乳素细胞在胚胎期的分化过程与生长激素细胞有共同起源,出生后的细胞数量受激素等调节亦有很大可塑性。近年的研究发现,转录因子ZBTB20缺失可导致垂体催乳素细胞群特异性缺失,为其分化命运决定的机制研究提供了很好的动物模型。文章就垂体催乳素细胞的分化发育过程和调控机制的研究进展进行综述,以期完善人们对垂体内分泌细胞分化发育的认识,为深入研究垂体发育调控的分子机制提供新的思路,并可能为垂体相关疾病的防治提供新的靶点。