微血管内皮细胞在中医学研究中的地位探讨

微血管内皮细胞有多种重要功能，是当今生命科学领域的研究热点之一，通过对微血管内皮细胞的研究以探索中医学中的未知也是一个重要方向。本文结合已有的研究成果，通过对微血管内皮细胞功能、特性与中医学中几个概念相关性的比较，分析了微血管内皮细胞在中医学研究中的地位。     

犬SLAM受体mRNA荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

目的建立荧光定量PCR方法,检测犬不同组织中SLAM受体mRNA的表达水平。方法以犬GAPDH为内参基因采用△△Ct法,分析SLAM受体mRNA在犬体内不同组织中的表达。结果此方法有较高的重复性,变异系数在0.89%～2.35%。以SLAM受体在心脏的表达为1倍值,结果显示受体mRNA在脾脏中表达最高,为38.49倍;肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结中表达次之,分别为9.13、8.58、6.24倍;膀胱中表达最低。结论成功建立了检测SLAM受体mRNA在不同组织中表达水平的荧光定量PCR检测方法。     

三种免疫抑制药对分化的巨噬细胞表型和功能的影响

目的 探讨3种免疫抑制药(雷帕霉素、环孢霉素A和紫杉醇)在骨髓前体细胞分化过程中对分化的巨噬细胞表型和功能的影响.方法 取60只C57BL/6小鼠颈椎脱臼致死,无菌操作制备骨髓前体细胞,在细胞培养体系中分别加入雷帕霉素(100μmol/L)、环孢霉素A(1mg/L)和紫杉醇(20μg/L)和巨噬细胞集落刺激因子,通过混...     

人参皂苷Rb1巴布剂对微血管舒缩活动振幅影响的研究

目的： 探究人参皂苷Rb1巴布剂对微血管舒缩活动的影响。方法：运用智能透皮仪进行人参皂苷Rb1巴布剂体外透皮,收集接受液并用高效液相色谱分析。将巴布剂贴敷在志愿者的穴位区皮肤上,利用激光多普勒血流仪测定,并记录贴敷含药巴布剂前后穴位区皮内微血管的舒缩运动振幅。结果：随着透皮时间的延长,人参皂苷Rb1的累积透过率增多。人参皂苷Rb1巴布剂穴位贴敷引起微血管舒缩活动振幅均有显著提高（P<0.01）。结论：人参皂苷Rb1巴布剂给药系统可释放药物进入穴位区,提高穴位区皮内微血管舒缩运动振幅,达到针灸的效果,因此人参皂苷Rb1可以在临床上代替针灸,治疗疾病。     

乳酸抑制脂多糖介导的核因子-κB p65入核转录及环氧化酶-2转录

目的 探讨嗜酸乳杆菌代谢产物乳酸(LA)对内毒素(LPS)介导的NF-κB p65入核、转录及环氧化酶-2(COX-2)转录的抑制作用.方法 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为材料,设对照组、LPS组、LA预处理组和NF-κB特异性阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预处理组4个实验组.LPS作用30min后,Western blotting检测不同实验组细胞核、细胞质内NF-κB p65蛋白水平,LPS作用9h后,实时荧光定量PCR法检测NF-κB p65、COX-2 mRNA水平.结果 LPS作用30min后,各实验组细胞NF-κB p65蛋白总量差异不显著,但LA和PDTC预处理组细胞核内NF-κB p65比例显著低于LPS组;LPS作用9h后,LA和PDTC预处理组细胞NF-κB p65和COX-2 mRNA水平显著低于LPS组.结论 乳酸具有类似NF-κB阻断剂的作用,可以抑制LPS介导的NF-κB p65入核、转录,抑制NF-κB下游靶基因如COX-2的转录,从而发挥抗炎作用.     

4种中药提取物对大鼠小肠上皮细胞 IEC-6 增殖及其葡萄糖吸收的影响

目的 利用大鼠小肠上皮细胞系 (IEC-6),研究单味中药提取物对小肠上皮细胞增殖和葡萄糖吸收转运功能的调控作用。方法 藿香、苍术、黄柏和石膏等4种中药被定向提取,MTT 细胞增殖试验筛选提取物的适宜作用质量浓度,测定各处理组细胞的葡萄糖吸收率和 Na+,K+-ATP酶活性,同时采用荧光定量 PCR 技术分析细胞中钠-葡萄糖共转运载体 (SGLT1)、葡萄糖转运载体2 (GLUT2) 和Na+,K+-ATP酶的 mRNA 表达量。结果 各中药提取物对大鼠小肠上皮细胞增殖的影响与其作用质量浓度有关。50 μg/mL 苍术挥发油和 10 μg/mL 黄柏生物碱可提高 IEC-6 细胞葡萄糖的吸收功能,并显著上调了 SGLT1 和Na+,K+-ATP酶 mRNA 表达量;50 μg/mL 藿香挥发油促进了细胞的葡萄糖吸收,但仅对 GLUT2 的基因表达有上调效应 (P＜0.05);而 50 μg/mL 石膏水提物对细胞葡萄糖的吸收无促进作用 (P ＞0.05)。结论 苍术挥发油、藿香挥发油和黄柏生物碱对细胞增殖和葡萄糖吸收均有促进作用,但其影响机制并不完全一样。     

免疫抑制药对体外骨髓前体细胞向巨噬细胞分化的影响

目的 探讨细胞培养环境中添加免疫抑制药对骨髓前体细胞向巨噬细胞分化的影响. 方法 取C57BL/6小鼠颈椎脱臼致死,无菌操作制备骨髓前体细胞,在体外细胞培养体系中加入巨噬细胞集落刺激因子和三种免疫抑制药(雷帕菌素、环孢菌素A和紫杉醇),通过显微镜和流式细胞仪观察与检测诱导分化细胞的形态和细胞表面分子表达. 结果 骨髓前体细胞诱导分化的细胞具有典型巨噬细胞形态,细胞表面分子F4/80和CD11b表达都在95%以上,而CD11c表达极低,与对照组比较,诱导分化的巨噬细胞数明显减少,环孢菌素A对分化的巨噬细胞周期无影响,但紫杉醇明显增加诱导分化的巨噬细胞凋亡. 结论 3种免疫抑制药可能影响骨髓前体细胞向巨噬细胞分化.     

乳鼠心肌膜微血管内皮细胞的体外培养

目的 改进心肌膜微血管内皮细胞的体外培养方法,为进一步研究其结构和功能提供实验数据.方法 选取10～15d龄的SD大鼠,采用植块法培养原代心肌膜微血管内皮细胞,在继代培养中通过差速消化和差速贴壁方法、结合倒置显微镜下形态学的观察进行继代培养和纯化,利用免疫细胞化学方法检测第Ⅷ因子相关抗原对培养细胞进行了鉴定.结果 成功培养了大鼠心肌膜微血管内皮细胞,细胞呈多边形或鹅卵石状;免疫细胞化学染色第Ⅷ因子相关抗原显阳性.结论 改良了心肌膜微血管内皮细胞的体外培养方法,获得了较高纯度的心肌膜微血管内皮细胞,可用于进一步的科学研究.     

Alpha-亚麻酸对HepG2细胞脂肪酸合成关键基因的影响

目的探讨不同剂量Alpha-亚麻酸(ALA)对硬脂酸培养后的HepG2细胞脂肪酸合成基因表达的影响。方法 HepG2细胞分为对照组(NC)以及含有0.5 mmol/L硬脂酸的培养液培养高脂组(HF),培养36 h后应用实时定量PCR检测脂肪酸合成关键基因SREBP1C、FAS及ACC表达;基因表达存在显著差异后分别用10%、20%、50%、70%、100%ALA替代硬脂酸培养36 h,实时定量PCR和免疫印迹法检测上述基因mRNA水平及蛋白表达。结果硬脂酸处理后HepG2细胞SREBP1C、FAS及ACC基因显著升高(P0.001),ALA替代组SREBP1C基因mRNA表达水平均显著低于高脂组(P0.001),0.5 mmol/L ALA组及0.35 mmol/L ALA组FAS显著低于高脂组(P0.001),各替代组ACC基因mRNA水平与高脂组无统计学差异;替代组SREBP1C及FAS蛋白表达水平显著低于高脂组,而ACC蛋白表达量与高脂组无明显差异。结论硬脂酸促进HepG2细胞脂肪酸合成,ALA通过抑制SREBP1C及FAS基因表达来减弱脂肪酸合成。     

连翘酯苷对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖与分泌功能的影响

目的分析连翘酯苷(FS)对小鼠脾脏T和B淋巴细胞增殖、分泌NO和TNF-α的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法无菌操作分离小鼠脾脏,制备脾脏细胞并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刺激剂刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养不同时间,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的吸光度变化,ELISA和Griess法分别检测细胞分泌TNF-α和NO的水平。结果低浓度和中浓度FS对ConA诱导T淋巴细胞24 h和48 h后细胞增殖和存活率明显提高,诱导时间延长至72 h后FS明显抑制细胞转化；低浓度FS对LPS诱导脾脏B淋巴细胞24 h后细胞增殖和生存率显著提高；FS促进小鼠脾脏T和B淋巴细胞分泌NO；FS促进B淋巴细胞分泌TNF-α,中浓度FS促进T淋巴细胞分泌TNF-α而高浓度反而抑制其分泌。此外,FS对环磷酰胺(CY)处理小鼠的脾脏淋巴细胞体外增殖有明显影响,对细胞NO分泌影响不显著。结论结果提示FS可能通过影响小淋巴细胞增殖和细胞因子分泌而调节免疫细胞功能。