伴RUNX1突变的MDS患者临床特征及预后分析

目的 探究RUNX1突变在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者中的临床特征及预后影响。方法 收集2009年1月~2021年2月于上海交通大学医学院附属第六人民医院初诊的661例MDS患者的骨髓标本,采用二代测序检测一系列基因突变,重点回顾性分析RUNX1患者的临床特征、共同突变表达谱及预后意义。结果 661例MDS患者中,65例伴有RUNX1突变。与无RUNX1突变患者比较,RUNX1突变患者骨髓原始细胞比例增加(P＜0.001),其预后分层在修订国际预后积分系统(Revised International Scoring System,IPSS-R)较高危组和IPSS-M(IPSS-Molecular)高危/极高危组均占比较高(P＜0.001)。59例RUNX1突变患者同时存在其他基因突变,突变频率较高的是ASXL1(24.62%)、TET2(24.62%)、EZH2(21.54%)和U2AF1(21.54%)等,主要为表观遗传学基因(63.62%)和剪切子基因(38.46%)。相关性分析发现,RUNX1突变与EZH2、PHF6和U2AF1突变呈正相关(Q＜0.05)。RUNX1突变患者总体生存期较短(16个月 vs 47个月,P＜0.001),急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化风险较高(P＜0.001),但在RUNX1主克隆和亚克隆突变间患者总体生存差异无统计学意义。结论 RUNX1突变在MDS患者中发生率较高,且常伴有表观遗传学基因和剪切子基因突变。RUNX1突变预示着较短的总体生存期和较高的AML转化风险。     

DHX9调控白血病细胞增殖及凋亡的作用机制研究

目的 研究DHX9在白血病患者中的表达水平,以及对白血病细胞增殖及凋亡的影响和作用机制。方法 分析GEO数据库中白血病及对照样本DHX9基因表达情况,探索其表达差异。通过慢病毒感染人白血病细胞系K562,构建DHX9敲低细胞系。采用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,基因表达谱筛查DHX9潜在靶向通路,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法验证DHX9调控的机制。结果分析GEO数据库中的MILE研究(GSE13159),该研究纳入AML、MDS、CML及正常对照的基因表达谱分析,结果显示,AML组DHX9基因表达水平较对照组明显增高(P=0.007),较MDS组及CML组也明显增高(P均<0.001);而CML组DHX9表达明显低于AML组、MDS组及对照组(P均<0.001)。本研究构建了DHX9敲低的白血病细胞株K562(DHX9相对表达量为0.48±0.06,P<0.01)。与对照组比较,DHX9敲低的K562细胞呈现明显增高的自身凋亡率(P<0.001),对抗肿瘤药物阿扎胞苷(5-azacitidine,AZA)的凋亡敏感度也明显增加(P<0.05)。CCK-8增殖实验显示,DHX9敲低细胞增殖能力减弱(P<0.001)。通过基因表达谱分析获得了2264个差异基因,生物信息学分析显示,差异表达基因主要富集在癌症通路、凋亡和p53通路(P均<0.001)。Western blot法检测结果显示,DHX9敲低增加凋亡相关蛋白caspase-9的表达,降低Bcl-2表达。结论 从正常对照到MDS再到AML,DHX9表达逐步增加预示较高的肿瘤增殖度和白血病转化风险,DHX9可能通过抑制p53介导的细胞凋亡促进白血病细胞增殖。