GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达

目的：制备生长激素释放激素受体剪接变异体1（GHRHR-SV1）抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法：设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a（+）中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21（DE3）中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^-1异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）;诱导1、2、4和6 h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果：重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0 mmol·L^-1时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2 h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1：1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论：成功制备pET-GHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0 mmol·L^-1、诱导时间为2 h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。     

白芍总苷对NAFLD大鼠HMGB1，TLR4通路的干预作用

目的:探讨白芍总苷(TGP)对高脂-果糖诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),Toll样变体4(TLR4)信号通路的影响及其作用机制。方法:用高脂-高果糖餐诱导NAFLD大鼠模型,除设正常组外,将模型大鼠随机分为模型组,水飞蓟宾组,二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),TGP高、低剂量组(200,100 mg·kg~(-1)·d~(-1))。用药6周后观察各组大鼠空腹血糖(FBG),餐后2 h血糖(2 hBG),胰岛素(Fins),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),甘油三酯(TG),游离脂肪酸(FFA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和肝脏指数;并以免疫蛋白印迹法(Western blot)检测肝组织中HMGB1,TLR4蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组转氨酶,肝脏指数,血脂,2 hBG,Fins,HOMA-IR及TLR4,HMGB1蛋白均明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,TGP高、低剂量组2 hBG,Fins,HOMA-IR,LDL-C,TG,TC,FFA,ALT,AST均明显降低(P0.05,P0.01),高、低剂量TGP在拮抗胰岛素抵抗、降糖降脂,改善肝功能有较显著的作用,TGP高、低剂量组均可下调HMGB1,TLR4蛋白的表达(P0.01)。结论:在NAFLD病程进展中,HMGB1,TLR4是导致炎症的其中一条通路,TGP通过下调HMGB1,TLR4信号通路的表达而起到抑制大鼠NAFLD炎症发展的作用。     

基于UPLC-Q-TOF-MS的砂糖橘皮化学成分分析

目的:通过超高效液相色谱串联-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术对砂糖橘果皮化学成分进行快速分析和鉴定。方法:采用Aglient Zorbax Extend C_(18)色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱进行色谱分离,流速0.6 m L·min~(-1),柱温35℃,进样体积0.5μL。飞行时间质谱,采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,质量扫描范围设置为m/z 100~1 000,运行时间24 min,使用质谱分析软件Peak view中的目标化合物筛查法,结合保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定和推测成分。结果:在所设定的LC-MS条件下,结合对照品及文献报道的质谱数据对砂糖橘果皮的甲醇提取液分析,共分离鉴定了31个成分,包括5个黄酮碳苷,6个黄酮氧苷,17个多甲氧基黄酮,1个生物碱和2个多酚类化合物。结论:研究中建立的检测方法简便、准确,为快速鉴定分析化学成分提供一种有效的分析方法,并比较全面地阐明了砂糖橘果皮化学组成,这为砂糖橘果皮成为供开发利用的柑橘资源提供科学依据。     

疫情防控期间利用微信调查早产儿养育状况及对策

目的 新型冠状病毒肺炎疫情环境下,本科医学生利用微信群进行早产儿家庭养育环境和亲职压力的调查,并给予相应的个体化养育指导.方法 选取问卷编制成问卷星发布于家长群,分析家长的答卷后提出建议,以协助提高养育质量.结果 本次调查收回"早产儿父母一般资料"69份、"简式亲职压力量表"43份、"0—1岁家庭养育环境评价量表"40份,36人完成三份问卷,7人完成了其中两份.通过个体化分析,形成83份有针对性的反馈和养育指导策略,得到家长的积极反应.结论 此次调查研究适应疫情防控要求,既关注到特殊环境下早产儿家庭的养育压力,为之提供指导进而改善养育质量,又实现了医学本科生早期科研实践的教学初衷.     

UPLC-MS/MS分析及NMR技术鉴定千金子中二萜类化合物

目的 研究千金子乙酸乙酯提取部分的二萜成分。方法 利用乙醇回流提取法进行提取,超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS/MS）结合对照品分析千金子乙酸乙酯部分化学成分;用硅胶和Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶色谱技术进行分离;用核磁共振法对化合物12进行结构鉴定。结果 千金子乙酸乙酯提取部分的12个化合物分别鉴定为千金子素（euphorbia factor,EF）L25（1）、EFL1（2）、EFL13（3）、EFL7b（4）、EFL12/EFL12异构体（5）、EFL18（6）、EFL17（7）、EFL3（8）、EFL7a（9）、EFL23（10）、EFL11（11）、EFL2（12）。结论 基于对照品的UPLC-MS/MS结合传统提取分离法是用于研究千金子乙酸乙酯提取部分化学成分的有效方法。     

基于中医传承辅助平台研究潘俊辉辨治肺癌用药规律

目的：基于中医传承辅助平台研究潘俊辉教授治疗肺癌的用药规律,为制定“岭南平治肺病”的肺癌治疗方案提供参考。方法：收集2019 年5 月—2021 年4 月潘俊辉教授在门诊治疗肺癌的医案资料,按照纳入标准与剔除标准筛选后录入中医传承辅助平台V2.5,建立资料库,并进行系统分析。统计用药频率;运用Apriori 算法和关联规则分析提取处方的核心组合（设置支持度0.45,置信度0.8）;运用复杂系统聚类分析对内部核心药物组合与新方组合（设关联度12,惩罚度7） 进行挖掘。结果：共纳入163 份医案,共计796 首方,涉及150 味中药。单味药物频次前10 位者,从高到低依次是红景天、紫河车、炙甘草、醋莪术、瓜蒌皮、薤白、姜半夏、淫羊藿、黄芪、白术。核心药物组合中高频组合前10 位,从高到低依次是：炙甘草-紫河车,炙甘草-红景天,瓜蒌皮-紫河车,瓜蒌皮-薤白,瓜蒌皮-红景天,姜半夏-红景天,紫河车-薤白,紫河车-红景天,紫河车-醋莪术,薤白-红景天;其中,红景天、紫河车、瓜蒌皮、薤白、醋莪术、炙甘草、姜半夏等在多个药物组合中多次出现,为关联网络的核心。获得潜在新方10 首,包括薏苡仁-苇根-桃仁-地骨皮-冬瓜子、熟党参-薤白-广升麻-北柴胡-姜半夏-瓜蒌皮、白芍-熟地黄-紫菀-桃仁-红花-酒川芎等。结论：潘俊辉教授临床辨证论治肺癌以扶正祛邪为原则。以温肾清肺为根本治疗大法,辅以化瘀软坚散结、活血健脾补气、祛风通络化痰。     

杨群玉治疗脑卒中后情志障碍经验

总结杨群玉教授治疗脑卒中后情志障碍经验。杨群玉教授以"因病致郁"认识病机,认为卒中后抑郁根本病机在于肝郁脾虚,心神失精血滋养,加之痰瘀互阻络道,阴阳失交;卒中后焦虑根本病机为肝肾阴亏,痰、郁、瘀结聚,心脾失养,虚阳浮越。依据虚实分立方药,标实宜"和解",方选柴胡加龙骨牡蛎汤加减以和解枢机,清热通络安神;本虚在肝肾精血俱亏,以桂枝甘草龙骨牡蛎汤合二至丸与左归饮,降逆冲,振心阳,养肝肾之阴精,清浮越之虚火;治疗全程不忘祛痰化瘀,以枳术丸调理脾胃,健脾祛湿杜生痰之源;调整生活方式,防中风反复。     

圆锥动脉干畸形的产前超声诊断进展

<正>圆锥动脉干缺损所致的先天性心脏病又称圆锥动脉干畸形(conotrucal anomaly,CTA),是指一组由于圆锥动脉干在胚胎发育过程中出现异常所导致的先天性心脏畸形。主要包括法洛四联症(Tetralogy of Fallot,To F)、完全型和矫正型大动脉转位(transposition of great arteries,d-TGA and cc-TGA)、右心室双出口(double outlet right