中枢神经肿瘤细胞核DNA的图像定量分析(摘要)

中枢神经肿瘤细胞核ＤＮＡ的图像定量分析（摘要）朱晓慧张传山晏培松李青马福成陈万录王文亮（第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）目的：研究ＤＮＡ图像分析在中枢神经良、恶性肿瘤中的辅助判定标准和应用价值。方法：应用组织化学方法结合图像分析技术，测定...     

慢性乙型肝炎肝内HBV DNA和HBsAg的双标记定位研究

应用原位杂交和免疫组化PAP法双标记技术,结合病人乙型肝炎(乙肝)病毒血清学标志物检测结果,研究了31例慢性乙肝病人肝穿刺组织中乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)和HBsAg的分布及意义。结果显示,肝组织内检出HBV DNA 23例,HBsAg 26例,二者同时检出者21例。从同组病人肝组织内HBV DNA和HBsAg双标检测结果与其乙肝病毒血清学标志物检测结果的比较来看,肝组织内HBV DNA和HBsAg同时阳性很可能表明HBV正处于复制及表达的活动状态。     

Ⅰ型胶原膜、胞外基质提取物膜体外构建人工真皮能力比较

比较Ⅰ型胶原与胞外基质(extracellularmatrix,EM)提取物冻干后形成的膜(EM膜)在体外构建人工真皮的能力,以选择一种更有利于人工真皮形成的支架材料。方法分别使用小牛真皮部分提取的Ⅰ型胶原蛋白和胞外基质提取物冻干后制备基质网架,植入皮肤成纤维细胞,形成人工真皮。用扫描电镜观察I型胶原膜和EM膜的表面形态结构;选取不同的时间点,对种植于两种支架材料上的细胞进行计数,并利用间接ELISA方法检测人工真皮复合物中的细胞Ⅰ型胶原分泌情况,通过统计学的分析手段,对细胞的生长情况做出判断;用组织学方法观察人工真皮的形成情况。结果扫描电镜观察结果,两种膜在外观形态上无明显差异;细胞在EM膜上的增殖速度较Ⅰ型胶原膜快;ELISA分析显示,EM-细胞复合物中的成纤维细胞能够分泌更多的Ⅰ型胶原;与Ⅰ型胶原膜相比,EM在培养液中的降解更为缓慢,种植后的成纤维细胞在EM膜上生长旺盛,细胞层次明显多于前者,形成了较为明显的真皮样组织。结论EM膜适于成纤维细胞的生长,体外降解速率慢,是一种较Ⅰ型胶原膜更为理想的真皮支架材料。     

差异筛选肝癌凋亡细胞cDNA文库的简便方法

目的差异筛选人肝癌凋亡细胞ｃＤＮＡ文库。方法消减杂交和点杂交相结合的噬菌斑原位杂交法筛选ｃＤＮＡ文库，首先采用（－）ｃＤＮＡ探针杂交，挑取（－）的噬菌斑克隆，再用（－）和（＋）两种ｃＤＮＡ探针与初筛出的噬菌斑克隆杂交的差异筛选方法。结果得到４个充分孤立的噬菌斑克隆，其插入片段长度为１．５ｋｂ左右。结论该方法简便、快速，是差异筛选ｃＤＮＡ文库的一种较为可行的简便方法。     

树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究

目的：研究树突状细胞(dendritic cell，DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法：用顺序特异引物聚合酶链反应技术(PCR—SSP)选择HLA—B7表型供者，从脾组织中分离、培养DC-EPVTKAEML特异性CTL。用^51Cr释放法检测CTL的杀伤活性，并用抗HLA-1分子单抗(mAb)进行杀伤抑制实验。结果：找到4例HLA-B7杂合子供者，用DC负载HLA-B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应，对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论：DC负载抗原肽EPVTKAEML在体外可诱发较强的特异性免疫反应。     

肝硬变,病毒性肝炎及正常肝组织中间隙连接蛋白Cx32的表达

间隙连接（ｃｏｎｎｅｘｉｎ，Ｃｘ）是细胞间的蛋白通道结构，由相邻胞膜上的连接子（ｃｏｎｎｅｘｏｎ）相互衔接而成。通过Ｃｘ介导的细胞间连接通讯（ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ），对细胞的增殖、分化进行...     

鼻咽喉部淋巴瘤免疫表型与发病部位的关系

鼻咽喉部淋巴组织丰富，是淋巴瘤的好发部位，非何杰金氏淋巴瘤（NHL）在此部位的淋巴瘤中占绝对优势。根据WHO关于淋巴瘤新的分类方案，NHL可分为B细胞淋巴瘤和T/NK细胞淋巴瘤两大类，每一大类进一步又分为不同的型，不同的免疫表型具有不同的临床病理和预后特征。鉴于我国淋巴瘤的类型及部位分布与西方国家存在一定差异，     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

肝癌特异性超抗原SEA(D227A)基因表达载体的构建与表达

目的：构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体，将SEA(D227A)特异性的表达于AFP阳性肝癌细胞膜表面。方法：PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)。将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)—linker—CD80tm)。通过脂质体介导，以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系，用RT—PCR和间接免疫荧光染色，检测SEA的表达。结果：成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，酶切鉴定和DNA序列分析无误，RT—PCR和间接免疫荧光法检测证实，SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达。结论：AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建，为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础。     

兔抗MAGE-n血清的制备、纯化及鉴定

目的: 制备高效价、特异性的兔抗人MAGE-n血清。方法: 对原核表达的MAGE-n蛋白进行纯化, 与弗氏佐剂混合免疫新西兰兔制备抗血清, 用硫酸铵盐析法及溴化氰活化的Sephrose4B(CNBr-ActivatedSephrose4B)亲和层析柱纯化抗血清, 以双向免疫扩散实验、ELISA、Westernblot和免疫组化对兔抗人MAGE-n血清进行鉴定。结果: 经免疫得到高效价的兔抗人MAGE-n血清, 抗血清能够与MAGE-n特异性结合, 免疫组化结果表明MAGE-n是一种胞质蛋白。结论: 用MAGE-n蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔, 制备得到高效价的抗血清, 纯化后的特异性兔抗人MAGE-n血清, 为进一步研究MAGE-n在各种组织中的表达奠定了基础。