增塑剂邻苯二甲酸二丁酯低剂量与神经系统毒性效应的评估

目的:探讨增塑剂邻苯二甲酸二丁酯低剂量暴露对PC12细胞的毒性效应与作用机制,为接触人群产生远期效应的生物学检测提供参考评价指标。方法:体外培养神经细胞株PC12细胞,培养基分别含有12.5,25,50,100,200mg/L邻苯二甲酸二丁酯,作用24,48,72和96h后,用细胞计数细胞毒法检测细胞的存活和生长;椎虫蓝拒染法绘制生长曲线;乳酸脱氢酶释放检测细胞损伤程度;DNTB法测定谷胱苷肽过氧化物酶活性,丙二醛比色法测定丙二醛含量;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果:①细胞毒检测结果显示浓度在12.5～200mg/L的邻苯二甲酸二丁酯剂量暴露对PC12细胞株处理24～96h,对PC12细胞生长存在显著的抑制作用,并呈剂量-效应关系。各实验组在各时相点与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。②PC12细胞暴露于邻苯二甲酸二丁酯48h,乳酸脱氢酶释放增多,谷胱甘肽过氧化物酶活性降低,丙二醛含量增高;且随着邻苯二甲酸二丁酯的暴露剂量的上升乳酸脱氢酶浓度相应升高。而邻苯二甲酸二丁酯的暴露剂量的变化与谷胱甘肽过氧化物酶活性呈反比关系,与丙二醛含量呈正比关系。③DNA凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形条带。结论:不同剂量的邻苯二甲酸二丁酯暴露对PC12细胞的增殖具有显著的抑制作用,且在低剂量慢性暴露条件下对细胞产生以细胞凋亡为主的毒性效应;主要干扰神经细胞的DNA代谢,直接抑制PC12细胞生长,降低脂质过氧化物酶活性,产生氧化应激,诱导神经细胞凋亡。     

人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达

目的 构建和鉴定人β防御素2（HBD2）的重组腺病毒表达载体，并观察其转染大鼠真皮多能干细胞（dMSCs）后的表达。方法反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增HBD2全长cDNA，亚克隆至穿梭质粒（pAdTrack-CMV）中，然后转化含骨架质粒（pAdEasy-1）的大肠杆菌BJ5183，通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞，包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞，并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果 经测序、酶切及聚合酶链反应（PCR）鉴定，表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA，并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中，进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs，并有效表达HBD2。结论 本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体，并证实其可在dMSCs中表达。     

安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c～Jun激活区结合蛋白1（JAB1）蛋白表达变化，探讨安定一氯胺酮对其表达变化的影响。方法将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组，即对照组、严重烧伤组、安定～氯胺酮组和严重烧伤后安定～氧胺酮处理组，以20％～30％体表总面积（TBsA）Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型，肌肉注射安定0．4mg／kg、氯胺酮10mg／kg给予麻醉。收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白，运用Westernblotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化。结果在严重烧伤后30min，小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低（P〈0．05），于6h时达到最低（P〈0．01），严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平。然而，严重烧伤后应用安定氯胺酮麻醉，小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义。结论严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降，而严重烧伤后应用安定一氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调。     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染HL-60细胞放射敏感性的影响

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其可能机制.方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα),转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后,对细胞进行RA和辐射联合处理,分析细胞增殖功能、细胞DNA片段化百分率,caspase-3蛋白表达与活性,以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和/或辐射的效应的拮抗作用.结果 HL-60和HL-60IFNα细胞经2×10-7mol/L RA和/或4 Gy 60Co γ射线电离辐射处理后,细胞增殖能力减弱,DNA片段化百分率增加,caspase-3蛋白表达上调,活性升高,RA和辐射联合处理作用更明显,DEVD-CHO可拮抗RA引起的caspase-3活性升高,并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡.结论 RA及其诱导的外源性IFNα可提高肿瘤细胞放射敏感性,caspase-3的表达和活性升高在RA和辐射诱导细胞凋亡过程中可能具有重要作用.     

重组小鼠凝血因子Ⅶ毕赤酵母表达载体的构建及整合体的筛选

目的构建无凝血活性的重组小鼠凝血因子Ⅶ(rmFⅦ)毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得rmFⅦ蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础。方法PCR扩增得到mFⅦ基因片段,插入酵母表达载体pPIC9K的α分泌信号开放阅读框的下游,再经定点突变(K341A)得到pPIC9KrmFⅦ,测序正确的质粒用SacⅠ线性化后电穿孔转化毕赤酵母GS115,G418梯度筛选转化菌,PCR鉴定目的基因的整合。结果获得了rmFⅦ毕赤酵母表达载体pPIC9KrmFⅦ,G418抗性筛选得到高拷贝菌株,PCR证实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中。结论成功构建了rmFⅦ毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株,为大规模表达纯化rmFⅦ蛋白及后续研究奠定了基础。     

轻度肠型放-烧复合伤救治的实验研究

目的探讨颈交感阻滞、壳聚糖包裹的pVITRO3-HD5-GLP2纳米粒联合L203对轻度肠型放-烧复合伤小鼠的治疗作用,探索救治肠型放-烧复合伤的综合措施.方法 TBSA15%Ⅲ度烧伤合并10 Gy放射损伤小鼠分为综合救治组及复合伤对照组,观察两组动物的平均存活时间以及小肠湿重、小肠隐窝细胞早期凋亡、恢复期增殖和肠道细菌移位等相关指标.结果综合救治可以使放-烧复合伤后动物平均存活时间延长;减轻小肠湿重的降低程度,减少肠隐窝细胞凋亡,促进恢复期肠上皮的增殖以及减少肠道细菌移位的发生.结论综合救治措施可以改善肠型放-烧复合伤肠道的损伤,延迟小鼠的死亡时间.     

NAP-2和PF-4在烧伤后大鼠骨髓巨核细胞表达变化情况

目的 观察大鼠30%Ⅲ度烧伤后趋化因子NAP-2和PF-4在大鼠骨髓巨核细胞的表达变化情况.方法 采用免疫组织细胞化学的方法观察烧伤后24h和15d NAP-2和PF-4表达情况.结果 大鼠烧伤后24h骨髓巨核细胞特异分泌的趋化因子NAP-2和PF-4明显低于正常组,烧伤后15d巨核细胞表达NAP-2和PF-4较烧伤后24h恢复,但仍低于正常对照组.结论 严重烧伤可以导致大鼠骨髓巨核细胞分泌特异趋化因子NAP-2和PF-4的能力减退.     

抑郁对大鼠创面愈合过程中胶原含量的影响

目的 观察抑郁复合皮肤创伤大鼠创面肉芽组织的胶原含量,初步探讨抑郁影响创面愈合的可能机制.方法 根据建模方法将126只SD大鼠随机分为单纯皮肤创伤组、皮肤创伤复合抑郁组、抑郁复合皮肤创伤组,采用羟脯氨酸试剂盒检测创面组织的羟脯氨酸含量,苫味酸天狼猩红染色后偏振光显微镜下观察各组各时相点创面的胶原沉积情况.结果 抑郁复合皮肤创伤组大鼠创面肉芽组织中的羟脯氨酸含量及胶原沉积量持续低于其余两组(P<0.01,P<0.05),伤后18 d,与皮肤创伤复合抑郁组趋于一致.结论 抑郁复合皮肤创伤可显著降低创面组织羟脯氨酸的合成,减少胶原纤维沉积,从而延缓伤口愈合.     

重组融合蛋白rTMP-GH促进放射损伤小鼠 血小板生成的实验研究

目的 研究TPO模拟肽(TMP)与人生长激素(GH)的重组融合蛋白rTMP-GH对放射损伤小鼠血小板生成的促进作用。方法 ⁶⁰Coγ射线全身一次性均匀照射5 Gy,照后皮下注射200 μg／kg 的rTMP-GH或rhGH,每日1次,连续用药7 d,对照组给予同等体积生理盐水。尾静脉取血检测血小板数量变化;照后16 d取小鼠股骨,组织切片观察骨髓病理变化。结果 照后10 d起,rTMP-GH处理组各时相的外周血血小板数明显高于rhGH处理组和生理盐水对照组,尤其是血小板的最低值显著升高( P <0.01),照后22 d已升至正常水平的80%,对照组仅为30%。骨髓病理观察显示,rTMP-GH处理组骨髓造血重建明显,并见大量不同时期巨核细胞;rTMP-GH处理组骨髓组织切片每个视野下的巨核细胞平均数(3.07±0.32)明显高于rhGH处理组(2.20±0.22, P <0.05)和生理盐水对照组(0.87±0.19, P <0.01)。结论 rTMP-GH能快速、有效地促进放射损伤小鼠骨髓巨核细胞增生和血小板生成。