XAF1基因重组腺病毒载体的构建及其在人肝癌细胞体内外的表达

目的利用携带35型腺病毒纤毛的嵌合型5型腺病毒载体系统Ad5/F35构建XAF1基因重组腺病毒,体内外感染人肝癌细胞SMMC7721并使XAF1基因有效表达。方法将真核表达质粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭质粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、筛选、测序获得重组穿梭质粒pDC316-XAF1。将测序正确的pDC316-XAF1和骨架质粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,得到重组腺病毒Ad5/F35-XAF1。予终点稀释法测定重组腺病毒的感染滴度。用同样的方法得到携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告病毒Ad5/F35-EGFP。建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,将Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC7721和瘤内注射;荧光显微镜观察EGFP在细胞和移植瘤冰冻切片中的表达;RT-PCR和Westrenblot法检测XAF1的mRNA和蛋白在细胞和移植瘤组织的表达。结果重组腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌细胞和瘤内注射后,予荧光显微镜均可见细胞和冰冻切片中呈现绿色荧光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌细胞和瘤内注射后,XAF1mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和报告病毒组。结论成功构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP。该腺病毒载体可携带目的基因在人肝癌细胞株SMMC7721体内和体外进行有效表达。     

球内异物74例手术疗效分析

目的:分析不同的手术方法治疗眼球开放性外伤后球内异物的手术效果。方法:对74例(均为单眼受伤)开放性眼外伤合并球内异物的临床资料进行回顾性分析。结果:手术取出异物后保住眼球71眼（96%）,未保住眼球3眼（4%）。成功的71例,均完整取出异物。其中42例并发外伤性白内障(42/74,57%),18例并发玻璃体积血(18/74,24%),2例并发视网膜脱离(2/74,3%),9例继发性青光眼(9/74,12%)。其中44眼行巩膜外路电磁铁吸出异物,30眼采用玻璃体切除术取出异物。失败3例（3/74,4%）皆未完整取出异物,术后合并真菌性眼内炎而行眼球摘除术。结论:对于合并有晶状体、玻璃体混浊的眼内异物、后极部异物需行玻璃体切除术,赤道前、定位准确的磁性异物,以巩膜外路磁吸术为宜。而最终能否保住眼球和手术是否完整取出异物有一定关联。     

Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响

背景：研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的：观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法：取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6＋氧化低密度脂蛋白组。结果与结论：与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加（P〈0.05）。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6＋氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低（P〈0.05）。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。     

硫化氢对急性马尾神经损伤模型大鼠的神经保护作用

背景：研究发现内源性硫化氢可以作为一种新型气体信号分子,具有重要的信号传递功能和生物调节作用。目的：研究硫化氢对急性马尾神经损伤大鼠的神经保护作用。方法：将72只SD大鼠随机均分为3组,实验组、模型组咬除L4椎板,将长10 mm、厚1.0 mm、宽1.0 mm的硅胶条植入大鼠L5和L6椎管内,建立大鼠马尾神经压迫损伤模型;假手术组仅咬除L4椎板,未植入硅胶条;实验组造模前1 h腹腔注射20μmol/kg的NaHS,模型组与假手术组腹腔注射等量生理盐水。造模后12,24,48,72 h检测马尾神经组织中丙二醛和谷胱甘肽水平,同时在48 h取材进行苏木精-伊红染色和TUNEL染色。结果与结论：苏木精-伊红染色显示,假手术组马尾神经纤维致密有序,髓鞘完整,轴突无肿胀;模型组马尾神经纤维松散,脱髓鞘改变,部分轴突及髓鞘肿胀;实验组马尾神经纤维紧密,少量轴突肿胀、脱髓鞘改变。TUNEL染色显示,假手术组中脊髓和背根神经节组织中阳性细胞数量较少,模型组脊髓和背根神经节中可见大量阳性细胞,实验组阳性细胞数量显著低于模型组。假手术组、实验组丙二醛水平低于模型组（P 〉0.05, P 〉0.01）,谷胱甘肽水平高于模型组（P 〉0.05,P 〉0.01）。表明硫化氢可以降低氧化应激反应,保护急性损伤大鼠马尾神经。     

1例尿激酶静脉溶栓致过敏性休克的急救护理

尿激酶是从健康人尿中提取的一种尿蛋白水解物,其药理作用是可以直接使纤维蛋白溶酶原转变为纤维蛋白溶酶,从而溶解血栓,用于急性心梗、肺栓塞、脑血管疾病栓塞和外周动静脉栓塞等疾病治疗,临床已经广泛使用,其主要不良反应为出血。过敏反应相当罕见。     

多糖的研究进展-多糖对机体免疫功能的影响

多糖是自然界中含量最丰富的生物聚合物，广泛分布于植物、动物和微生物中。它是由单糖聚合成的天然高分子化合物，是维持生命机器正常运转的基本物质之一。多糖具有能量储存、结构支持、防御功能和抗原定性等多方面的生物功能。近年来，多糖成为天然药物研究的一个热点。例如癌症的免疫调节治疗、抗病毒等。据统计，现世界上生产的抗肿瘤药物中的40％是免疫治疗药物，可见对免疫调节剂的研究受到世界各国科学家的极大重视。     

亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的 观察乙酰化的低密度脂蛋白(AcLDL)对血管平滑肌细胞亲脂素(adipophilin)表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响.从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用.方法 以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞(HVSMCs).应用Northern印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响;以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响.结果 AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达,沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取(降低38.7%,P<0.05)和脂质集聚能力下降(甘油三酯、总胆固醇分别下降30.6%和29.8%,均P<0.01).结论 亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL,增加HVSMCs脂质集聚,这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一.     

经皮复位空心螺钉内固定治疗髌骨纵形骨折

目的探究分析经皮复位空心螺钉固定治疗髌骨纵行骨折的临床治疗效果,以期为提高髌骨骨折临床治疗提供有效依据。方法对2010年9月—-2012年9月共8例髌骨纵行骨折患者行经皮复位空心螺钉内固定术,术后第1天,鼓励患者床上进行股四头肌主动收缩舒张训练,术后3d进行助步器辅助下部分负重,术后1周后进行无辅助全负重训练,术后4周后恢复正常行走。术后4—6周门诊复查膝关节正侧位片。术后随访9—18个月,平均12个月,并依据Lyshdm膝关节评分标准进行膝关节功能评估。结果全部患者均获随访,通过随访调查,8例患者髌骨骨折均愈合良好。较传统开放手术,此方法手术切口小、术中出血量少、患者住院时间较短及功能锻炼早,患者术后膝关节功能恢复良好。Lysholm膝关节评分为93～98分,平均95分,优良率为100％。结论对单纯髌骨纵行骨折患者行经皮复位空心螺钉内固定治疗可获得较为满意的疗效,且手术时间短,手术创伤少。避免了开放手术导致的术后伤口感染、延迟愈合、不愈合、关节粘连等相关并发症发生。基本不破坏髌骨血液供应,操作易于掌握,能促进患者早期功能锻炼,康复快,保证其预后质量,临床效果显著,值得推广。     

糖尿病视网膜病变中内质网应激和HIF-1对VEGF的调控机制研究进展

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病严重的微血管并发症之一,可导致不可逆的失明,DR的基本病理改变是血一视网膜屏障破坏和新生血管形成,而血管内皮生长因子（VEGF）是公认的最重要的眼内新生血管生长因子。近来研究发现,内质网应激（ERS）和低氧诱导因子-1（HIF-1）能够调控VEGF的表达,共同促进DR的病程发展。该文就ERS和HIF-1对于VEGF的调控机制方面的研究进展进行综述。     

乌司他丁对小鼠不同程度肠缺血-再灌注损伤的作用

目的观察乌司他丁对小鼠轻、重度肠缺血再灌注（I／R）损伤的作用。方法建立缺血时间分别为90min和180min的小鼠轻度肠I／R损伤模型（模型1）和严重肠I／R损伤模型（模型2）。动物随机分为正常对照组、假手术组、模型1对照组和治疗组、模型2对照组和治疗组,共六组（n=10）。模型1和模型2治疗组小鼠均于缺血结束后再灌注前即刻尾静脉注射乌司他丁16IU／g,相应对照组于缺血结束再灌注前注射等体积的生理盐水,再灌注2h后于下腔静脉采血。观察小肠黏膜的大体损伤情况;采用Chiu氏评分法对小肠病理损伤程度进行评分;检测黏膜髓过氧化物酶（MPO）活性;采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-d（TNF-α）和白介素-6（IL-6）水平。结果正常对照组和假手术组小鼠肠黏膜结构正常,其余各组小鼠均有明显肠黏膜损伤,并伴有黏膜MPO活性增加及血清TNF-α和IL-6水平升高。与相应对照组比较,模型1治疗组小鼠的肠黏膜损伤显著加重,Chiu氏评分显著升高（P〈0．01）;但模型2治疗组小鼠的小肠损伤明显减轻,Chiu氏评分显著降低（P〈0．01）。模型1和模型2治疗组小鼠的血清TNF-α、IL-6水平及MPO活性均明显低于其相应对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论乌司他丁治疗可减轻严重肠I／R损伤但加重轻度肠I／R损伤,这一作用可能与其抗炎作用有关。