人巨细胞病毒pp150基因的原核表达及抗原性分析

①目的 构建人巨细胞病毒（HCMV）PP150的原核高效表达系统，制备用于急性，活动性HCMV感染血清学诊断的基因工程抗原。②方法 PCR扩增HCMV PP150抗原决定簇（840-1048aa）编码基因片段，分别插入原核表达载体PMAL-p2,pet-28a，转化宿主菌E.coli.诱导表达，经麦芽糖亲和层析树脂纯化，以WesternBlot及间接ELISA法鉴定及其抗原性。③结果 重组表达质粒PMAL-P2-PP150可在E.coli.5DH5a中有效表达，表达产物经SDS-PAGE电泳后，凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为6.4万，约占菌体蛋白的10%。而重组质粒pET-28a-pp150未见明显表达带，Western-Blot检测，阳性识别率为80%（12/15）。用此蛋白包被ELISA板，检测正常孕妇血清，阳性率为6.5%(17/263)。与本室制备的全病毒抗原的ELISA的诊断符合率为96%。④结论此重组蛋白具有良好的抗原性，进一步完善后可用于HCMV急性和活动性感染的诊断。     

青少年近视患者配戴渐进多焦眼镜的视光学检查现状初步分析

目的:调查青少年近视患者配戴渐进多焦眼镜的现状,分析其对眼部参数的影响。方法:随机抽查配戴渐进光眼镜的近视患者214名,对其进行视光学检查,包括屈光度、斜视度、AC/A率、辐接近点和融合范围等项目,并调查其心理感受。其检查结果与256名年龄相匹配的戴用单焦眼镜的近视患者相对照,分析其变量的变化。结果:配戴渐变多焦眼镜的近视患者中140例无不适感觉,满意程度明显高于对照组;屈光度平均为-3.5D,约半数患者(48.6％)存在不同程度的外隐斜,其中8位是间歇性外斜患者,没有融合能力,辐辏近点大于20 cm;平均AC/A率为(2.95±1.49),平均融合力为+16.41°～-7.06°,平均辐转近点为(72.63±24.42)mm。实验组除AC/A率低于对照组(t=3.52,P<0.05),且与屈光度无明显相关(r=-0.0318,P>0.05)外,其余检查与对照组之间没有显著性差别。结论:渐进多焦眼镜可以引起AC/A率降低,并有可能通过掩饰间歇性外斜患者 的症状而耽误其治疗。因此,渐进多焦眼镜虽然普遍受青少年近视患者欢迎,但验配中仍存在适应证选择问题,青少年在验配时最好在医生的指导下进行。     

硒对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺超微结构的影响

目的 观察硒干预后自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺超微结构改变,探讨硒对甲状腺自身免疫损伤反应的影响.方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠模型,对患病大鼠预防性和治疗性给予亚硒酸钠,观察其干预后甲状腺病理组织学变化和超微结构改变.结果实验结束时,硒预防EAT组和硒治疗EAT组TgAb、TmAb水平与EAT组相比明显下降(P＜0.05),且光镜下炎性细胞浸润明显减少,滤泡破坏减轻.电镜下EAT组大鼠主要表现为部分滤泡上皮细胞断裂,内质网高度扩张水肿,线粒体明显减少,部分线粒体嵴消失.硒预防组和硒治疗组均可见滤泡形态较规则,内质网扩张程度减轻,线粒体增多且结构趋于正常.结论 硒可预防和减轻自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺的免疫性损伤.     

心力衰竭大鼠左室组织Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化及苯那普利的干预作用

目的： 观察慢性心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化，以阐明该信号转导通路在心力衰竭发病中的作用。 方法: SD大鼠分为3组：对照组、心衰组和苯那普利干预组。心衰组大鼠腹腔注射阿霉素累积剂量达 20 mg·kg^-1 BW 制作慢性心力衰竭模型，苯那普利组大鼠腹腔注射阿霉素同时给予苯那普利 10 mg·kg^-1·d^-1。4周后大鼠经颈内动脉插管至左心室行血流动力学测定，心肌组织中Gαq/11蛋白表达采用Western印迹法，磷脂酶C活性测定采用酶水解同位素底物法。 结果: 心衰组大鼠左室压力最大上升速率（+dp/dt_max）和最大下降速率（-dp/dt_max）均显著低于对照组，其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著高于对照组(P<0.01)。苯那普利组大鼠±dp/dt_max均显著低于对照组但高于心衰组(P<0.05)，其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著低于心衰组但高于对照组(P<0.01)。结论: 心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径活性显著升高，该信号通路的过度活化可能在心衰的发生中起到一定的作用,ACEI类药物苯那普利可部分逆转心衰大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的激活。     

山东沿海地区碘营养状况和HLA等位基因DQA1*0501、DQA1*0201对AITDs发病的影响

目的探讨山东沿海地区自身免疫性甲状腺病（AITDs）与HLA等位基因DQA1＊0501、DQA1＊0201及碘营养状况对AITDs发病的影响。方法HLA等位基因测定采用PCR-SSP技术，尿碘浓度测定采用砷铈催化分光光度法。结果①DQA1＊0501等位基因为AITDs易感基因（GD和HT的OR值=2．14、2．5）；而DQA1＊0201为女性AITDs保护基因（GD和HT的OR值=0．33、0．27）。②AITDs组尿碘浓度高于300μg／L患者分布频率均显著高于对照组（P〈0．05），且DQA1＊0501（＋）发生AITDs的OR值为2．7，DQA1＊0201（＋）的OR值为0．42；AITDs组碘正常组DQA1＊0501（＋）OR值为5．12，DQA1＊0201（＋）的OR值为0．21。③logistic回归分析发现尿碘浓度对数、DQA1＊0501为AITDs的易感因素，DQA1＊0201为保护因素。结论HLA-DQA1＊0501等位基因与该地区AITDs的发病易感性相关，而DQA1＊0201与女性患者的保护性相关。碘和HLA等位基因DQA1＊0501、DQA1＊0201共同影响GD、HT的发病。     

猪食管神经支配的神经化学研究——一氧化氮类及肽类成分在平滑肌中的分布(英文)

采用免疫荧光组织化学技术及迷走神经切断术,探讨猪食管一氧化氮类及肽类神经支配的神经化学特性。在光学显微镜下可观察到肌间神经丛及粘膜下神经丛中有部分神经元呈nNOS、VIP、GAL、NPY、PACAP、L-ENK、SP、5-HT及CB免疫阳性,但未见CGRP及SOM阳性神经元。nNOS及CB免疫阳性产物主要分布于不同的神经元胞体内。将PGP9.5作为神经元胞体的标记物,并采用免疫荧光免疫组织化学双重染色方法,分别观察了PGP9.5与nNOS、VIP、SP的双标情况。结果如下:(1)nNOS免疫阳性神经元约占PGP9.5标记神经元总数的63%,而VIP免疫阳性神经元约占36%,SP免疫阳性神经元约占28%;(2)神经节内神经元的平均数量呈现吻尾方向的递增趋势,且食管腹段神经丛内神经节数量明显高于食管其他部位;(3)食管肌层内VIP/GAL/NPY免疫阳性纤维分布最广,其中部分阳性纤维同时呈nNOS或PACAP免疫阳性;SP和/或L-ENK免疫阳性纤维在粘膜肌层的分布明显多于平滑肌层。CGRP阳性纤维非常少见,这一点不同于对其他动物的观察结果;(4)经一侧迷走神经切断后,肌间神经丛内PACAP及5-HT免疫阳性纤维明显减少,提示这些纤维可能来源于迷走神经;而平滑肌中VIP/GAL/NPY和/或nNOS免疫阳性纤维数量未发现明显变化,可能为内源性来源。     

神经调节素-1β对小鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及可能的机制

目的 研究神经调节素-1β(NRG-1β)对小鼠脑缺血再灌注后神经行为功能,脑梗死体积,脑组织含水量,神经细胞凋亡以及胶质细胞水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响和神经保护的作用机制.方法 应用线栓法建立小鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,经颈内动脉微量注射NRG-1β(2μg/kg)干预治疗,Bederson法评价动物的神经行为功能;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察脑梗死体积;干湿重法测定脑组织含水量;免疫荧光染色检测神经细胞凋亡;免疫组织化学检测AQP-4的表达.结果 脑缺血再灌注损伤后,动物均表现神经行为功能障碍,缺血侧出现脑梗塞病灶,脑组织含水量、神经细胞凋亡数量和胶质细胞AQP-4表达均高于假手术组.与对照组相比较,NRG-1β治疗组缺血24h,动物神经行为功能损伤明显改善,凋亡神经细胞数明显减少,脑梗塞体积显著缩小(P<0.05);但脑组织含水量和AQP-4表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05).缺血再灌注22h、46h和70h组,上述5项指标较相应的对照组均有显著性差异(P<0.05).结论 NRC-1β可能通过下调脑缺血再灌注损伤诱导的胶质细胞AQP-4表达和抑制细胞凋亡,减轻脑水肿和缩小梗死体积,从而改善动物的神经行为功能.     

Activation of the Notch signaling pathway disturbs the CD4+/CD8+, Th17/Treg balance in rats with experimental autoimmune uveitis

Objective and design

The present study aimed to investigate the relationship between the disturbed balance of CD4⁺/CD8⁺, Th17/Treg and the activation of the Notch signaling pathway in experimental autoimmune uveitis (EAU).

Methods

An EAU rat model was induced in Lewis rats, and pathology analysis was performed by hematoxylin and eosin (H&E) staining. CD4⁺, CD8⁺, Th17, and Treg levels in spleen, lymph nodes and eye tissues were determined by flow cytometry. Meanwhile, the expression of Notch1, DLL4, IL-10, and IL-17 was determined by quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In addition, the inhibitory effect of N-(N-(3,5-difluorophenacetyl-l-alanyl))-S-phenylglycine t-butyl ester (DAPT) on Th17 differentiation by Notch signaling in vitro was further investigated using T lymphocytes from EAU rats on day 12 post-immunization by flow cytometry.

Results

The pathological results showed that inflammatory cell infiltration occurred in ocular tissues in EAU rats. The CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg ratios in EAU rats were apparently higher than those in normal control individuals. Q-PCR and ELISA analyses indicated the expression of Notch1, DLL4, IL-10, and IL-17 in EAU rats gradually increased on day 6 after immunization, peaked on day 12, and then gradually decreased. The dynamic trends in Notch1 and DLL4 expression in EAU rats were identical to those of CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg levels. DAPT can significantly inhibit the activation of Notch signaling, decrease Th17 cell differentiation, and attenuate the level of the Th17 cell lineage, contributing to the balance of the Th17/Treg ratio.

Conclusion

The activation of the Notch signaling pathway can regulate Th17 and Treg cell differentiation, disrupt the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg balance, and aggravate the severity of EAU; inactivation of the Notch signaling pathway contributes to the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg balance in EAU rats. Our findings highlighted that the dynamic change in the CD4⁺/CD8⁺ and Th17/Treg ratio was consistent with the expression trend of Notch signaling in EAU rats, suggesting that Notch signaling may be a potentially important therapeutic target in clinical practice.

     

病例组合指数的内涵及应用探讨

国内普遍认为病例组合指数(CMI)属于医疗服务能力维度,体现收治疾病的疑难复杂程度和医疗服务的整体技术难度。通过结构方程模型分析发现,CMI与时间消耗指数、费用消耗指数等服务效率维度指标联系更紧密,与DRG组数、入组病例数及总权重等服务能力维度指标联系相对较弱,故应归属医疗服务效率维度。CMI的直接应用主要是对平均住院费用的预测控制及对科室绩效的评价;CMI的间接应用主要是对管理指标的调整/校正。医院管理者应准确把握CMI内涵,恰当应用CMI对不同层级及不同类别住院费用进行预测、评价与控制,并对其他管理指标进行调整后再评价。     

TUBB8基因突变致早期胚胎发育停滞一例

青岛大学附属烟台毓璜顶医院生殖医学中心对1例反复体外受精/卵细胞质内单精子注射（IVF/ICSI）助孕后早期胚胎发育停滞的患者进行了全外显子基因检测,发现了一种新的TUBB8基因突变型（c.208C>T/p.Pro70Ser）,并进一步探讨了TUBB8基因突变与早期胚胎发育停滞之间的联系,为反复种植失败的诊断与治疗提供更多可能性。