人vWF-A1区蛋白的表达及其对血小板聚集的抑制作用

目的:进一步研究血栓形成的机制,开发抗血栓药物。方法: 应用基因重组技术在大肠杆菌中表达人vWF-A1区蛋白,经过纯化、复性,获得重组蛋白(rvWF-A1),同时用流式细胞术检测rvWF-A1与血小板膜糖蛋白血小板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)Ib的结合能力,应用血小板聚集仪测定rvWF-A1对瑞斯托霉素(ristocetin)诱导的血小板聚集抑制作用。结果: 重组表达载体pQE-31-vWF-A1在大肠杆菌M15中得到高效表达,表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的30%,Ni-NTA agrose柱纯化后,其纯度为95%,经复性的rvWF-A1蛋白具有良好的生物学活性。它可与血小板模糖蛋白血小板膜糖蛋白GPIb结合,阳性率为78.6%;它可以抑制ristocetin诱导的血小板聚集,抑制率为84.7%。结论: 在原核细胞中可以成功地高效表达人vWF-A1区蛋白,该重组蛋白有可能开发为有效的抗血栓药物。     

WT1基因增强子构建位点对WT1基因启动子转录活性的影响

目的：以WT1基因启动子和增强子的功能片段为研究对象，探讨增强子构建在质粒的不同位点对基因启动子转录活性的影响。方法: 利用基因重组技术将WT1基因增强子的功能片段分别插入在已含有WT1基因启动子的质粒，pEWP的不同位点（MCS中的BamH I、EGFP 终止密码后的Not I和SV40polyA位点后的AflⅡ）中，将重组质粒转染慢粒白血病红白急变细胞株K562细胞、乳腺癌细胞株MCF-7细胞和人类胚胎肾转化细胞株293细胞，通过检测转基因细胞中EGFP的平均荧光强度来评估增强子对启动子的转录促进作用。结果: 通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体，即pEWP，和含有WT1基因启动子和增强子的载体，即pEWPE、pEWPD和pEWPA。流式细胞仪检测EGFP的平均荧光强度，发现pEWPA在293细胞和K562细胞中能够增强WT1启动子的转录活性，而pEWPE和pEWPD则无增强作用。3者均不能在MCF7细胞中增强WT1启动子的转录活性。结论: SV40polyA位点后插入增强子能够有效地增强启动子的转录活性，且具有细胞特异性。     

多药耐药基因修饰的小鼠骨髓细胞对造血功能的保护作用

目的:将体外转染了人多药耐药基因(MDR1)的小鼠骨髓细胞,移植给经致死剂量照射的受体小鼠,观察该基因对小鼠造血功能的保护作用。方法:分离经5-Fu预处理的供体小鼠骨髓有核细胞,体外转染由逆转录病毒介导的人多药耐药基因MDR1,然后移植给经85Gy致死剂量照射的同系受体小鼠,以紫杉醇(Taxol)、长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)筛选,观察小鼠血象、生存期和生存率变化,应用聚合酶链反应(PCR)和流式细胞仪(FCM)分析人多药耐药基因在小鼠中的整合与表达。结果:致死剂量辐照后,移植组小鼠造血功能逐渐恢复,未移植组15d内全部死亡。腹腔注射紫杉醇或静脉注射长春新碱、柔红霉素后,实验组生存率和生存期明显高于对照组(P<005)。表明MDR1基因能保护骨髓细胞,并且具有体内选择和富集作用,PCR分析提示,实验组外周血、骨髓、肝、脾组织中均检测到原病毒整合,RT-PCR与FCM检测到MDR1基因表达。结论:人MDR1基因修饰的小鼠骨髓细胞,能有效重建经致死剂量照射的受体小鼠造血功能,一定程度上保护骨髓免受化疗药物所致的细胞毒性作用。     

双特异性单链抗体

双特异性单链抗体是新型基因工程抗体 ,在疾病诊断、治疗上有巨大临床应用潜力。目前已有较多各种双特异性单链抗体成功构建的报道。本文对其概念、制作方法及应用前景进行了综述     

骨髓增生异常综合征中的微环境异常

Myelodysplastic syndrome (MDS) is considered as a preleukemic course, characteristic of hypercellular marrow and pancytopenia. Many studies have demonstrated that defects occur in the heamtopoiet-ic cells from patients with MDS. Recently, many abnormal changes in apoptosis, proliferation, ability of hematopoietic support, cytokine secretion, clonal origin of stromal cells and angiogenesis have also been re-vealed in the bone marrow mieroenvironment of MDS patients.     

经内镜颈前微创入路颈椎手术的解剖学研究

目的：研究经颈前路建立内镜微创入路的安全性、可行性及其对手术器械的要求。方法：使用Metrx椎间盘镜手术系统，共对5具C3-7椎体间的10个间隙进行内镜辅助下的颈椎前路减压操作。通过颈右前外侧约2cm的皮肤切口，经血管鞘与内脏鞘间放入直径18mm的工作套筒并将其通过可曲自由臂固定在手术床边。内镜固定在工作套筒上。在内镜辅助下行颈椎间盘切除及椎体后缘骨质刮除术。结果：未发现手术入路周围重要软组织结构的损伤；使用环锯、垂体钳、刮匙减压的5个间隙及单纯使用垂体钳、刮匙减压的5个间隙的间盘组织切除均较干净。由于工作套筒过长，垂体钳、刮匙等减压器械的可操作空间较小，环锯组椎体后缘有明显骨赘形成的6个椎体，3个发现有部分的骨赘被刮除，其余3个椎体的后缘骨赘无改变；单纯使用垂体钳、刮匙组，椎体后缘有明显骨赘形成的8个椎体仅3个发现有部分的骨赘被刮除，其余5个椎体的后缘骨赘无改变。未发现硬膜囊损伤。结论：内镜下的颈椎前路减压是可行的，工作套筒及用于减压的器械的有待改进。     

标准位X线片上胸腰椎椎弓根轴线的放射学研究

目的:研究标准正位X线片上T9～L5椎弓根轴线的放射学表现。方法:10具T9～L5脊柱标本,解剖成单个椎体。直视下沿椎弓根轴线置入导针。测量分析下列数据:标准侧位X线片显示导针达到椎体后壁及椎弓根中段时,标准正位X线片导针在椎弓根投影内的距离与椎弓根投影最大横径的百分比。另选4具T9～L5脊柱标本,根据上述数据,X线分步监测椎弓根螺钉植入。结果:标准正位X线片导针位于椎弓根中段时的百分比为(49.16±1.84)%～(51.83±2.53)%,各节段及左右侧椎弓根差异无统计学意义(P>0.05);导针位于椎体后壁时的百分比为(61.13±6.09)%～(74.68±6.13)%,左右椎弓根之间、T10￣T12之间、T9与L1￣L5之间差异分别无统计学意义(P>0.05),T10￣12与T9、L1￣5差异有统计学意义(P<0.001)。植入72枚螺钉,68枚位于椎弓根中心,4枚穿破椎弓根,穿破率5.56%。结论:标准正位X线片导针在椎弓根投影内的比值能间接表达椎弓根轴线,可为经椎弓根手术确定正确的进针轨道提供一种参考。     

细胞周期抑制剂P27^Kip1对乳腺癌的预后意义

P2 7Kip1属广谱CDKI家族 ,是一种细胞周期的负向调节剂 ,在细胞增殖、分化、凋亡及肿瘤的发生发展等过程中具有重要的调节作用。人类肿瘤中P2 7基因的改变极为罕见 ,但P2 7蛋白表达的改变与其生物学行为密切相关 ,近年来的诸多研究表明P2 7蛋白表达对包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤具有预后意义     

直丝弓矫治器辅助前牙平导矫治安氏Ⅱ类2分类错

安氏Ⅱ类2分类错牙合是Ⅱ类错牙合畸形中较常见的一种。矫治时因其前牙闭锁复牙合较深,常造成下前牙托槽粘接困难或频繁脱落,影响固定矫治器作用的发挥。本文将前牙平导活动矫治器与直丝弓固定矫治器联合作用,充分发挥两种矫治器的优势,使内倾型深复牙合的治疗简化,疗程缩短,取得了较好的矫治效果。现介绍如下。1　临床资料经临床检查和Ｘ线头影测量选出安氏Ⅱ类2分类患者20例。其中男12例,女8例,平均年龄16岁。深复牙合均达8ｍｍ以上。5例伴严重拥挤拔牙矫治,余均为不拔牙矫治。采用直丝弓固定矫治器并辅助上前牙平面导板进行矫治。平导一…     

CD44v6和nm23-H_1的表达对大肠癌淋巴结转移的影响

目的　探讨CD44v6和nm2 3-H1基因产物表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法　应用SP免疫组化染色法 ,对 76例大肠癌标本进行CD44v6和nm2 3-H1基因产物测定。结果　CD44v6基因产物的高表达和nm2 3-H1基因产物的低表达与大肠癌淋巴结转移有关 (P <0 .0 1)。大肠癌CD44v6和nm2 3-H1表达无相关性 (P >0 .0 5 ) ,但CD44v6阳性表达伴nm2 3-H1阴性表达的患者发生淋巴结转移的可能性大。结论　CD44v6和nm2 3-H1与大肠癌淋巴结转移密切相关 ,两者在淋巴结转移中起协同作用 ,联合检测对判断大肠癌淋巴结转移是一个有用的指标。