Triton WR-1399通过影响VLDL-C代谢通路和RCT诱导急性HLP小鼠模型的研究

目的观察肌肉注射化学表面活化剂Triton WR-1399诱导小鼠急性高脂血症模型,考察时效和量效关系,并从基因水平探讨Triton WR-1399诱发高脂血症动物模型的机制。方法用肌肉注射的方式分别给予小鼠0.4 g·kg~(-1),0.8 g·kg~(-1)和1.5 g·kg~(-1)的Triton WR-1399,取血时间点为24、32、48、56、72、80和96 h,观察这7个时间点小鼠甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)的变化;采用荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测脂蛋白脂肪酶(LPL),胆固醇脂酰转移酶(LCAT),胆固醇7-羟化酶(CYP7A1),载脂蛋白AI(Apo AI),载脂蛋白(Apo B),低密度脂蛋白受体(LDLR),B类Ⅰ型清道夫受体(SRB1)和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的脂质代谢相关通路基因mRNA相对表达量变化。基于模型复制方法考察,研究贝特类和他汀类代表药物的调脂作用,验证模型的稳定性。结果 Triton WR-1399(0.8 g·kg~(-1),1.5 g·kg~(-1))剂量组的TC、TG和LDL-C水平明显升高,LPL、LDLR、Apo B和SRB1的基因相对表达明显降低,HMGCR的基因相对表达明显升高;非诺贝特对该急性模型有明显降脂作用。结论采用肌肉注射0.8 g·kg~(-1)Triton WR-1399所诱导的急性高脂血症小鼠模型稳定,可用于调脂药物筛选,其诱导模型的机制可能与抑制VLDL-C代谢通路和阻断胆固醇逆向转运过程有关。基于该模型的发病机制,非诺贝特比瑞舒伐他汀表现出更为明显的降脂作用。     

HPLC测定梅归参原位凝胶剂中盐酸小檗碱的含量

目的:采用高效液相色谱法,建立梅归参原位凝胶剂中盐酸小檗碱的含量测定方法,并进行相关方法学研究。方法:使用Agilent XDB-C18色谱柱(5μm,4.6×250mm),流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(52:48),柱温为25℃,检测波长为345nm,流速为0.8mL/min。结果:盐酸小檗碱浓度在10.06~100.6μg/mL范围内呈现良好的线性关系,回归方程:Y=37.202X+7.4609(r=0.9999),平均加样回收率为100.2%,RSD为1.52%(n=6)。结论:本法快速、操作简便,供试品色谱图主成分峰峰形对称,分离度高,方法的专属性好、重复性好、准确度高,可用于梅归参原位凝胶剂中盐酸小檗碱的含量测定。     

基于ICP-MS法的不同产地金边土鳖中无机元素的分析

目的:测定金边土鳖药材中无机元素的含量。方法:以浓硝酸为溶剂,结合微波消解处理金边土鳖样品,经过电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)仪器条件的优化,进行方法学考察,并测定了14批不同产地金边土鳖中无机元素的含量;采用统计学软件SPSS 22. 0对数据进行相似度评价与聚类分析。结果:23种待测元素的线性关系良好(r≥0. 995),重复性试验均RSD≤9. 74%,稳定性试验均RSD≤7. 81%,精密度试验均RSD≤8. 24%,加样回收率在94. 87%～111. 18%,均RSD≤5. 85%;测定了不同产地金边土鳖中23种无机元素的含量,其中Na、Mg、Ca、Zn、Al等元素含量较高,重金属元素Pb、Cd、As、Cu均检出,Hg部分样品未检出,建立了金边土鳖无机元素特征图谱,相似度评价与聚类分析结果一致。结论:该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点,可为金边土鳖中无机元素的快速分析、有效性、安全性评价及其质量标准的制定提供技术支持和科学依据。     

猴耳环中抗炎活性成分3,3'-新木质素的含量测定及指纹图谱研究

目的:建立RP-HPLC法同时测定不同产地猴耳环药材中10个具有抗炎活性的3,3’-新木质素(Clypearianin A(1),Clypearianin B(2),Clypearianin C(3),Clypearianin D(4),Clypearianin E(5),Clypearianin F(6),ClypearianinG(7),(7'R,8'R)-7'-methoxyl strebluslignanol(8),Magnolol(9),magnaldaiol(10))的含量。方法:Agilent Zorbax SBC18柱(4.6mm×250 mm,5μm);流动相B(甲醇)和A(0.05%的三氟乙酸水溶液)梯度洗脱(0～40min,30%～45%A;40～45min,45%～50%A;50～55min,51%～60%A;55～105min,60%～80%A;105～115min,80%～90%A);流速1.0mL/min;柱温40℃;检测波长为220 nm;进样量10μL。结果:上述10个3,3’-新木质素的线性关系良好(r≥0.9990)。不同产地的猴耳环中的10个成分含量有所差别,但差别不大。结论:该方法可用于猴耳环中3,3’-新木质素的含量测定研究。     

三白草抗鼻咽癌有效部位的提取工艺研究

目的:建立三白草抗鼻咽癌有效部位提取的方法。方法:采用单因素试验法,以鼻咽癌细胞CNE1和CNE2的抑制率,优选提取方法和提取溶剂;采用正交试验法,以指标成分总量(三白草酮、马纳萨亭B、总木脂素)为指标,对提取工艺条件优选。结果:优选的提取工艺为:90%乙醇回流提取3次,料液比为1:8,每次提取时间为1 h。结论:该工艺稳定、为下一步研发抗鼻咽癌新制剂奠定了基础。     

基于药效实验和层次分析法的参芪强心片提取工艺优选

目的优化参芪强心片的提取工艺。方法采用药效实验,以对异丙肾上腺素诱发的大鼠心力衰竭模型心脏病变改善程度为指标,初步筛选制备工艺;采用层次分析法结合单因素实验、正交试验,以固形物质量、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量,优化乙醇回流提取工艺;以固形物质量和淫羊藿苷含量为指标,优化煎煮提取工艺,并对提取工艺进行验证试验。结果药效实验表明工艺4更优;该工艺的最佳提取条件为红参、黄芪等5味饮片加50%乙醇回流提取3次,第1次加11倍量,第2、3次加10倍量,每次2.5 h;淫羊藿等其余2味饮片煎煮提取3次,第1次加19倍量,第2、3次加16倍量,每次1.5 h。验证试验表明乙醇提取固形物得率平均值为19.78%、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re提取率平均值为77.52%;水提取固形物得率平均值为16.58%、淫羊藿苷提取率平均值为90.98%(RSD2.0%,n=3)。结论该提取工艺稳定可行。     

基于GC-MS的心肌缺血大鼠血浆中内源性代谢物测定方法的建立

目的：建立GC-MS测定心肌缺血大鼠血浆中内源性代谢物的方法。方法：皮下注射异丙肾上腺素复制大鼠心肌缺血模型,采用DB-5MS Ultra Inert（30m×250μm,0.25μm）色谱柱,GC-MS进行程序升温,氦气（纯度>99.999%）为载气;无分流进样;流速为1mL·min-1;进样口温度设为250℃;进样量为2μL。质谱参数：离子源温度设为230℃;电子能量为70eV;电子倍增器电压1847V;电离方式EI。质谱采用全扫描方式（扫描范围30～550m/z）进行数据采集。自建对照品物质库,并参考气质工作站的数据库对内源性生物标志物进行鉴定指认,然后进行方法学考察,包括精密度、重现性、稳定性。结果：仪器与方法精密度、重复性和稳定性试验的相对峰面积RSD值均小于20%。结论：该方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于心肌缺血大鼠血浆中内源性代谢物的测定,该方法可应用于心肌缺血模型的代谢组学研究。     

痹痛消胶囊对大鼠类风湿性关节炎的作用及其机制

目的探讨痹痛消胶囊(青风藤、土茯苓、骨碎补等)对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用及其作用的相关机制。方法 70只SD大鼠除10只作为正常对照组,其余皮下注射Freund’s完全佐剂建立类风湿性关节炎大鼠模型,造模成功后分组给药2周,观察给药后痹痛消胶囊高、中、低剂量对类风湿性关节炎大鼠足关节肿胀度、血清超敏C反应蛋白(hs CRP)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含有量的影响,以及组织病理学观察。结果痹痛消胶囊明显抑制类风湿性关节炎大鼠足关节肿胀度,显著降低类风湿性关节炎大鼠血清中hs CRP、IL-1β和TNF-α的含有量,明显减轻足关节软骨病变程度。结论痹痛消胶囊具有较好的治疗类风湿性关节炎作用,其作用机制可能与下调其hs CRP、IL-1β、TNF-α的含有量有关。     

UPLC同时测定布渣叶中四个苷类成分的含量

广东省中医药局建设中医药强省课题（编号：20142012）     

中风宁合剂质量标准研究

目的:建立中风宁合剂的质量标准。方法:采用薄层色谱(Thin-layer Chromatography,TLC)法对方中3味药进行定性鉴别;采用高效液相(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)色谱法对方中赤芍所含芍药苷的含量进行测定,以Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.05 mol/L的磷酸二氢钾溶液(28∶72)为流动相,检测波长230 nm。结果:在TLC中能检出赤芍、石菖蒲、何首乌的特征斑点,且阴性对照无干扰。芍药苷在0.185 2~0.926 0μg范围内与色谱峰峰面积线性关系较好,相关系数r为0.999 9,加样回收率的平均值为98.55%,RSD%为1.16(n=9)。结论:所建立的方法简便准确,快速,专属性高,重现性好,结果可靠,可用于中风宁合剂的质量控制。