人诱导多能干细胞分化来源心肌细胞特征及促成熟方法研究进展

人诱导多能干细胞分化来源的心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs)为心脏修复、心脏药物测试、体外心脏建模等提供了理想细胞来源。但hiPSC-CMs与心肌细胞相比并不成熟,表现在缺乏某些特定基因表达,结构、代谢、电生理不成熟,Ca 2+处理水平低等方面。许多研究都聚焦于促进hiPSC-CMs成熟的方法,包括生化刺激、物理刺激、共培养、3D培养、miRNA等。本文对hiPSC-CMs特征及其促成熟方法进行综述,并展望该领域的发展方向。     

Torin1、Nutlin-3a促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究

目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin-3a和Torin1可以抑制3T3细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。Western blot检测结果显示,Nutlin-3a组和Torin1组cTnT、cTnI蛋白表达量相比DMSO组有增高的趋势。qRT-PCR结果表明,Torin1处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中Torin1组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1组和Nutlin-3a组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1组和Nutlin-3a组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。结论用Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。     

治疗青少年首次外伤性髌骨脱位的临床观察

目的探讨青少年首次外伤性髌骨脱位的治疗方案。方法2010年1月至2017年12月上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心骨科接诊的外伤性髌骨脱位共62例(62膝)。62例患儿均有下肢外伤史,平均年龄11.9岁。行髌骨复位或者游离体取出术后均行股四头肌肌力训练、内推髌骨、护膝佩戴及避免剧烈活动3个月。结果24例行膝关节穿刺抽吸血肿,平均抽吸血量为20.6 ml。初次发病后平均随访时间3.9年。13例合并膝关节游离体。62例中54例无髌骨脱位复发,8例复发;其中3例复发1次,2例复发2次(该5例中有2例未遵医嘱康复锻炼,遵医嘱康复锻炼后无再脱位);另外3例髌骨再脱位3次以上。再脱位3次和4次后考虑复发性髌骨脱位,行髌骨脱位软组织联合手术后随访3.1年无再脱位。随访患儿平均Kujala评分为93.4分。结论青少年首次外伤性髌骨脱位急性期选择保守治疗,治疗方法操作简单。大部分患儿长期随访效果好,但对患儿及家属依从性要求较高,临床诊疗中可优先考虑保守治疗。如再脱位超过3次以上可考虑伸膝装置软组织重建手术治疗。     

计算机在体外循环中的应用

计算机在医学领域的应用范围不断扩大,体外循环专业是临床医疗和生物工程紧密合作而产生的,计算机在该领域的应用也有其独特性.在体外循环领域计算机技术不仅直接同一些仪器设备相整合,而且在设备设计,智能化以及质量控制等方面的应用也不断增加.     

永存第五对主动脉弓

目的：国内首例报道永存第五对主动脉弓。方法：导管经降主动脉逆行通过第5对动脉弓至升主动脉进行选择性升主动脉正侧位造影,增强磁共振血管造影,并经手术证实。结果：永存第5对主动脉弓显示清晰。结论：永存第5对主动脉弓是主动脉弓畸形的一种罕见类型,它为一起自升主动脉、位于主动脉弓下方且平行于主动脉弓的血管,为胚胎未退化所致,可分为四种类型。     

正常和窒息新生儿脐血浆非蛋白结合铁的比较

目的建立用于临床的血浆非蛋白结合铁(NPBI)的测定方法,并比较正常和窒息新生儿脐血浆NPBI值.方法选取正常和窒息新生儿各10例,分别用校正和传统博来霉素法测定其脐血浆NPBI含量,并比较它们的标准曲线、回收率和t检验结果.结果用传统博来霉素法测定脐血浆NPBI值,无论在正常还是窒息新生儿均偏低,且其回收率只有32%左右.用校正博来霉素法测定脐血浆NPBI值,则能较好改善其数据,且其回收率达101%左右.经t检验有显著性差别(P＜0.01).结论校正博来霉素法是一种较好的,能实际用于临床的常规测定NPBI的方法.室息新生儿脐血浆NPBI值明显高于正常新生儿,提示在血浆中可能产生较多毒性羟自由基(OH@)而造成组织细胞,尤其是脑组织的损伤.     

磁共振尿路造影诊断儿童先天性泌尿道畸形的意义

目的 探讨磁共振尿路造影（ＭＲＵ）技术在诊断儿童先天性泌尿道畸形中的应用价值。方法 回顾性分析２４例儿童先天性泌尿道畸形患者,采用快速自旋回波（ＴＳＥ）行ＭＲＵ检查,并与ＩＶＰ和手术结果对照。结果 ２４例中单侧性２０例,双侧性４例。ＭＲＵ的原始图象及ＭＩＰ图象清晰地显示梗阻的部位及程度,结合常规ＭＲＩ,诊断符合率达８８％。结论 ＭＲＵ这一无创性水成像技术,能显示无功能性肾脏的集合系统,并兼有无Ｘ线     

继发性脊髓栓系的诊断和治疗

目的硬脊膜内皮样囊肿及囊性脊柱裂术后纤维疤痕粘连可造成继发性脊髓栓系,使得神经损害症状加重或产生新的症状.术文就该病的诊断及治疗进行分析.方法囊性脊柱裂修补术后18例,硬脊膜肉皮样囊肿5例.手术年龄2岁～12岁,术后随访3月～12月,对大小便失禁分别采用Kelly评分法及Bruskewiz评分法.结果18例囊性脊柱裂,有的第一次手术后原有的神经损害症状进一步加重,有的产生新的症状.MR显示脊髓低位.在原手术处被纤维疤痕粘连牵拉,形成脊髓栓系.5例硬脊膜内皮样囊肿神经功能损害均为后天产生.MR显示皮样囊肿位于硬脊膜内,牵拉压迫脊髓、马尾.手术目的是切除病灶,将粘连牵拉的脊髓、马尾彻底松解开.术后随访,多数病人的大小便功能及双下肢功能均有不同程度的改善.结论硬脊膜内皮样囊肿或先天性囊性脊柱裂手术后纤维疤痕粘连可造成脊髓栓系,产生神经损害症状或原有症状进一步加重.MR检查有助于诊断.脊髓栓系松解术有利于神经功能的改善.     

鸡胚神经管缺陷模型的建立

目的 鸡胚胎内注射氨甲喋呤（ＭＴＸ）,制作鸡胚神经管缺陷动物模型。方法 选用上海农业科学院“杭”鸡的受精蛋５５２枚,分成３组,分别为药物（ＭＴＸ）注射组、生理盐水注射对照组及正常对照组。药物注射时间选择在鸡胚孵化第２￣７ｄ,ＭＴＸ剂量分别为０．０１、０．０２、０．０５、０．１及０．２５ｍｇ／ｋｇ。孵化３周后观察结果。结果 孵育第３￣６ｄ注药的鸡（剂量为０．０１、０．０２、０．０５、及０．１ｍｇ／ｋ     

神经心理发育障碍儿童静态眼睛照片深度学习的病例对照初步研究

背景：目前对儿童神经心理发育障碍的诊断主要靠临床表现，尚缺乏客观的生物学指标，一些神经心理发育障碍儿童的眼睛特征可能具有重要的临床价值。 目的：评价静态眼睛图像是否可以作为儿童神经心理发育障碍的一个潜在的筛查测试。 设计：病例对照研究。 方法：双眼图像采集应用Google人脸图片搜索引擎进行图片搜索，以“autism and child/autistic child”和“normal child/healthy child”关键词搜索到的图片分别归为神经心理发育障碍组和对照组。人工删除完全重复的照片、卡通照片、有面部畸形的照片、没有儿童脸的照片和有多个儿童脸部的照片；应用图像工具识别和挖取每张儿童人脸照片中的双眼图像。生成的眼睛图像调整至128×28分辨率(8位灰度)。卷积神经网络（CNN）是基于一台安装了Kera、Scipy和Python成像库(PIL)的Windows 7计算机。采用二进制交叉熵损失函数和RMSprop算法优化器对模型进行训练。将图像数据分为训练集、验证集和测试集。神经心理发育障碍组测试分数>0.5为分类正确，对照组≤0.5为分类正确，训练25次停止。以分组检索结果为“金标准”，以深度学习训练模型分组为待测标准。计算准确率和损失率。 主要结局指标：根据深度学习训练模型两组特征生成的眼睛图像。 结果：通过双眼图像采集到826张儿童眼睛图像，神经心理发育障碍组413张，对照组413张。训练集736张（89.1%），验证集44张（5.3%），测试集46张（5.6%）。训练集和验证集准确率随训练次数增加呈升高趋势，训练集和验证集损失率随训练次数增加而逐渐下降。神经心理发育障碍组和对照组测试分数分别为0.66±0.20和0.20±0.15，差异有统计学意义（t=9.03，P<0.001），正确分类例数分别为18/23例(78.3%)和22/23例(95.6%)。准确率为87.0%，敏感度为78.3%（95%CI：58.1%~90.3%），特异度为95.6%（95%CI：79.0%~99.2%）。深度学习训练模型ROC曲线显示，AUC=0.962。由CNN卷积图层的可视化生成神经心理发育障碍组和对照组的眼间距宽，像素数分别为90和70。 结论：深度学习训练模型可以获得神经心理发育障碍儿童的眼睛特征，这将有利于通过评价眼睛图片提高儿童神经心理发育障碍的早期筛查水平。