肝癌免疫微环境与免疫治疗：研究进展与发展趋势

肝癌微环境主要由肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤相关中性粒细胞、骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关成纤维细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞等细胞组分,以及细胞外基质、细胞因子等非细胞组分组成。免疫微环境在肝癌进程、免疫逃逸和治疗抵抗中发挥重要作用。近期,以调变炎症免疫微环境为基础的免疫治疗取得突破性进展,免疫疗法的出现为肝癌治疗提供了全新的选择,但仍存在客观缓解率较低、不良反应多和耐药问题。因此,深入研究微环境在肝癌发生发展中的作用及探索免疫治疗的未来发展趋势可提高现有治疗手段的应答率,对肝癌精准诊断与治疗有重要的理论价值和临床意义。     

多囊卵巢综合征患者卵泡液的拉曼光谱分析及其对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)患者与非PCOS患者卵泡液中的差异性代谢物及其对小鼠卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)和体外受精(in vitro fertilization, IVF)胚胎发育的影响。方法本研究的临床资料采取回顾性队列研究的研究方法获取;动物实验采取随机对照试验。收集2019年6月至2020年6月期间在上海集爱遗传与不育诊疗中心第一次接受IVF或卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)周期的女性患者的卵泡液。根据是否为PCOS患者, 分为PCOS组(n=71)和非PCOS组(n=70), 回顾性分析两组患者的临床资料, 并利用深度学习的拉曼光谱分析技术检测两组患者卵泡液的代谢谱差异。后续进行实验性研究, 在PCOS患者和非PCOS患者卵泡液中进行小鼠GV期卵母细胞IVM培养, 收集两组成熟的鼠卵母细胞进行IVF, 进一步探讨卵泡液中差异性代谢物对鼠卵成熟及胚胎发育的影响。结果 PCOS组患者卵母细胞成熟率[82.19%(8...     

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节/辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的 构建表达gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-holf)-vif-nef融合基因的DNA疫苗,并评价其免疫原性.方法 按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化,构建真核表达质粒.用Western blot法验证体外表达情况;用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应.结果 限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确,可以表达相应的融合蛋白.ELISPOT结果显示,Gag-Env特异性的T细胞反应强度为(3010±566)SFC/10~6脾细胞;Tat-Rev-Integrase(C-half)-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为(948±737)SFC/10~6脾细胞,均显著高于空载体组.结论 构建的表达HIV-1 CRF01_AE流行株gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-half)-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应.     

运用BiFC技术检测LOX-1与AT1受体的相互作用

目的运用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)之间的相互作用,推测其可能是参加动脉粥样硬化等心血管疾病过程的重要机制之一。方法将LOX-1与AT1受体质粒共转染COS7细胞,给予ox-LDL(50ug/ml)刺激后,检测细胞中p-ERK表达水平。根据BiFC载体和AT1、LOX-1基因序列设计引物,将AT1、LOX-1基因克隆到BiFC特异性的荧光载体上,得到重组BiFC质粒:phmKGN-MN-AT1,phmKGC-MN-AT和phmKGC-MC-LOX-1,phmKGN-MC-LOX-1,配对共转染HEK293细胞,用ox-LDL(50ug/ml)刺激,研究AT1受体和LOX-1的相互作用;构建G蛋白偶联受体家族中另一蛋白肾上腺素受体β2(β2-adrenergi creceptor,β2AR)的BiFC重组质粒:phmKGN-MN-β2AR和phmKGC-MN-β2AR,分别与LOX-1对应的BiFC质粒转染HEK...     

慢性乙型肝炎病毒携带者HBeAg年阴转率调查

随着各种慢性乙型肝炎治疗药物及方案的出现,以及人们对乙型肝炎自然史的进一步了解,意识到HBeAg发生血清转化是抗病毒免疫达到新平衡点的指征。因此,了解自然状态下,HBeAg阳性的乙肝病毒携带者年血清自然转换率,对于正确阐明慢性乙肝治疗疗效具有重要基线参考意义。     

高氧暴露BPD小鼠模型中巨噬细胞焦亡的检测及意义

目的 探讨巨噬细胞焦亡是否参与支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）的肺病理损伤。方法 40只足月新生小鼠随机分为空气（room air,RA）组和高氧（hyperoxia,HO）组,每组20只。建立慢性高氧诱导的BPD小鼠模型。HE染色评估小鼠的肺泡化情况;CD31免疫组化检测肺血管发育状况;Masson染色分析肺组织的纤维化程度;qRT-PCR检测肺组织中的炎症因子和趋化因子（Il6、Il1b、Mmp12、Ccl2、Ccl5、Il8）基因表达水平;ELISA检测血清和肺组织匀浆中的IL-1β水平;Western blot检测细胞焦亡通路的关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、N-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β表达;流式分析支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞比例;免疫荧光检测F4/80与NLRP3/Caspase-1/IL-1β的共定位;免疫组化分析AQP5的表达水平。结果 与RA组相比,HO组小鼠的肺泡化阻滞和肺血管生成障碍,肺纤维化显著增加;肺组织中促炎细胞因子的表达显著上调,细胞焦亡相关蛋白表达水平显著增加...     

甲肝减毒活疫苗2针法加强免疫8年血清学效果观察

甲型病毒性肝炎（甲肝）疫苗的问世为预防和控制甲肝的流行提供了有效的预防措施。尤其是国产甲肝减毒活疫苗的诞生,因其价格低廉、有效,更适于在经济尚不发达的农村地区推广使用。甲肝减毒活疫苗免疫的持久性、是否需要加强免疫以及如何加强免疫,一直是人们非常关心的问题。     

肿瘤负荷评分在获得根治性切除肝内胆管癌患者预后预测中的价值

目的 研究肿瘤负荷评分(tumor burden score,TBS)对肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)患者根治性切除术后预后的预测价值。方法 回顾性分析2005年1月至2011年12月在复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科连续收治的322例行根治性切除术的ICC患者资料,随访截止至2014年4月。采用ROC曲线评价TBS预测总体生存率(OS)的准确性。多因素Cox回归分析影响ICC患者预后的独立因素。结果 中位随访时间44.0个月(范围2.7～100.5)。TBS将322例ICC患者分为低、中和高三个预后风险组(104例、176例和42例)。TBS与血清CA199(P=0.004)、术前中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR,P=0.001)、淋巴细胞/单核细胞比值(LMR,P<0.001)、肿瘤最大径(P<0.001)、肿瘤数目(P=0.001)、淋巴结转移(P<0.001)及TNM分期(P<0.001)显著相关。TBS预测ICC患者术后5年OS的曲线下面积(AUC)为0.632(P<0.001),高于NLR≥2...     

亲和纯化技术联合质谱分析筛选乳腺癌中p90核糖体S6蛋白激酶4相互作用蛋白

背景与目的：p90核糖体S6蛋白激酶4基因(ribosomal S6 kinase 4 gene,RSK4)作为抑癌基因,能够抑制细胞增殖、迁移并诱导细胞的凋亡,但与其配合发挥相应功能的相互作用蛋白尚不明确。该研究利用Flag标签纯化技术和质谱分析筛选鉴定乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的RSK4相互作用蛋白。方法：构建含有RSK4全长和Flag亲和标签的真核表达载体pcDNA3.1/EGFP-RSK4-Flag,将其转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞株,72 h后收集细胞蛋白。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain re-action,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RSK4表达情况。运用标签分离纯化RSK4蛋白,液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定RSK4相互作用蛋白,通过生物信息学的方法(GO分析和IPA分析)归纳分析互作蛋白以及与RSK4相互作用机制。结果：通过标签纯化联合质谱分析成功鉴定出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38(serine/threonine-protein kinase 38,STK38)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38类(serine/threonine-protein kinase 38-like,STK38L)、MOB激酶致活因子2(MOB kinase activator 2,MOB2)、蛋白精氨酸N甲基转移酶5(protein arginineN-methyltransferase 5,PRMT5)等24个RSK4相互作用蛋白。对所鉴定出的互作蛋白进行生物信息学分析,提示RSK4互作蛋白组参与包含细胞凋亡和细胞迁移运动等在内的多种生物信号通路。结论：利用亲和纯化技术联合质谱鉴定成功筛选出RSK4相互作用蛋白并通过生物信息学分析获得了RSK4参与乳腺癌细胞的凋亡、迁移相关生物调控网络。     

紫草多糖抑制LPS活化PBMC表达炎症相关因子的基因转录

目的:研究紫草多糖对LPS活化外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表达TNF-α、IL-10、IL-18相关因子的影响及其可能的信号通路。方法:LymphopreTM(1.077 g/ml)淋巴细胞分离液离心分离正常健康人PBMC,紫草多糖处理正常健康人的PBMC或LPS活化的PBMC,利用Real-time RT-PCR法检测TNF-α、IL-10、IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,通过Western blot检测PBMC中ERK磷酸化水平。结果:紫草多糖可增强PBMC TNF-α、IL-10、IL-18Rα、IL-18Rβ的转录,与LPS处理的PBMC相近。紫草多糖处理LPS活化的PBMC,在处理早期(4小时)可抑制LPS活化的PBMCTNF-α及IL-18的表达,抑制率达15%~50%(P<0.05);并可抑制LPS诱导的ERK磷酸化,抑制率达27%~61%(P<0.05)。结论:紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关因子TNF-α等高表达。