肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎的诊断与病原治疗

自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis，SBP)是肝硬化最具有特征的感染性并发症，其发生率大约10％—20％。此前，腹腔内并无原发性感染灶。SBP的出现，往往意味着肝硬化病情较重，可能提示已进入病程后期，预后颇差。伴有SBP者，病死率约50％左右，其中三分之一直接死于SBP。     

HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变菌株的构建及其功能研究

目的 构建HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变株，初步研究EAggEC菌株携带的耶尔森菌HPI毒力岛合成铁载体Ybt的功能。方法以EAggEC17-2为出发菌株，irp8基因部分序列作为同源重组的一侧序列，irp5基因序列作为同源重组的另一侧序列，中间插入有氯霉素（Can）抗性基因（cat基因）标记。通过接合转移和同源重组，构建了缺失约24kb的HPI毒力岛功能核心区区域EAggEC17-2的仝岛缺失株EA85。应用流式细胞技术（FACS）检测指示菌株WA-CS irp1：：KN（pC3G3．3N）荧光强度的变化情况，对EA85缺失株和出发菌株进行了合成Ybt的功能比较研究。结果成功构建了EAggEC17-2HPI全岛缺失株EA85。EAggEC17-2菌株具有表达Ybt的功能，而缺失株EA85丧失了合成Ybt的能力。结论EAggEC17-2HPI毒力岛的缺失，使Ybt的合成彻底阻断。EAggEC17-2具有的合成Ybt的功能是由其染色体携带的HPI毒力岛所决定的。     

MXA蛋白抑制HBV复制的体外研究

目的研究MXA蛋白抑制HBV复制的活性。方法将pcDNA3．1-MXA重组质粒和PU19-1．24HBV重组质粒分别按1：1、2：1共转染HepG2细胞（MXA组），对照组使用空pcDNA3．1、Salon DNA和PU19-1．24HBV重组质粒共转染，3d后Western blot检测MXA蛋白表达，Abbott法检测细胞上清HBeAg和HBsAg分泌量，定量PCR检测上清和胞内HBV DNA水平，统计学分析结果。pcDNA3．1-MXA与PU19-1．24HBV重组质粒共转染HepG2细胞，对照组为pcDNA3．1-MXA重组质粒、PU19空质粒和Salon DNA共转染．3d后裂解细胞Western blot检测MXA蛋白表达。结果Western blot显示MXA组有MXA蛋白表达：与对照组相比，pcDNA3．1-MXA和PU19—1．24HBV重组质粒按1：1转染时，MXA组HBeAg下降27％．上清HBV DNA和细胞内HBV DNA分别下降1个log值和0．6个log值；按2：1比例转染时MXA组HBeAg较对照组下降66％，上清HBV DNA和细胞内HBV DNA水平分别下降1．9个和1．7个log值，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示MXA蛋白抑制HBV组与对照组MXA蛋白表达没有明显差别。结论MXA蛋白在HepG2细胞具有抑制HBV复制活性，抑制活性与蛋白的表达量相关；在抑制HBV复制过程中MXA蛋白自身可能不发生降解。     

肝糖原累积症一例

患儿男，4岁，因发现肝大半个月于2005年11月28日入院。患儿半个月前常规体检时发现肝大，乙肝和丙肝病毒标志物阴性，丙氨酸氨基转移酶（ALT）140U/L、欲氨酸氨基转移酶（AST）180U/L。     

干扰素α调控乙型肝炎病毒特异性T细胞免疫应答抑制慢性感染小鼠模型体内病毒基因表达

目的在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染小鼠模型中,探讨干扰素α(IFN-α)抑制HBV基因表达的效应及其机制。方法 C57BL/6j小鼠采用高压尾静脉注射p AAV-HBV1.2质粒建立慢性HBV感染小鼠模型,分组同时注射IFN-α-2a表达质粒p KCMvint.IFN-α-2a和对照质粒p KCMvint后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠体内IFN-α表达,雅培ARCHITECT i2000SR检测血清HBs Ag、HBe Ag水平,锥虫蓝染色计数检测肝脾内总淋巴细胞频数,流式细胞术检测CD8~+T细胞的频数、HBV特异性CD8~+T细胞的频数及功能。结果干扰素质粒组IFN-α表达明显高于对照组(P0.01),且血清HBs Ag在注射后第12天就有明显下降,显著快于对照组,并能完全清除HBe Ag;干扰素质粒组的肝内总淋巴细胞、CD8~+T细胞、HBV特异性CD8~+T细胞频数均有高于对照组趋势,且CD8~+T细胞频数两组差异有统计学意义(P0.05);干扰素质粒组HBV特异性CD8~+T细胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2能力均有高于对照组的趋势,且分泌IFN-γ能力两组差异具有统计学意义(P0.05)。结论 IFN-α体内过表达可以上调小鼠肝内HBV特异性CD8~+T细胞的频数和功能,抑制慢性HBV感染小鼠模型内HBs Ag和HBe Ag的表达。提示IFN-α可以通过增强抗HBV免疫应答来发挥抗病毒效应。     

中国华南地区慢性乙型肝炎患者HLA-A等位基因分布的初步调查及其意义

目的 了解中国华南地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HLA-A11、A2、A24、A33等位基因的分布状况,并为筛选HBV特异性CTL新表位提供必要背景资料.方法 以267例CHB患者和300例健康献血员为研究对象,提取其外周血染色体基因组DNA,用PCR-SSP法进行HLA-A11、A2、A24、A33等位基因检测型,并进行统计学比较.结果 CHB组HLA-A11、A2、A24、A33的基因频率分别为57%、41%、21%、7%,以HLA-A11最常见,较HLA-A2的基因频率高16%.健康对照组四种HLA-A等位基因的频率分别为57%、46%、24%、14%,HLA-A11较HLA-A2的频率高¨%.HLA-A33的频率在两组间有显著差异(x2=7.556,P=0.006).CHB组HLA-A2/A11、A2/A24、A2/A33、A11/A24、A11/A33、A24/A33的基因频率分别为17%、4%、1%、16%、4%、0.4%,健康人群则为18%、8%、4%、11%、5%、1%,各种基因组合的出现率在两组间近似.HBeAg( )与HBeAg(-)CHB组比较,HLA-A11(x2=3.324,P=0.072)、A2(x2=0.324,P=0.569)、A24(x2=0.308,P=0.579)、A33(x2=1.159,P=0.282)等位基因的频率分布在两组间无显著性差异.结论 中国华南地区CHB患者和健康人群的主要HLA-A等位基因均为HLA-A11、A2、A24及A33,以HLA-A11最为多见,提示鉴定HLA-A11限制性HBV特异性CTL新表位具有十分重要的意义;此四种等位基因及其组合模式与CHB患者的HBeAg状态无明显相关,但与HBV感染的其他临床特点及抗病毒治疗应答之间的关系有待研究.     

阿德福韦耐药乙型肝炎病毒株的快速检测和动态观察

目的设计PCR联合限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）快速检测HBV阿德福韦耐药变异（rtN236T）的方法以及观察阿德福韦耐药毒株的动态变化情况。方法7例乙型肝炎患者在阿德福韦单药治疗过程中出现病毒突破或应答不完全。对其系列血清标本的HBVDNA逆转录酶部分区域进行直接或克隆后测序，设计和应用PCR—RFLP方法对rt236位点的变异情况进行检测。采用Hamming距离法计算HBV部分逆转录酶区域的基因多样性。结果l例患者出现rtA18IV变异，3例为rtN236T变异。建立了基于限制性内切酶DraI或HpaI的PCR—RFLP方法检测rtN236T变异：可以检测至少10％的弱势毒株，特异性为100％。在病毒突破前8个月可以检测到耐药毒株；该耐药毒株后来成为优势毒株。1例患者停用阿德福韦3个月后野生毒株取代耐药毒株重新成为优势株。1例患者在病毒突破后继续服用阿德福韦，rtN236T突变被一个新的突变株（rtN236V）替代。拉米夫定耐药患者的HBV逆转录酶有更明显的基因多样性。结论建立了PCR—RFLP快速检测rtN236T变异的方法；阿德福韦耐药毒株可以表现为不同的转化过程。     

乙型肝炎病毒三种基因分型方法的比较分析

随着乙型肝炎病毒（HBV）全基因序列测定病毒株的增多，近年人们开始根据生物系统发生学中的基因分类法建立HBV的基因分型技术和标准。对HBV进行基因分型有利于对HBV感染的流行病学、病因学和临床诊断与治疗进行更加深入细致的研究，现有研究表明不同亚型HBV感染的临床病程和对治疗的反应都存在一定的差异。我们分别应用自行建立的实时荧光聚合酶链反应（PCR）法、HBVS基因测序法和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法对75例慢性乙型肝炎患者的血清基因型进行检测，并对检测结果进行分析比较。     

乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系的建立

目的构建1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系。方法在野毒株1.3拷贝HBV载体的基础上采用定点突变的方法将rtL180M,rtM204V位点突变,构建拉米夫定耐药病毒株,并通过PCR、限制性内切酶酶切,分别以正向和反向将野毒株和耐药株分别连接于逆转录病毒载体pLNCX2的相应酶切位点,构建成重组逆转录病毒载体,经双酶切及PCR扩增鉴定。重组载体转染包装细胞,筛选培养细胞克隆并进行病毒滴定。结果通过双酶切、PCR扩增、测序鉴定证实成功构建了1.3拷贝HBV拉米夫定耐药株的逆转录病毒载体。成功建立包装细胞系并测得病毒滴度均为1×105cuf/ml。结论含正向及反向1.3拷贝HBV拉米夫定耐药的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系构建成功,可以用于拉米夫定耐药细胞模型研究。