99Tc-rh-Annexin V检测单次化疗后肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的：分析99Tcm直接标记法标记重组膜联蛋白V（99Tcm-rh-Annexin Ⅴ）在小鼠体内的生理性分布特点，探讨其评价单次化疗后肿瘤细胞的凋亡状况的可行性。方法：采用直接标记法标记rh-Annexin Ⅴ；应用SPECT及井型闪烁探测器观察不同时间示踪剂在A组（正常小鼠）体内的生理性分布状况，并计算每克组织百分注射剂量率（%ID/g）；B组为荷瘤组，将小鼠肝癌细胞（Hca-F25）接种于小鼠右腋下部位；随机分为4个亚组（B1，n=6；B2，n=5；B3，n=3；B4，n=3），肿瘤生长至直径约1cm时，B1、B3组一次性接受环磷酰胺（cyclophosphamide）腹膜内注射，剂量为150mg/kg；20h后，B1、B2组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-Annexin Ⅴ（剂量为5.55MBq/0.5μg/0.1ml/只），B3、B4组只注入相同放射性活度的高锝酸盐及还原剂，而不标记Annexin Ⅴ；6h后分别显像、处死、取材；比较各亚组间肿瘤组织的%ID/g、靶/本底比值（T/M、T/B）以及流式细胞分析凋亡细胞（Annexin Ⅴ阳性／PI阴性）百分比。结果：99Tcm-rh-Annexin Ⅴ在肾脏中的生理性分布最高，肝脏中分布较少，而其它组织及脏器中分布则甚少。B1组瘤体内%ID/g及T/M、T/B比值明显高于其余3个亚组（P<0.05），而B2、B3、B4组之间无明显差异（P>0.05）；B1组肿瘤组织%ID/g与凋亡细胞百分比呈明显正相关（r=0.813，P=0.04），而B2、B3、B4组则不相关（r=0.386，P=0.241）。结论：单次化疗后，肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ的摄取明显增加，且其摄取的程度与肿瘤组织内凋亡细胞的多少呈明显正相关；99Tcm-rh-Annexin Ⅴ显像可以较为准确地反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况。     

噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

目的 通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定.方法 建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力.结果 成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPACl受体结合.结论 通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽.     

靶向整合素αvβ3受体的二硫键成环的RGD肽的设计、131I标记及在荷瘤鼠中的生物分布与显像

[目的]设计与制备^131I标记的针对αvβ3受体的通过二硫键成环的RGD肽,研究其在肿瘤中的摄取情况。[方法]根据文献报道的构效关系研究结果设计RGD肽,基于αvβ3受体的胞外区及其配体复合物三维晶体结构,通过分子对接筛选出能量打分最低的多肽结构;采用ChT法进行^131I标记,建立荷黑色素瘤动物模型,进行体内分布实验、非标记肽竞争抑制实验及肿瘤显像研究。[结果]c（CRGDYC）具有最低的对接能量,其^131I的标记率为90%,放射化学纯度达99%;^131I-c（CRGDYC）在肿瘤中有较高的摄取率,且清除缓慢,静脉注射后24h,肿瘤与肌肉（T/M）和肿瘤与血液（T/B）摄取比值分别为6.34与1.1。未标记肽可明显抑制肿瘤对^131I-c（CRGDYC）的摄取。静脉注射后1h即可见肿瘤显影,随时间延长,影像逐渐清晰,148h仍可见肿瘤影像。[结论]c（CRGDYC）可被肿瘤组织特异性摄取并有较高的摄取率和较长的滞留时间,有可能应用于肿瘤血管生成显像与肿瘤治疗。     

受体结合实验及其在放射性显像剂研究中的应用进展

受体结合实验是一种重要的药物筛选方法,它通过体外实验来考察配体与受体的结合能力.目前,很多放射性显像剂是利用放射性配体与体内受体结合的高度选择性来进行受体显像的.因此,受体结合实验是放射性显像剂研究中广泛使用的一种体外评价方法,在放射性显像剂设计与筛选中发挥了重要作用.     

正电子放射性显像剂代谢及其研究方法进展

正电子放射性显像剂主要用于PET的研究,能在分子水平上反映细胞代谢、细胞受体活性、细胞核内的核酸合成以及细胞基因的改变,在临床疾病诊断和治疗中有重要的地位和作用.PET显像剂进入生物体内后会发生代谢转化,了解PET显像剂的代谢途径和转化过程,对于准确分析和解释显像结果及设计开发新型PET显像剂非常重要.该文总结了目前PET显像剂代谢研究的现状,并对PET显像剂代谢研究方法以及分析技术等进行了综述.     

单次化疗后早期肿瘤内~(99)Tc~m-rh-Annexin Ⅴ分布与VEGF、Survivin表达的相关性研究

目的:探讨单次化疗前、后肿瘤组织内99Tcm-重组膜联蛋白V(rh-Annexin V)的分布与血管内皮生长因子(VEGF)表达及Survivin蛋白表达的相关性及其潜在临床应用价值。方法:采用99Tcm直接标记法标记rh-Annexin V,作为核素凋亡显像示踪剂。将小鼠肝癌细胞Hca-F25接种于小鼠右腋窝皮下;随机分为A(n=9,对照组)、B(n=10,化疗组)两组;肿瘤生长至直径约1cm时,B组一次性接受环磷酰胺腹腔内注射,剂量为150mg/kg;20h后两组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-Annexin V[3.7～7.4MBq/(0.5μg·0.1ml)];4h后行SPECT显像并处死、取材,应用井型闪烁计数器检测荷瘤小鼠肿瘤组织内示踪剂分布,以每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示。采用免疫组化SP法检测标本中VEGF及Survivin蛋白表达。结果:B组肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin V分布明显多于A组,而Survivin蛋白表达A组明显高于B组,差异均有显著统计学意义(P<0.01);VEGF表达在A、B组中无显著差异(F=0.072,P>0.05)。相关性研究表明,A组肿瘤组织内,VEGF表达与99Tcm-rh-AnnexinV分布呈明显负相关(n=9,r=-0.713,Y=-8.139X 4.395,F=7.240,P=0.031),与Survivin蛋白表达呈明显正相关(n=9,r=0.776,Y=0.848X-1.888,F=10.573,P=0.014);B组肿瘤组织内,VEGF表达与99Tcm-Annexin V分布及Survivin蛋白表达均无明确相关性。肿瘤组织内Sur-vivin蛋白表达与99Tcm-Annexin V分布在A、B组内呈明显负相关。结论:化疗后早期,肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin V分布较VEGF表达更能真实地反映肿瘤细胞的凋亡状态;VEGF抑制肿瘤细胞凋亡的特性可能需要高表达的Survivin蛋白所介导。     

微透析取样组合PET技术的应用进展

PET是一种先进的新型分子功能显像技术,PET信号是特定组织的细胞内外和血管中放射性探针以及它的放射性代谢产物总和,但不能提供化学信息或区分放射性物质存在的隔室.微透析技术是一种在体取样技术,可以监测取样部位细胞外液中化学成分的变化.微透析与PET技术结合,从不同角度实现了对靶组织的动态监测,对于疾病的诊断和病理学研究具有重要意义,是药理学和药物代谢研究的有用工具.     

RGD肽类肿瘤靶向受体显像的研究现状及前景

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的小分子多肽,与整合素ανβ3受体有高度的选择性和亲和力.RGD肽与整合素ανβ3受体的特异性结合可介导多种病理生理过程的发生,尤其在肿瘤细胞的黏附、转移和肿瘤新生血管生成中起重要作用.因此,整合素ανβ3受体有望成为新型放射性药物的靶点,而放射性核素标记的RGD肽也可能成为潜在的肿瘤受体显像剂而应用于临床.本文对RGD肽类肿瘤靶向受体显像的研究现状及前景进行综述.     

~(99)Tc~m标记双膦酸盐骨显像剂的研究进展

双膦酸盐是一类具有很强亲骨性的药物,99Tcm标记的双膦酸盐如~(99)Tc~m-亚甲基二膦酸盐(~(99)Tc~m-MDP)等被广泛应用于骨显像.近些年来,为了克服~(99)Tc~m-MDP的缺点,许多新型的双膦酸配体被设计与合成,以期望获得性能更加优异的骨显像剂.该文对近10年来发展的99Tcm标记双膦酸盐类骨显像剂的结构与性能进行了综述.