白藜芦醇对HSC-T6细胞NLRP3炎性体活化的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6细胞内Nod样受体蛋白3(nodlike receptor protein 3,NLRP3)炎性体活化的影响,探讨Res抗肝纤维化的作用机制,为Res的临床应用提供理论依据.方法体外培养大鼠HSC系HSC-T6,细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入Res(4、8、16μmol/L)或乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)孵育24 h.随后加入过氧化氢(0.2 mmol/L)孵育4 h制作氧化应激模型.采用MTT法检测细胞增殖水平.ELISA法检测细胞培养上清液中的I型胶原(collagen type 1,COL-1)、转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量.荧光酶标仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量.Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、caspase1的表达.结果与对照组比较,Res在浓度范围4-64μmol/L对HSC-T6细胞均有显著的抑制效应(P0.01).与对照组比较,氧化应激模型组细胞增殖率,细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量,细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、caspase1-p10蛋白表达均呈显著增高趋势(P0.01);细胞上清液中SOD含量呈明显下降趋势(P0.01).与模型组比较,Res低、中、高剂量及阳性对照药NAC均可显著抑制HSC-T6细胞增殖率,减少细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、I L-18含量,细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、ASC、caspase1-p10蛋白表达(P0.01);显著提高细胞上清液中SOD的含量(P0.01).结论R e s能够通过调节ROS-NLRP3炎性体通路抑制HSC-T6细胞的增殖与活化.     

溃疡性结肠炎薄白苔和黄腻苔患者的肠道菌群特征分析

  目的：通过分析溃疡性结肠炎(UC)薄白苔、黄腻苔患者的肠道菌群特征,探讨UC患者舌苔与肠道菌群之间的关系。  方法：选取UC薄白苔患者、UC黄腻苔患者、健康对照者各35例,分别设为UC薄白苔组、UC黄腻苔组、健康对照组。收集粪便标本,采用16S rDNA基因测序分析技术和生物信息学方法分析比较各组肠道菌群的多样性和丰度。  结果：①与健康对照组比较,UC薄白苔、黄腻苔组患者肠道菌群物种的丰富度和多样性降低(P＜0.001),肠道菌群物种数量减少;与UC薄白苔组比较,UC黄腻苔组患者肠道菌群丰富度差异无统计学意义(P＞0.05),但肠道菌群物种数量减少。②门水平差异分析:与健康对照组比较,UC薄白苔、黄腻苔组患者肠道菌群中厚壁菌门(Firmicutes)减少(P＜0.05);与UC薄白苔组比较,UC黄腻苔组患者肠道菌群中蓝细菌门(Cyanobacteria)增多(P＜0.05)。③属水平差异分析:与健康对照组比较,UC薄白苔组患者肠道菌群中埃希氏-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)、链球菌属(Streptococcus)等增多(P＜0.05),罕见小球菌属(Subdoligranulum)、多尔氏菌属(Dorea)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、罗氏菌属(Roseburia)等减少(P＜0.05);UC黄腻苔组患者肠道菌群中埃希氏-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)、乳杆菌属(Lactobacillus)等增多(P＜0.05),多尔氏菌属(Dorea)、罕见小球菌属(Subdoligranulum)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)、罗氏菌属(Roseburia)等减少(P＜0.05)。与UC薄白苔组比较,UC黄腻苔组患者肠道菌群链球菌(Streptococcus)增多(P＜0.05),巨球型菌属(Megasphaera)、拟普氏菌属(Alloprevotella)、普氏菌属(Prevotella)、奈瑟氏菌属(Neisseria)等减少(P＜0.05)。④LDA判定(纲、目、科水平):UC薄白苔组患者肠道菌群中普氏菌科(f_Prevotellaceae)、奈瑟氏球菌目(o_Neisseriales)、奈瑟氏球菌科(f_Neisseriaceae)丰度显著多于UC黄腻苔组(LDA＞2.0),UC黄腻苔组患者肠道菌群中杆菌纲(c_Bacilli)、乳杆菌目(o_Lactobacillales)、链球菌科(f_Streptococcaceae)、消化链球菌科(f_Peptostreptococcaceae)丰度显著高于UC薄白苔组(LDA＞2.0)。  结论：UC薄白苔、黄腻苔患者肠道菌群丰富度和多样性均较健康者明显下降;UC薄白苔患者和UC黄腻苔患者在肠道菌群组成和细菌丰度上均存在差异,黄腻苔患者肠道致病性细菌增多而具有潜在保护作用的细菌减少;肠道菌群检测可以为舌诊现代化提供一定的信息。     

黄芪多糖对毒胡萝卜素诱导人结肠癌系HT29细胞内质网应激的影响

目的探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,AP)对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导人结肠癌系HT29细胞发生内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)时内质网结构变化及相关分子GRP78和CHOP的影响。方法常规培养HT29细胞后,将细胞分为4组:①空白细胞组(Control组):细胞不做任何药物处理;②细胞模型组(Model组):采用1μmol/L Tg诱导HT29细胞建立ERS模型;③黄芪多糖低浓度组(AP-L组);④黄芪多糖高浓度组(AP-H组)。CCK8法检测黄芪多糖对HT29细胞活性,透射电镜观察内质网结构变化,Real-time PCR法检测ERS时GRP78、CHOP mRNA表达情况。结果黄芪多糖浓度分别为1、10μg/mL,且分别作用HT29细胞12、24、36、48 h时,细胞存活率随着浓度的增加而增加,说明对细胞无明显毒副作用。透射电镜观察Control组内质网结构呈网膜状结构,网膜腔不扩张;Model组内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象;AP-L组内质网网膜腔扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;AP-H组内质网形态基本恢复正常,呈网膜状结构,可见数量较少,形态较小的空泡状结构。Real-time PCR法检测结果:与Control组相比,Model组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达明显增加(P<0.05);与Model组比较,AP-L组和AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达均减少(P<0.05);与AP-L组比较,AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达减少(P<0.05)。结论黄芪多糖能够抑制Tg诱导HT29细胞发生ERS,其机制可能与降低GRP78和CHOP的表达、减轻内质网应激有关。     

Salubrinal保护人结肠癌系HT29细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的:探讨Salubrinal对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡的保护作用及机制。方法:以HT29细胞为研究对象,分别给予不同浓度的Salubrinal(1、10、50μg/mL)预处理,30 min后加入Tg(1μmol/L),继续培养24 h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对HT29细胞凋亡进行检测;Western Blot法检测凋亡蛋白Caspase-12的表达变化。结果:通过流式细胞仪测定,HT29细胞早期凋亡率为(9.67±1.03)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(35.64±1.62),明显增加(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,随着剂量的增加,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)。TUNEL检测正常空白组细胞凋亡率为(6.94±0.97)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(34.56±1.45)%(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)(P0.05)。Western Blot检测结果表明,Caspase-12在正常空白组表达较低,HT29细胞经药物干预24后,在1μmol/L Tg诱导模型组表达增高(P0.05);通过不同浓度Salubrinal干预后,随着其浓度的增加凋亡蛋白Caspase-12表达逐渐降低(P0.05)。结论:Salubrinal对毒胡萝卜素内酯诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡具有保护作用,作用机制可能与抑制内质网应激凋亡通路有关。     

白藜芦醇对急性肝损伤小鼠NLRP3炎性体表达的影响

目的观察白藜芦醇对急性肝损伤(acute liver injury,ALI)小鼠Nod样受体家族3(Nod-like receptor 3,NLRP3)炎性体表达的影响,探讨白藜芦醇对ALI的保护作用及其机制。方法本实验采用四氯化碳制作ALI小鼠模型。将雄性ICR小鼠随机分成正常对照组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组及阳性对照组,每组7只。白藜芦醇低、中、高剂量组及阳性对照组于造模前24 h及1 h分别腹腔注射剂量为10、20及30 mg/kg的白藜芦醇或剂量为100 mg/kg的乙酰半胱氨酸,对照组及模型组在相应时间点腹腔注射等量生理盐水,造模时模型组及各药物干预组采用腹腔注射5%四氯化碳,对照组腹腔注射等量橄榄油。采用蛋白质印迹(Western blot,WB)法测定小鼠肝组织NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein contain,ASC)、炎性半胱天冬酶-1(caspase-1)蛋白,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测炎症因子白介素(interleukin,IL)-1β及IL-18,全自动生化分析仪测定小鼠肝功能,病理组织学观察肝脏损伤情况及其程度。结果模型组小鼠谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)及谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平高于正常对照组(P<0.01);白藜芦醇各剂量组及阳性对照组小鼠ALT及AST水平均低于模型组(P<0.01)。模型组小鼠肝脏炎症积分及损伤面积均高于正常对照组(P<0.01);白藜芦醇各剂量组及阳性对照组小鼠肝脏炎症积分及损伤面积均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组小鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18表达高于正常对照组(P<0.01);白藜芦醇各剂量组及阳性对照组小鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18表达均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。病理组织切片显示,模型组小鼠肝细胞结构表现为胞浆疏松,小叶内坏死灶较多,坏死灶中可见中性粒细胞浸润;白藜芦醇各剂量组及阳性对照组小叶内坏死灶及中性粒细胞浸润等改变较模型组减少,肝细胞的受损面积较小。结论白藜芦醇可以显著减轻四氯化碳诱导的ALI,其机制可能与抑制NLRP3炎性体活化及其下游炎症级联反应有关。     

疏肝健脾养心法对慢性乙型肝炎伴焦虑抑郁状态患者肝纤维化的影响

目的 探讨疏肝健脾养心法对慢性乙型肝炎(CHB)伴焦虑抑郁状态患者纤维化指标的影响.方法 采用随机数字表法将72例患者按1:1对照原则随机分为治疗组(疏肝健脾养心组)和对照组(疏肝健脾组),各36例.分别在西医基础治疗的同时予疏肝健脾养心法组方及疏肝健脾法组方治疗,疗程为12周.最终纳入患者69例,其中治疗组34例,对照组35例.对治疗前后患者的肝纤四项及肝纤维化评分进行观察.结果 疏肝健脾养心法联合西医基础治疗可显著改善患者肝纤四项及肝纤维化评分,其疗效优于疏肝健脾法联合西医基础治疗.结论 疏肝健脾养心法中药联合基础治疗慢性乙型肝炎伴焦虑抑郁状态患者疗效显著.     

逍遥散联合恩替卡韦对肝郁脾虚型乙型肝炎肝硬化代偿期患者纤维化及铁代谢的影响

目的观察逍遥散联合恩替卡韦对肝郁脾虚型乙型肝炎肝硬化代偿期患者的肝纤维化指标、门静脉压力的影响,比较正常人及肝郁脾虚型乙型肝炎肝硬化代偿期患者治疗前后血清中铁代谢相关指标,并初步探讨联合用药的作用机制。方法采用随机数字表法将72例患者分为两组,各36例,治疗组予逍遥散联合恩替卡韦治疗,对照组仅予恩替卡韦治疗,两组疗程均为6个月;观察患者治疗前后总体疗效、肝纤维化指标、肝纤维化评分、腹部彩超参数(包括门静脉内径、脾厚度、脾长度)以及血清铁、铁蛋白、总铁结合力、铁调素(hepcidin)等指标变化。结果治疗组总有效率为90.00%,对照组总有效率为66.67%,治疗组总体疗效优于对照组(P<0.05)。治疗后两组纤维化指标HA、LN、IV-COL、PIIINP各项均较治疗前明显下降,且两组间比较,差异均有统计学差异(P<0.05);治疗组患者治疗后APRI、GPR指数均较前明显下降(P<0.05)。两组治疗后APRI、FIB-4、GPR各项指数改善治疗组疗效均优于对照组(P<0.05)。与健康人比较,肝郁脾虚型乙肝肝硬化代偿期患者血清中铁、铁蛋白、hepcidin显著升高,总铁结合力显著下降(P<0.05)。治疗后治疗组血清中铁、铁蛋白、hepcidin明显下降,总铁结合力明显升高(P<0.05);对照组血清中铁、铁蛋白、明显下降(P<0.05);治疗组改善血清铁、总铁结合力、hepcidin的疗效优于对照组(P<0.05)。结论逍遥散联合恩替卡韦在改善肝纤维化方面疗效优于单用恩替卡韦。联合用药能够在一定程度上改善患者铁过载水平,其作用机制可能与调节机体铁代谢平衡有关。     

逍遥散及其功效拆方对慢性铁过载诱导的肝纤维化的影响

目的通过制作慢性铁过载诱导的大鼠肝纤维化模型,观察逍遥散对肝纤维化的改善作用及对体内铁代谢过程的影响,并通过功效拆方研究,探索逍遥散中疏肝药、健脾药、养血药在整方疗效中的作用及地位。方法 通过腹腔注射右旋糖酐铁50 mg/kg/d,连续7周制作慢性铁过载诱导的大鼠肝纤维化模型,药物干预在造模同时每日通过灌胃的方式给予逍遥散全方、逍遥散去疏肝药、逍遥散去健脾药、逍遥散去养血药、去铁胺（DFO）。使用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、血清铁（SI）、铁蛋白（SF）水平;肝组织进行病理组织学检测,包括HE染色、Masson染色、苦味酸-天狼星红染色等;免疫组化检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA）、I型胶原蛋白（COL-1）的表达水平;采用火焰原子吸收光谱法检测大鼠肝组织铁含量。结果 与对照组比较,模型组大鼠肝功能ALT、AST明显升高,病理切片HE染色符合肝纤维化镜下表现,Ishak纤维化评分显著升高,Masson染色、苦味酸-天狼星红染色可见胶原纤维沉积明显,免疫组化结果提示肝组织内α-SMA、COL-1表达显著上升,血清铁、铁蛋白、肝脏总铁含量均显著升高。与模型组比较,逍遥散全方及各功效拆方组可明显降低大鼠肝功能ALT、AST,改善病理过程如Ishak评分及胶原染色半定量等均显著下降,肝组织α-SMA、COL-1表达显著降低,血清铁、铁蛋白、肝脏总铁含量亦明显下降,阳性对照药物去铁胺结果与逍遥散全方相仿。与逍遥散全方相比,逍遥散各功效拆方组均较整方疗效有显著降低。结论 逍遥散可显著改善慢性铁过载诱导的大鼠肝纤维化,其方中疏肝药、健脾药、养血药均对改善铁过载及纤维化有一定作用。推测逍遥散抑制铁过载维持铁稳态的作用可能是其疏肝、健脾、养血功效的核心机制。     

健脾清肠汤联合左氧氟沙星治疗急性胃肠炎临床观察

目的 观察健脾清肠汤治疗急性胃肠炎疗效。方法 采用随机对照的研究方法，对照组患者44例予左氧氟沙星治疗。中西医结合组患者39例在此基础上加用健脾清肠汤，疗程7天。比较两组患者的疗效及症状缓解时间。结果 两组临床总疗效比较，中西医结合组优于对照组（P＜0.05）。且在腹泻及腹痛的缓解时间上，中西医结合组优于对照组。（腹痛P＜0.05，腹泻P＜0.01）。结论 健脾清肠汤能有效改善急性胃肠炎的临床症状，疗效确切。