干扰素对人肝癌细胞株HepG2.2.15凋亡的影响

目的：探讨肝癌细胞株HepG2.2.15通过低表达Fas逃避免疫监视，以及干扰素α(IFN-α)通过上调Fas 表达对细胞凋亡的影响。方法：用流式细胞术检测肝癌细胞株HepG2.2.15的 Fas表达及IFN-α对其Fas表达的影响；用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡的方法，研究肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗以及IFN α对肝癌细胞凋亡的影响。结果：① HepG2.2.15细胞低表达Fas，经浓度分别为2000、1000、　500U/ml的IFN-α作用后，Fas表达均显著增加(P均<0.001)，且Fas表达率随IFN-α浓度的增加而增加；②CH11不能诱导HepG2.2.15细胞凋亡，IFN-α上调细胞Fas表达后，由CH11诱导的细胞凋亡增加(P均<0.01)，且凋亡率随IFN-α浓度的增加而增加。结论：肝癌细胞HepG2.2.15能抵抗Fas介导的凋亡，IFN-α可通过上调细胞Fas表达，促进CH11诱导的肝癌细胞凋亡。     

淫羊藿甙对人高转移肺癌细胞膜的影响

本研究采用流式细胞术及荧光探针标记技术检测了淫羊藿甙对人高转移肺癌细胞膜的影响。结果表明,淫羊藿甙可提高PG细胞膜流动性,增加膜表面HLA-ABC抗原的表达,增强肿瘤细胞的抗原性,这可能是淫羊藿甙的抗瘤作用机制之一。     

血清IL-1 β、TNFα变化对肝硬化患者骨代谢的影响

１．研究对象：（１）肝硬化组：乙型肝炎后肝硬化患者３６例,均为男性,平均年龄（４８±７）岁。并根据尺挠骨密度均值减２倍标准差以下诊断为骨质疏松（ｏｓｔｅｏ－ｐｏｒｏｓｉｓ, ＯＰ）,将患者分为 ＯＰ及非骨质疏松（ ＮＯＰ）两组。（２）对照组： １５例男性,平均年龄（４７ ± １０）岁,为体检筛选的健康人。 ２．检测项目：（１）血清 ＩＬ—１β比利时Ｂｉｏｓｏｕｒ公司、 ＴＮＦ α深圳晶美、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ）,ｒ一羧基谷氨酸蛋白（ＢＧＰ）,美国ＩＮＣＳＴＡＲ公司及尿骨胶原交联（Ｃｒｏｓｓｌａｐ…     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β ２免疫抑制作用的抗肿瘤研究 *

研究淫羊藿甙(ICA)对PG细胞分泌转化生长因子β ２(transforming growth factor β ２,TGFβ ２)的影响、ICA逆转TGFβ2介导的免疫抑制作用及其机制。方法: MTT法检测细胞增殖、杀伤活性,RT-PCR检测TGFβ 2、穿孔素,流式细胞术检测TGFβ ２、IL-２Ｒα水平。结果: ICA可抑制PG细胞中TGFβ 2的蛋白和mRNA表达,能够逆转受TGFβ 2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性,并能部分恢复受TGFβ ２抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平,以及CD3AK细胞的增殖活性。结论: 淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子TGFβ 2的产生,增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β_2免疫抑制作用的抗肿瘤研究

目的：研究淫羊藿甙（ＩＣＡ）对ＰＧ细胞分泌转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦβ２）的影响、ＩＣＡ逆转ＴＧＦβ２介导的免疫抑制作用及其机制。方法：ＭＴＦ法检测细胞增殖、杀伤活性,ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＧＦβ２、穿孔素,流式细胞术检测ＴＧＦβ２、ＩＬ－２Ｒα水平。结果：ＩＣＡ可抑制ＰＧ细胞中ＴＧＦβ２的蛋白和ｍＲＮＡ表达,能够逆转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性,并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平,以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。结论：淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子ＴＧＦβ２的产生,增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。     

中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.     

淫羊藿甙的体外免疫调节作用研究

淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的主要单体。采用依赖细胞株法和乳酸脱氢酶4h释放法，分别检测了淫羊藿甙协同诱生IL－2、IL－3、IL－6，及对NK、LAK细胞杀伤活性的影响。结果表明：建羊藿甙可协同PHA诱导扁桃体单个核细胞产生IL－2、3、6呈剂量依赖关系，动力学观察表明：IL－2、IL－6的分泌高峰时相为作用后48h，IL－3的分泌高峰时相为作用后72h。淫羊藿甙可以提高扁桃体单个核细胞NK、LAK细胞杀伤活性；动力学观察表明：在诱导第5天时LAK细胞杀伤活性最强。提示淫羊藿甙是一种有效的生物反应调节剂。     

IL⁃18诱导的单核细胞THP⁃1对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨外源性白介素18（interleukin 18,IL?18）对单核细胞THP?1的活化作用以及IL?18激活诱导的THP?1对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过IL?18体外诱导THP?1模拟激活体内肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage,TAM）的作用。Transwell法检测IL?18对单核细胞THP?1的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞后流式细胞术检测M1、M2型TAM的比例;IL?18激活诱导的THP?1和肺癌细胞A549共培养,分别以克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测共培养后A549细胞增殖、迁移和侵袭的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT?PCR和Western blot检测共培养后A549细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）标志蛋白E?cadherin和N?cadherin、Snail以及Slug的表达。结果：IL?18对THP?1细胞具有显著的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞表型向M2 TAM方向分化;IL?18诱导THP?1促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜结果显示IL?18诱导THP?1促进A549细胞伪足生长;qRT?PCR和Western blot检测结果显示经IL?18诱导的THP?1抑制A549细胞E?cadherin的表达,促进N?cadherin、Snail以及Slug的表达,说明IL?18诱导THP?1激活A549细胞发生EMT。结论：IL?18可以诱导THP?1并促进其活化,活化后的THP?1通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

FasL反义寡核苷酸逆转肝癌细胞免疫逃逸的实验研究

目的:研究FasL反义寡核苷酸对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas、FasL的表达及Jurkat细胞表面Fas的表达;用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养方法,研究FasL诱导T细胞凋亡的功能;用脂质体介导法转导FasL反义寡核苷酸入肝癌细胞,并通过检测细胞表面FasL表达、RTPCR及细胞共培养方法研究FasL反义寡核苷酸转导对肝癌细胞免疫抑制的逆转作用。结果:①HepG2.2.15细胞低表达Fas,却表达有功能的FasL,与高表达Fas的Jurkat细胞共培养可诱导后者凋亡;②肝癌细胞转入FasL反义寡核苷酸后,FasLmRNA降低;细胞表面FasL表达下降;与Jurkat细胞共培养,Jurkat细胞的凋亡率下降。结论:肝癌细胞表达的FasL可抑制T细胞的免疫功能,是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一;FasL反义寡核苷酸转导可以逆转肝癌细胞的免疫抑制作用。