晶状体膜蛋白MIP基因C末端一个新的错义突变导致双眼多形性先天性白内障

目的 定位一个双眼多形性先天性白内障家系的致病位点,寻找疾病家系的致病基因.方法 应用ABI-MD10试剂盒中的常染色体382个微卫星位点,对一个常染色体显性、双眼具有不同白内障形态的先天性白内障家系进行全基因组扫描.MLINK软件进行两点连锁分析.直接测序候选基因外显子.结果 在D12S83处获得最大LOD值Zmax=5.44(θ=0),该家系致病位点被定位到12p11.2-q15之间的区域上,在该区域的白内障候选基因晶状体膜蛋白基因(major intrinsic protein,MIP)的第4外显子中发现单个碱基错义突变,702ntG→A,导致p.R233K.结论 该先天性白内障由MIP基因702ntG→A突变所致,导致MIP蛋白质的C-末端中p.R233K,从而可能减少了氢键的形成,影响了该蛋白C-末端的稳定性,推测影响了MIP对水的调节及由该蛋白质形成的细胞之间的连接.这一新突变为目前世界上首次报道.     

Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨

目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.     

蛇足石杉内生真菌2F09P03B产石杉碱甲发酵条件的研究

 目的 研究发酵条件对蛇足石杉支顶孢属内生真菌2F09P03B 石杉碱甲生成的影响，并探讨发酵条件的优化。 方法 通过测定 2F09P03B 生长曲线、石杉碱甲积累曲线和培养液 pH 值随时间的变化情况，了解该菌株的培养特性；考察不同碳源和氮源对石杉碱甲积累的影响。在单因素试验的基础上，利用正交试验优化培养基碳源、氮源组成；考察 MgSO4、KH2PO4、NaCl、CaSO4 对石杉碱甲生成的影响，确定无机盐组成；优化接种量、发酵时间、培养温度、摇床转速等发酵工艺条件。 结果 菌株 2F09P03B 的最佳培养基组成为：马铃薯 150 g/L，玉米粉 30 g/L，麦芽糖 25 g/L，酵母膏 10 g/L，麸皮 30 g/L，KH2PO4 1.5 g/L，MgSO4 0.5g/L，NaCl 0.3 g/L，CaSO4 0.3 g/L，pH 自然；最佳发酵工艺条件为：接种量 8%，发酵时间 10 d，培养温度 28 ℃，摇床转数 140 r/min。在此条件下，发酵液中石杉碱甲含量为 8.17 μg/L，最高达到 8.32 μg/L，约为其干重的 0.07% 左右。 结论 发酵条件对菌株 2F09P03B 石杉碱甲产量有明显影响。优化后的发酵条件可使该菌株石杉碱甲产量明显提高，有望成为石杉碱甲新药源。     

人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

伤寒减毒活疫苗Ty21a免疫前后小鼠肠细胞差异表达的基因

以基因表达谱芯片对Ty2 1a免疫前后小鼠肠细胞 (包括肠粘膜上皮细胞和肠上皮间淋巴细胞 )基因表达的差异性进行研究比较。将 490条经抑制消减杂交法筛选出的与小鼠Ty2 1a免疫相关的cDNA制备成表达谱芯片 ;利用免疫前后小鼠肠细胞的mRNA通过逆转录方法 ,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上 ,制备成cDNA探针 ,并与表达谱芯片进行杂交及扫描 ,单点重复 2次实验 ,通过计算机数据处理判定基因是否在上述两种细胞群中有表达差异。筛选出差异表达基因共 98条 ,其中 92条为表达上调基因 ,6条为表达降低基因。提示 ,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法 ,可同时定量研究大量的基因表达水平 ,从而鉴定可能参与免疫的基因。     

鱼腥草注射液抗内毒素性心肌损伤作用的实验研究

目的:揭示鱼腥草注射液抗内毒素诱导的心肌损伤作用的机制。方法:取SD雄性大鼠24只随机分成正常对照组(NC组,n=6),内毒素组(ET组,n=6),鱼腥草注射液+内毒素组(HHI+ET组,n=6)和单纯鱼腥草注射液组(HHI组,n=6),在Langendorff装置上用Krebs-Henseleit(KH)液对大鼠离体心脏行主动脉逆灌。在相应时点以HR、LVSP、LVEDP、LVDP、+dp/dt_max、-dp/dt_max等6项参数为指标,测定冠脉流出液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及心肌组织一氧化氮(NO)含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性。结果:与ET组相比,HHI+ET组在相应时点,左心室压差与心率乘积(LVSP-LVEDP)×HR、LVDP、+dp/dt_max恢复百分率明显改善,对内毒素诱导的心肌SOD、SDH活性的降低和MDA、NO含量的升高有明显抑制作用。结论:鱼腥草注射液具有明显的抗内毒素心肌损伤作用,通过降低心肌中NO的量,增强心肌的抗氧化能力,稳定心肌酶活性和膜相结构等途径,提高心肌对内毒素性损伤的抵抗力。     

白藜芦醇诱导胃癌原代细胞凋亡(英文)

目的：探讨白藜芦醇诱导胃癌原代细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与Bcl-2和Bax之间的关系。 方法： 在体外实验中，采用MTT比色法测定白藜芦醇对胃癌原代细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL 染色法，定性、定量地研究白藜芦醇与胃癌原代细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞生长有明显抑制作用，随白藜芦醇浓度增加和培养时间的延长而增强；白藜芦醇诱导胃癌原代细胞出现典型的凋亡细胞形态；TUNEL 染色法可见，经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞凋亡数明显随时间增加。免疫组化发现经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞的Bcl-2蛋白阳性率减少，Bax蛋白阳性率增加。经白藜芦醇处理24、48、72、96 h后，RT-PCR检测发现胃癌原代细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl-2 mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时间的延长而增强。 结论： 白藜芦醇可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌原代细胞发生凋亡。     

后路腰椎间盘镜治疗多节段腰椎间盘突出症

目的探讨多节段腰椎间盘突出症的后路腰椎间盘镜(MED)手术治疗方法。方法回顾性分析2000年至2004年经MED治疗的45例多节段椎间盘突出症的临床资料。结果对45例患者共93个椎间盘进行了手术，平均住院时间14．8d，平均手术时间92min，平均手术出血量145ml，术后随访3个月至40个月，手术优良率为91．6％。结论多节段腰椎间盘突出症是MED手术治疗的相对适应证，相对于单节段的MED手术，术前定位和术中操作更困难，严格的病例选择和全面的术前分析，辅以熟练的手术操作，仍可获得较为满意的疗效。     

非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区5’-CpG岛的甲基化的研究

目的：探索p15基因异常甲基化在非何杰金淋巴瘤(NHL)中的变化及其在各分型中的表达。 方法：用特异PCR（MSP）的方法检测32例非何杰金淋巴瘤石蜡标本p15基因甲基化；检测非何杰金淋巴瘤患者标本21例，用RT-PCR方法测定p15基因的表达。 结果:非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区甲基化的发生率为18.9%（10/53），高度恶性比低度恶性更易发生甲基化，其发生率分别为27.3%和0%。 结论:p15基因甲基化可能是非何杰金淋巴瘤发病的原因之一，并与病程进展有关。     

聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性

目的 探讨聚乙二醇α-2a干扰素（PEG INFα-2a）治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性。方法 按随机对照原则选择80例HBV DNA、HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者，按1：1随机分配进入PEG INFa-2a组和IFNα-2a组。结果 治疗6个月时，PEG INFα-2a组HBeAg血清转换率（45．7％）高于IFNα-2a组（35．1％），但P〉0．05。停药6个月后，持续的HBeAg血清转换率分别为48．6％和37．8％，P〉0．05。停药6个月后，持续的HBVDNA阴转率分别为62．9％和45．9％，P〉0．05。治疗后，两组的丙氨酸转氨酶（ALT）复常率差异无显著性，为62．9％和45．9％，停药后6个月，两组的联合应答率分别为57．1％和40．5％。PEG INFα-2a组有3例患者HBsAg阴转，而IFNα-2a组仅有1例患者HBsAg阴转。两组有相似的不良反应，不良反应间差异无统计学意义，两组治疗过程中均未发生重要的不良事件。结论PEG INFα-2a治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎疗效优于普通干扰素IFN-2a，耐受性和安全性好。