异种移植免疫学及其潜在风险的研究进展

同种器官移植成功率的提高导致了供体器官的严重短缺.采用解剖学上与人类相近的动物,比如猪的器官可以解决这种危机.但从猪到人的器官移植需要克服很多障碍,包括免疫学,生理学及其伦理道德问题.超急性排斥反应是猪到人异种器官移植的首要免疫学障碍,目前主要通过敲除半乳糖α1,3半乳糖(galactose-α1,3-galactose,Gal)抗原来克服超急性排斥反应.除此之外,仍有其它的非-Gal抗原可能引起猪到人的移植物的失功,例如N-羟乙酰神经氨酸等.除了免疫学障碍,猪器官携带的病毒及可能引起的异种移植的潜在风险也不容忽视.虽然现在还没有明显的实验数据显示猪到人的病原体的感染,但当猪到人的免疫学障碍被克服后,感染将成为又一研究热点.     

HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗宫颈癌的研究

目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对人宫颈癌细胞系Hela体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317.取病毒上清液感染人宫颈癌细胞Hela,得到带有HSV-TK基因的Hela/TK细胞,并将其分别用于体外和体内实验.结果载体HSV-TK导入了PA317细胞.体外实验结果显示,当Hela/TK细胞数占混合细胞10%时,低浓度(10μg/ml)的GCV就可将50%左右的肿瘤细胞杀死.体内实验结果显示GCV可明显抑制Hela/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成.经GCV治疗后,肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约11.1%、30.6%和47.2%(均P＜0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达;实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变.结论逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入人宫颈癌细胞Hela并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内外对宫颈癌细胞均有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应.     

耐热可溶性戊型肝炎病毒基因工程抗原的表达

目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV)结构基因片段，获得耐热，可溶、具有生物活性的HEV基因工程抗原。方法 将HEVORF26964-7126nt基因片段插入硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA，转化大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导，表达融合蛋白。裂解细菌后，离心，取上清置于80℃处理10min，再次离心，取上清用ELISA方法测定表达产物的生物活性。结果 SDS-PAGE分析表明，HEV结构基因获得高效表达，相对分子质量约为20000，耐热，水溶性好，ELISA证实具有HEV特异抗原性。结论 应用硫氧还蛋白融合表达系统成功表达了耐热，可溶，具有生物活性的HEV基因工程抗原。     

哇巴因诱导ECV304细胞凋亡与p120ctn mRNA的表达

目的研究哇巴因对ECV304细胞的作用及相关机制。方法应用MTT法检测哇巴因对细胞生长抑制作用,Hoechst33342/PI双荧光染色分析细胞死亡特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化,半定量RT-PCR法检测P120ctn 1A和P120ctn 3A mRNA的表达。结果哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长;荧光显微镜下可见30%以上细胞为凋亡细胞,20%细胞为晚期凋亡细胞的形态学改变;透射电镜下可见核染色质凝集、边移、凋亡小体形成等细胞形态学变化;RT-PCR结果显示P120ctn 1A mRNA表达较对照组明显降低,P120ctn 3A mRNA表达较对照组明显增强。结论哇巴因能抑制ECV304细胞增殖和诱导其凋亡,并下调P120ctn 1A和上调P120ctn3A mRNA表达。     

放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用

目的 研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用。方法 用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验，用MTT法检测细胞毒作用；用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡；用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果 发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用；而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用。进一步，发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡，在作用9h即出现细胞凋亡(13．60％)，48h达高峰(51％)，并且这种凋亡呈剂量效应关系。我们还发现，HGF可以明显拮抗ActD／TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡，并且呈剂量效应关系。Western blot结果显示，HGF刺激后，磷酸化MAPK蛋白高表达，表明HGF激活了MAPK途径。我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径，发现HGF的抗凋亡作用被阻断；然而，用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后，却并不影响HGF的抗凋亡作用。结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡，而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用；虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径，但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的。     

浙江畲族DYS287、DYS440位点的多态性研究

目的　研究浙江畲族人群中DYS2 87和DYS44 0位点的多态性。方法　采用聚合酶链反应扩增DYS2 87和DYS44 0 ,PCR产物用 2 %的琼脂糖电泳分析 10 0名畲族个体的基因型。结果　 10 0名个体DYS2 87位点全部是YAP-;没有发现YAP ;10名为DYS44 0 3 ,占总人群数的 10 % ,其余 90名是DYS44 0 4。结论　浙江畲族人群DYS2 87和DYS44 0多态性与属于汉藏语系的其它民族之间存在着明显的不同 ,因此这两个基因位点对研究人类的进化是一种稳定的、重要的遗传标记。     

Fast MR Spectroscopic Imaging Technologies and Data Reconstruction Methods

MRSI plays a more and more important role in clinical application. In this paper, we compare several fast MRSI technologies and data reconstruction methods. For the conventional phase encoding MRSI, the data reconstruction using FFT is simple. But the data acquisition is very time consuming and thus prohibitive in clinical settings. Up to now, the MRSI technologies based on echo-planar, spiral trajectories and sensitivity encoding are the fastest in data acquisition, but their data reconstruction is complex. EPSI reconstruction uses shift of odd and even echoes. Spiral SI uses gridding FFT. SENSE-SI, a new approach to reducing the acquisition time, uses the distinct spatial sensitivities of the individual coil elements to recover the missing encoding information. These improvements in data acquisition and image reconstruction provide a potential value of metabolic imaging as a clinical tool.     

终板蛋白多糖的变化对颈椎间盘力学性能的影响

目的:通过测定退变颈椎间盘压缩性能的改变,同时观测软骨终板基质蛋白多糖(proteoglycan PG)的变化,为退变的椎间盘显现异常力学特性作一分子机制上的探讨。方法:将24只家兔随机分为对照组和模型组,模型组家兔保持45°低屈曲住5小时/次·天,取C5-6椎间盘进行生物力学测定;同时生化测定椎间盘终板糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)总量、硫酸软骨素(chongdroitin sulphate,CS)和硫酸角质素(keratan sulphate,KS)比值和透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量;总结分析颈椎间盘退变时基质各成分的系统变化及其对椎间盘力学性能的影响。结果:模型组终板抗压强度、断裂时的最大形变、终板基质蛋白多糖总含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量都低于对照组(P<0.05),并随造模进程的深入而减小。结论:长时间的应力不均状态,造成椎间盘终板材料力学特性改变;颈椎间盘基质蛋白多糖含量和成分改变是颈椎间盘生物力学性能减退的主要原因之一。     

颈椎后路术后颈椎曲度不良与疗效的相关性

目的：探讨颈椎后路手术治疗颈椎退变性疾病后颈椎曲度不良与疗效的相关性。方法：采用颈椎后路减压术治疗颈椎退变性疾病患者85例,其中全椎板减压术26例、单开门椎管扩大成形术39例和单开门棘突重建扩大成形术20例,观察手术后颈椎后凸畸形对治疗效果的影响。结果：经6-72个月,平均18个月随访,颈椎后凸与否,各组之间神经功能改善率差异无统计学意义（P〉0.05）;单开门椎管扩大成形术与单开门棘突重建椎管扩大成形术,术后颈椎后凸发生率低于全椎板减压术（P〈0.05）;颈椎无后凸与轻度后凸（与A、B、C的对应关系）畸形之间的轴性症状发生率无差异,但与明显后凸组相比有差异性（P〈0.05）。结论：颈椎后路减压术是治疗颈椎退变性疾病常用的手术方法,具有椎管容积扩大明显等优点。但减少手术对后方肌肉韧带复合体损伤并对此复合体进行有效修复,可以减少颈后凸畸形和轴性症状发生,提高手术效果。     

管道骨骼线三维重建在肝脏可视化的应用

目的 研究三维重建数字化虚拟肝脏的方法.方法 将肝脏管道灌注后的肝脏标本进行螺旋CT扫描,获取CT扫描连续图像数据集.然后使用面绘制移动立方体(MC)算法重建肝脏及其内部管道结构表面模型,并对模型进行平滑和简化.确定出管道树上的关键节点,并使用改进的种子生长法生成管道树.将生成管道的表面模型和管道树相结合实现交互式分析.结果 肝脏管道灌注和铸型良好,螺旋CT扫描获取连续肝脏断面图像数据集242张.基于骨骼线提取的肝脏管道结构三维重建肝脏模型形态逼真,交互性强,通过设定各结构的透明度和颜色能单独或组合显示肝脏、肝静脉和下腔静脉、门静脉、胆囊,并可通过旋转、放大、缩小模型观察各结构.结论 基于肝脏管道骨骼线的方法进行肝脏及其管道系统三维重建可视化肝脏,生成肝脏和内部管道系统,立体空间感强,交互性好.