重组卡介苗及猪苓多糖对荷瘤小鼠巨噬细胞NO释放量的影响

目的 观察重组卡介苗（rBCG)和中药猪苓多糖（PPS），对荷瘤小鼠空巨噬细胞释放NO的影响。方法 将黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠左大腿外侧皮下，建立荷瘤小鼠模型，分别用rBCG－IL-2,rBCG-IL-2 PPSPPS进行局部治疗。于给药后第1，2，3和5wk处死小鼠，用NO酶法测定小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平，并观察不同实验组瘤体的变化。结果 rBCG－IL－2组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平最高。与对照组相比较，PPS组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平在第1wk与第2wk增高，第3wk起与对照组释放的NO水平没有差异。rBCG－IL－2组小鼠随给药时间的延长，皮下瘤体逐渐缩小。PPS组小鼠瘤体在给药后第1wk和第2wk生长缓慢，第3wk起瘤体生长速度明显增加。结论 rBCG－IL－2与PPS能提高小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平，rBCG－IL－2能明显抑制肿瘤生长。     

Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺发育中的表达

目的:研究Nestin、CK19、胰岛素、胰高血糖素及生长抑素在胚胎胰腺发育中的表达,探讨胰岛细胞分化发育的机制。方法:采用免疫组化SABC法及免疫组化双染法(LAB SA),对30例6～14wk人胚胎胰腺中,Nestin、CK19、胰岛素,胰高血糖素及生长抑素阳性的细胞进行定位。结果:(1)胚胎胰腺发育中Nestin阳性细胞存在于胰腺的间质,数量极少;CK19在胰腺导管上皮分化中持续表达,呈强阳性;(2)7wk胰腺导管上皮开始分化出胰岛细胞,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素表达阳性,三者的表达并无时段差异性;随着胎龄的增加,阳性细胞数增加,14wk时胰岛逐渐形成,表达达到高峰。结论:胚胎胰腺的发育中,胰腺间质存在胰腺干细胞;胚胎早期胰腺导管上皮细胞开始分化并分泌胰岛素,其自分泌的激素可能参与调节胰岛细胞的迁移和胰岛的形成。     

变性高效液相色谱检测 PKD2基因突变

目的　利用变性高效液相色谱分析技术 ( denaturing high- performance liquidchromatography,DHPL C) ,检测 2型常染色体显性遗传性多囊肾病致病基因 ( polycystic kidney diseasegene 2 ,PKD2 )突变。方法　收集临床确诊的汉族常染色体显性遗传性多囊肾病 ( autosomal dominantpolycystic kidney disease,ADPKD) 94个家系 ,提取外周血白细胞 DNA,用聚合酶链反应 ( polymerasechain reaction,PCR)扩增目的基因的全编码区 ,DHPL C对 PCR产物进行突变筛选 ,出现异常峰型的DNA片段进行核苷酸序列测定 ,明确突变位点和类型。结果　以 5 0名健康志愿者为正常对照 ,从 94例患者家系中成功检测出 8种突变 ,包括 2种无义突变、3种移码突变、3种错义突变。无义突变分别位于第 5和13外显子 ( 12 4 9C→ T,2 4 0 7C→ T) ,编码氨基酸分别在 4 17和 80 3位形成终止密码子。移码突变分别位于第2、12和 13外显子 ( 6 36 - 6 37ins T,2 348- 2 35 1del AGAA,2 4 0 1del A)。错义突变分别位于第 1、4和 5外显子 ( 5 6 8G→ A,96 4 C→T,116 8G→A) ,其编码氨基酸发生改变 ( 190 Ala→ Thr,32 2 Arg→Trp,390 Gly→ Ser)。结论　所检测出的 8种突变 ,为 ADPKD患者的基因诊断、产前诊断和囊肿前诊断积累了资料     

抗生素不同用药方案预防乳癌手术部位感染的成本效果分析

目的探讨抗生素不同用药方案对乳癌术后手术部位感染的预防效果和成本的影响。方法506例乳腺癌改良根治手术患者随机分为观察组(n=253)和对照组(n=253)。观察组术前半小时静脉滴注头孢曲松2.0g;对照组术后3d每天静脉滴注头孢曲松2.0g。观察和记录术后患者手术部位感染情况并计算感染有关的医疗成本。结果术后感染发生率观察组和对照组分别为1.19%(3/252)和1.58%(4/253),其中手术部位感染共6例(1.19%),观察组和对照组各3例(1.19%),差异无统计学意义(P>0.05);对照组呼吸道感染1例。预防和治疗术后感染的直接医疗费用观察组为(163±78)元,对照组为(388±134)元,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成本-效果分析表明,术前单次头孢曲松在预防手术部位感染方面与对照组等效,且医疗费用显著降低,具有更高的性价比。     

同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性及其机制的初步探讨

为了观察同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性,并初步探讨其分子机制。以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤CNE2、KG1a和U251细胞的活性。应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测4种细胞MHCI类链相关分子(MICA/B)和人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1~3)基因和分子的表达情况。效靶比20∶1时用AMO-1、BMO-1、M295、M310和M551单抗分别阻断肿瘤细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化。结果:NK细胞对K562、CNE2和KG1a细胞均有杀伤活性,对U251细胞无杀伤活性。在mRNA水平4种细胞均表达MICA/B和ULBP1~3基因。K562细胞表达MICA/B和ULBP1~3全部分子;KG1a和U251细胞均不表达5种分子;CNE2细胞表达MICA/B和ULBP2,不表达ULBP1和ULBP3。CNE2、KG1a和U251细胞均高表达HLAI分子,而K562细胞不表达。用单抗分别阻断靶细胞表面相应的NKG2D配体分子,NK细胞对KG1a和U251细胞的杀伤活性无变化。NK细胞对K562和CNE2细胞的杀伤活性可部分被封闭。同种异体NK细胞在体外对不同肿瘤细胞的杀伤活性不同,其杀伤机制也不完全相同。     

Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨

目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.     

His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性

目的：观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法：PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达,采用Ni^＋螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用凝血酶消化,再经Ni＋螯合亲和层析法纯化得G1F/M2,将His-G1F/M2和G1F/M2免疫BALB/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT法测定细胞毒性T细胞活性（CTL）。结果：两种蛋白在BALB/c小鼠中诱导的RSV特异性抗体和CTL活性无显著差异。结论：His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。     

蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位

目的： 观察丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（CP）对蛋白激酶R(PKR)表达的影响；定位PKR与CP直接结合的区域。方法: 对Huh-7、转染表达CP的Huh-7及含有全长HCV复制子(replicon) Huh-7细胞株的PKR表达水平及干扰素（IFN）诱导前后replicon Huh-7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较；对CP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽S转移酶（GST）结合试验。结果: Replicon Huh-7中PKR表达水平高于Huh-7及转染表达CP的Huh-7；IFN诱导后PKR表达增加，且明显抑制HCV结构和非结构蛋白的表达；PKR能与CP直接结合，依赖于PKR的N端1-180氨基酸（aa）。结论: CP能直接作用于PKR N端1-180 aa，导致PKR组成性激活，从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是HCV病毒蛋白与细胞蛋白相互作用又一新的模式，在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。     

涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达谱及基质金属蛋白酶表达差异

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因，并对其中的候选基因进行初步的验证。方法用限制片段差异显示PCR技术（restriction fragments differential display PCR, RFDD-PCR）建立涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞株（ACC-M、ACC-2）的表达谱。对两个表达谱的片段进行比较，通过生物信息学的分析，初步筛选出候选基因。用半定量逆转录PCR技术对筛选出的基因进行初步验证。结果RFDD-PCR方法共获得5420个基因片段，其中包含12个基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）基因。半定量逆转录PCR方法发现MMP2、MMP7、MMP9、MMP14、MMP15、MMP24在ACC-M和ACC-2中的表达存在明显差异。结论构建了ACC-M和ACC-2细胞株的表达谱，为寻找目的基因奠定了基础。发现MMP2、MMP7、MMP9和MMP15与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关，不同肿瘤细胞的转移能力可能与不同的MMPs家族基因相关。     

糖尿病大鼠视网膜基因表达谱差异的初步分析

目的 建立大鼠正常视网膜和糖尿病8周视网膜基因表达谱，比较两者差异，初步分析糖尿病视网膜病变的相关基因。方法 通过限制片段差异显示 PCR（ restriction fragments differential display-PCR，RFDD-PCR）获得正常大鼠视网膜及8周糖尿病大鼠视网膜组织转录组片段。应用Fraent Analysis等软件，对差异片段进行生物信息学分析，初步确定糖尿病视网膜病变相关基因／表达序列标签（ expression sequence tag, Ksr）。结果 获得有意义的片段共3639个，有差异的片段840个，占表达数的23．08％。其中包括5个视觉传导相关基因，13个兴奋性神经递质受体基因和3个抑制性神经递质受体基因。糖尿病8周大鼠视网膜Rhodopsin kinase,β-arrestin,Phosducin, rod photoreceptor cGMP-gated channel 和 Rpe65的表达下调，离子型谷氨酸受体iGluR1-4下调，代谢性谷氨酸受体及γ-氨基丁酸受体各亚型则普遍上调，而甘氨酸受体表达无变化。结论 糖尿病8周大鼠神经视网膜已受到累及，其基因表达模式的改变，可能与糖尿病早期视功能损害有关。