A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定

目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体.方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B.对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因.分别插入原核表达载体pQE-30,再转化E.coli M15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定.结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在E.coli中以包涵体形式获得高效表达.Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性.Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应.     

兔腹主动脉球囊成形术后狭窄过程中内皮素的动态变化及卡托普利的治疗作用

目的　观察内膜损伤后血管狭窄的主要病理变化和此过程中血浆内血管内皮素(endothelin ,ET)水平的动态变化及局部动脉组织内ET反应性 (ET immunoreaction ,ET IR) ,探讨卡托普利 (Captopril)对动脉球囊损伤后狭窄的影响。方法　大耳白兔 4 8只 ,依术后处死时间不同 (6h和 1、3、7、15、2 2d)按随机表法随机分为 6组 ,每组 8只 ,其中 3只为内膜损伤 (手术组 )、3只为损伤 卡托普利治疗 (治疗组 ) ,2只为对照组。术前及术后均采静脉血 ,手术组及治疗组置入微球囊导管于腹主动脉内制备内膜损伤模型。治疗组术前 1d给予卡托普利 2mg·kg-1·d-1直至处死当日。放射免疫法检测术前、术后血浆内ET水平 ,处死后取模型动脉血管 ,观察血管内膜厚度及管腔病理变化 ,免疫组织化学法检测动脉组织内ET反应。结果　手术组各时间段血浆ET水平 [平均值 (139 17± 16 86 )ng/L) ]和治疗组各时间段血浆ET水平 [平均值 (12 2 16± 13 5 6 )ng/L]均较术前 [平均值 (111 2 4±11 39)ng/L]升高 (P <0 0 1和P <0 0 5 ) ,手术组术后各时间段血浆ET水平比治疗组及对照组有明显升高 (P值均 <0 0 1) ,而治疗组与对照组术后血浆ET水平无显著性差异 ;手术组动脉内膜有不同程度增厚 ,主要以血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclec     

MRI测量颈胸角在选择颈胸段脊柱手术入路中的临床应用

目的 :探讨在颈胸段脊柱术前应结合患者的颈胸段MRI的个体特征和疾病情况 ,选择手术创伤最小的手术入路。方法 :共 76例患者 ,其中 2 6例为颈胸段脊柱损伤 ,35例为颈胸段脊柱肿瘤 ,脊髓型颈椎病 12例 ,以及 3例颈胸段椎板减压术后后凸畸形。男 4 7例 ,女 2 9例。平均年龄 4 5 5岁 ,年龄范围 19～ 6 5岁。同时抽取 95套颈胸段MRI片。作胸骨上切迹向后水平延长线和胸骨上切迹向后上方至C7T1椎间盘前缘中点的连线 ,测量两线之夹角 ,称为颈胸角 (cervicothoracicangle ,CTA)。结果 :CTA平均为 4 7 6 4°(范围 2 5°～ 73°)。大于此平均角度且病灶在胸骨切迹水平线以上时可考虑低位下颈椎入路 ,5 0例 ;CTA较小 ,且病灶范围广 ,或尚累及T3 、T4,可以考虑经胸骨柄入路 ,13例 ;病灶范围广泛 ,经全胸骨入路 3例 ;Ⅰ期或Ⅱ期前后联合入路 5例 ;经右侧肩胛下后外侧胸腔入路 5例。结论 :颈胸段脊柱手术应尽量选择低位下颈椎入路等创伤较小的入路 ,其次考虑经胸骨柄入路。长节段脊柱受累的患者才考虑经右侧肩胛下后外侧胸腔或经全胸骨等创伤较大的入路。术前可以结合患者的病灶累及范围和颈胸手术角等MRI影像学表现 ,从而利于选择最合适的手术入路 ,减少手术风险、手术创伤和并发症 ,利于患者早日康复     

新生儿呼吸机相关性肺炎临床与病原学分析

目的分析新生儿重症监护病房（NICU）呼吸机相关性肺炎（VAP）的临床病原学特点。方法以2004年1月。2006年12月我院NICU机械通气患儿为对象，分析vAP患儿的临床资料、病原学构成及药敏实验结果。结果82例机械通气患儿中，49例发生VAP，发生率为59％，病原体以革兰阴性茵为主，细菌耐药高。结论明确VAP的发病因素和致病菌，有利于合理运用抗生素和防治VAP。     

体外膜肺联合血液滤过治疗肺肾衰竭的实验研究

目的 观察体外膜氧合器（ECMO）联合高容量血液滤过（HVHF）对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、急性肾功能衰竭（ARF）的治疗作用。 方法 采用实验犬32只，随机分为A、B、C、D 4组。静脉注射油酸复制ARDS模型及双侧输尿管结扎复制急性肾功能衰竭模型。A组用ARDS呼吸机治疗；B组ARDS用ECMO治疗；C组ARDS＋ARF用HVHF治疗；D组ARDS＋ARF用ECMO联合HVHF治疗。监测血气、血流动力学以及血生化等指标。 结果 治疗后B组氧分压（PaO2）逐步上升，在治疗4 h后高于A组[（95.58±8.14） 比（82.79±12.37） mm Hg，P < 0.05]； C组PaO2治疗中较成模时无明显改善；D组PaO2呈逐渐上升趋势，在各时间点均高于C组（P < 0.05）。各组血流动力学指标在治疗中保持稳定。C、D组HVHF治疗后Scr、BUN明显降低[C组：Scr (320.89±65.42) 比(655.04±181.22) μmol/L，BUN (20.42±6.65) 比（41.53±10.59）mmol/L；D组：Scr (334.15±45.97)比（697.48±101.66） μmol/L，BUN (19.12±6.39) 比（39.10±11.60） mmol/L，P均< 0.01]。 结论 ECMO可以有效地改善ARDS低氧血症，联合HVHF可以提供肺肾功能联合支持。     

超声介导上调Smad7表达对腹膜炎大鼠腹膜炎症和功能的影响

目的 通过基因转染的方法上调Smad7在大鼠腹膜组织的表达，旨在探讨Smad7的高表达对大鼠腹膜炎模型的炎症反应和腹膜功能的影响。方法 Ⅱ级雄性SD大鼠18只随机分入正常组、对照组和模型组，后两组分别给予空载体和Smad7质粒转染，72 h后腹腔内注射大肠杆菌(E.Coli, ATCC 25922) 10⁹ CFU/kg体重诱导腹膜炎，在48 h后做腹膜功能试验并杀检大鼠。检测腹水及血白细胞计数、腹水细菌菌落计数。间接免疫荧光检测Smad7和CD45在腹膜组织的表达。Western印迹检测腹膜组织Smad7蛋白的表达。应用SPSS 11.0统计软件对腹膜功能与腹水白细胞数和细菌菌落数进行Pearson多元线性相关分析。 结果 与空载体组比较，Smad7转基因组大鼠腹膜组织Smad7的表达、腹水白细胞计数和腹膜组织浸润的白细胞数均显著增加，但腹水细菌菌落计数显著降低、腹膜功能显著恶化。相关分析显示腹膜功能的恶化与腹水白细胞计数相关而与腹水细菌菌落计数无相关。结论 Smad7在大鼠腹膜组织的高表达增强了腹膜局部的炎症反应，而过强的炎症反应导致腹膜功能进一步受损。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的探讨

目的 探讨罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏的保护作用机制。方法 将大鼠分为正常组、糖尿病组、小剂量罗格列酮组、大剂量罗格列酮组。药物干预4周后，检测各组大鼠的血糖（BS）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、肌酐（Scr）水平及尿白蛋白定量（24h）。随后处死大鼠，测定肾组织中丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）及铜锌超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、核转录因子-κB（NF-κB）的活性。同时留取。肾脏组织作PAS染色行病理检查。RT-PCR和免疫组化法检测。肾组织中单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1）mRNA及蛋白质的表达。结果 与糖尿病组相比，大剂量罗格列酮干预组BS、TC、TG差异无统计学意义；而。肾组织MDA含量、MCP-1mRNA及蛋白质表达、NF-κB活性差异有统计学意义（P〈0．05），SOD、GSH-Px、T-AOC活性显著上升；肾小球面积及体积减小。结论大剂量的罗格列酮可显著改善糖尿病大鼠的。肾脏损害，其机制可能与其抗氧化，抑制NF-κB活性，降低MCP-1的含量有关。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.     

肿瘤干细胞与肝癌干细胞

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病,基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键。肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中是否存在“肝癌干细胞”的问题一直倍受人们关注。该文介绍肿瘤干细胞与肝癌干细胞的研究情况。     

伴有和不伴有抑郁的阿尔茨海默病患者在静音Stroop任务下脑功能激活的差异

目的 研究Alzheimer病(AD)与AD伴抑郁患者(depression in Alzheimer's disease,dAD)在注意任务下脑功能激活区的差异.方法 收集临床诊断轻度AD患者20例,符合《精神疾病诊断与统计手册第Ⅳ版》标准(DSM-Ⅳ),其临床痴呆评定量表(CDR)评分1.0,其中9例dAD患者符合国立精神疾病研究院制定的痴呆伴抑郁的诊断标准(NIMH-dAD标准),其康奈尔痴呆中抑郁量表评分(CSDD)＞12.另有10名健康老龄者为对照组.在静音Stroop任务下,计算完成任务的反应时间、错误率和漏报率等行为学指标,同时采集fMRI脑部功能图像,使用SPM2软件分析.结果 dAD、AD与对照组的反应时间(ms)分别为2214.4±107.1、2020.6±558.3、840.0±254.5,dAD与AD组均明显慢于对照组(P＜0.01),且dAD组比AD组更慢(P=0.04).dAD、AD、对照组的错误率分别为:8.3%、6.9%、0.7%;其漏报率分别为:3.6%、2.9%、0,虽然dAD与AD组在错误率(P=0.13)和漏报率(P=0.10)间并无差异,但均明显高于对照组(P＜0.01).对照组在双侧前额背外侧皮质、双侧前扣带回、右侧顶叶和左额下回有明显的激活.AD组仅在左侧顶叶、左前扣带回和右额叶背外侧皮质等有少量激活.dAD组仅在前额皮质和部分右侧前额背外侧皮质处有少量激活.结论 与对照组相比,AD伴有和不伴抑郁的患者均存在异常的脑功能成像,但二者间有着明显的差别,抑郁加重AD的注意功能损害.