天然药物诱导细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是 1972年由英国科学家导剂。目前已有大量研究结果表明天然药物可通过直接杀伤细胞即损伤细胞ＤＮＡ影响细胞周期 ,诱生电泳出现凋亡特征性的梯形条状带。Ｓ -Ｐ免疫组化显色结果示ｂｃｌ - 2呈低表达 ,ｂａｘ及ｐ16呈高表达。核细胞浸润的现象使人们进一步肯定其诱导凋亡的经小柴胡汤作用后的荷鼠瘤组织内有淋巴细胞和单 2 2　大蒜 (ｇａｒｌｉｃ ,Ｇａｒ)　Ｇａｒ是百合科葱属植物的鳞茎。目前认为Ｇａｒ所特有的 30多种有机含硫化合物性的抑制细胞的增殖 ,诱导细胞凋亡。从三尖杉中柏、黄连中提取的小檗…     

尾加压素Ⅱ生物学效应机制的研究

尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ，UⅡ)最初是从硬骨鱼的脊髓尾垂体中分离出来的一种生长抑素样环形肽。1998年Coulouarn等首次从人体中克隆出人UⅡ(human Urotensin Ⅱ，hUⅡ)。研究发现，UⅡ具有分布广泛、生物活性多样的特点，近年来UⅡ已引起了学术界的普遍关注。     

四种归肝经明目中药防护晶状体氧化损伤和上皮细胞凋亡的研究

目的 :探讨四种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对晶状体氧化损伤及晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡的防护作用。方法 :将 2 1只 (42眼 )新西兰白兔晶状体分成 7组 :空白对照组、Fenton组、吡诺克辛钠 (PS)组和车前子、青葙子、菊花及熟地四种归肝明目中药组。采用Fenton反应复制兔晶状体氧化损伤模型 ,在显微镜下观察各组晶状体的混浊程度 ,并分别测定晶状体酶性和非酶性抗氧化剂水平。同样 ,将 2 1只 (42眼 )SD大鼠双眼随机分成上述 7组 ,采用H2 O2 复制LEC凋亡模型 ,同时分别采用上述不同药物干预。应用TUNEL法检测LEC凋亡及凋亡率、透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果 :四种归肝明目中药组的晶状体混浊程度均明显轻于Fenton组 ;四种归肝明目中药组晶状体中酶性抗氧化剂的活性和非酶性抗氧化剂的含量均明显高于Fenton组。四种归肝明目中药组LEC凋亡率均显著低于H2 O2 组 (P <0 .0 1) ,且与PS组均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。超微结构研究显示 ,H2 O2 组绝大多数LEC发生凋亡 ,并呈凋亡各期改变 ;四种归肝明目中药组均仅有少数LEC发生凋亡 ,并多为早期或中期的轻微改变。结论 :四种归肝经明目中药均可通过提高晶状体的抗氧化能力对抗晶状体的氧化损伤 ,抑     

实验性电离辐射白内障及其微量元素研究

为探索微量元素在电离辐射白内障中的改变本研究采用大剂量60°C_or射线照射新西兰幼兔双眼,动态研究微量元素在兔眼电离辐射白内障的病因和发病学中的意义。材料与方法一、材料: 1、实验动物:选用5～6周两性健康新西兰白兔43只(由第四军医大学实验     

枸杞多糖对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的调控

目的:研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccha-rides,LBP)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens ep- ithelial cell,LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的调控。方法:复制大鼠晶状体氧化损伤模型,同时加入终浓度为1g/L的枸杞多糖共同孵育24h后,取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:Bcl-2和Bax在正常SD大鼠LEC中均有表达,Bcl-2的表达远较Bax表达强。H_2O_2组Bcl-2表达显著下调,Bax表达显著上调(Ridit检验,R_1值分别为0.97和0,P<0.01,差异均有非常显著性),Bcl-2/Bax比率下降。枸杞多糖可明显上调Bcl-2表达,下调Bax的表达(与H_2O_2组比较,P值均<0.01,差异有非常显著性),Bcl-2/Bax比率上升;其改变幅度与白内停组相比差异均有显著性(P值均<0.05)。结论:氧化损伤诱导LEC凋亡和枸杞多糖抑制LEC凋亡的分子机制可能与调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。     

莪术、三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖及信号转导分子的影响

目的：探讨莪术(RC)、三氧化二砷(As₂O₃)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖及细胞信号转导的影响,为防治后发性白内障提供实验依据。方法：采用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导牛LEC增殖；四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测RC,As₂O₃对LEC增殖的抑制率；流式细胞术(FCM)检测RC,As₂O₃对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用；荧光分光光度法检测LEC内［Ca²⁺］i、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP。结果：RC,As₂O₃对rhbFGF诱导的LEC增殖的抑制率增加(P＜0.01)；明显下调rhbFGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达(P＜0.01)；使增殖的LEC内［Ca²⁺］i和cAMP显著增高(P＜0.01),cGMP显著降低(P＜0.01)。上述指标均呈剂量-效应关系。结论：RC,As₂O₃能显著抑制LEC增殖；Ca²⁺,cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要分子机制；RC,As₂O₃对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

重组人表皮生长因子对牛品状体上皮细胞增殖的影响

目的 观察重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)增殖的影响.方法 体外培养牛LEC,在培养液中分别加入0 μg·L-1、1 μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、1000 μg·L-rhEGF,加药后72 h采用MTT法,在酶标仪490 nm波长处测定吸光度值并观测细胞增殖变化.结果 0μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、50μg·L-1、100 μg·L-1、1000μg·L-1的rhEGF作用于LEC 72 h后MTT法测得的OD值分另4为0.166±0.029、0.195±0.017、0.232±0.034、0.263±0.019、0.315±0.009、0.261±0.005、0.206±0.043.结论 rhEGF对牛LEC增殖有明显的促进作用,且呈浓度相关.     

菊花防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制的实验研究

目的通过菊花影响过氧化氢（H2O2）氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）信号转导的实验研究，探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞和分子机制。方法将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤模型，同时加入菊花水提取液孵育后，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性、荧光分光光度法检测LEC内的钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨不同浓度菊花及孵育12h、24h和36h的影响。结果①H2O2组LEC活性下降，菊花使氧化损伤的LEC活性显著增高（P〈0．01），呈浓度依赖关系和时间依赖关系。（②H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高，菊花使氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i显著降低（P〈0.01），并呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降，菊花可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0．01）、cGMP水平显著升高（P〈0．01），也呈时间-效应关系。结论通过[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号转导系统及其相互作用调节生物学效应，可能是菊花防护LEC氧化损伤及减少细胞凋亡的细胞和分子生物学机制。     

莪术抑制晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的 探讨天然药物莪术（rhizoma curcumae，RC）对体外培养的晶状体上皮细胞（1ensepithelial cell，LEC）增殖的抑制作用，并从信号转导方面研究其抑制LEC增殖的作用机制，为寻求防治后发性白内障（after cataract）的确切有效药物提供实验依据。方法 用牛LEC进行原代和传代培养，取第三代细胞。用10ng／ml重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor，rhbFGF）诱导LEC增殖。同时分别将5mg／ml、10mg／ml、20mg／ml的莪术作用于增殖状态下的LEC72小时。（1）通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色测定法检测莪术对LEC增殖的抑制程度；（2）用钙荧光指示剂Fura-2／AM测定莪术抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化;（3）用放射免疫分析法测定莪术抑制LEC增殖时细胞内环化腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和环化鸟苷酸（cyclicguanosine monophosphate，cGMP）浓度变化。结果 莪术可明显抑制LEC增殖。抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）升高，细胞内cAMP浓度显著升高，细胞内cGMP浓度显著降低，cAMP／cGMP比值升高，并具有剂量依赖关系。结论 诱导[Ca^2＋]i升高，激活细胞内Ca^2＋信号转导途径；上调细胞内cAMP水平，下调细胞内cGMP水平，使cAMP／cGMP比值升高，激活细胞内cAMP-PKA、cGMP-PKG信号转导途径可能是莪术抑制LEC增殖的作用机制之一。莪术能够明显抑制LEC增殖的作用，有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

五味子乙素防护晶状体氧化损伤的体外实验研究

 目的探讨五味子乙素(Sch B)对实验性晶状体氧化损伤的防护作用。方法采用Fenton反应复制兔晶状体氧化损伤模型,以吡诺克辛钠滴眼液(PS)为对照,测定晶状体SP,SOD,GSH-Px,GSH,VitC及MDA的含量,观察终浓度0.5 mmol·L^-1Sch B对晶状体氧化损伤的防护作用。结果Sch B组与Fenton对照组比较,Sch B可显著减少Fenton反应中SP的丢失,显著提高SOD和GSH-Px的活性及GSH和Vit C的水平,并降低MDA含量。Sch B组与PS组比较,Sch B组的SOD活性、GSH含量和Vit C水平分别是PS组的1.66倍,2.58倍和2.36倍,MDA含量比PS组下降24%。上述各项指标均有显著性差异(P＜0.01)。结论 Sch B对Fenton反应中晶状体的氧化损伤有明显的防护作用,且优于吡诺克辛钠滴眼液。