大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达***◆

背景：调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。 目的：以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达。 方法：以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。 结果与结论：成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达。     

ARMS法检测同一位点连续突变的病理解决方案

扩增受阻突变体系( amplification refractory mutation sys-tem, ARMS)法是分子病理检测领域发展最快的方法之一,其是建立在RT-PCR基础上的检测方法,灵敏度高。 ARMS法作为RT-PCR检测方法的发展和延伸,也具有RT-PCR法的缺点,即污染对检测结果的影响。在我科日常的分子病理检测中,曾出现一起连续检测到多例同一位点发生突变的事件,在本科科主任的带领下,与临床医师、受检患者、医院主管领导、试剂生产与供货方沟通后,妥善解决一起可疑污染事件,形成一套较为完备的分子病理预警处理方案,现报道如下。     

5-氯基酮戊酸光动力联合高频电离子在生殖器疣治疗中的应用

生殖器尖锐湿疣（CA）因具有顽同难治及易复发和传染等特点,临床处理棘手。高频电离子是临床治疗CA的常用物理疗法,而光动力疗法（PDT）则是近年来用于治疗CA的一种新型非侵袭疗法。近1年来,我们采用5-氨基酮戊酸光动力疗法（5-ALA—PDT）联合高频电离子治疗CA,并与单纯5-ALA—PDT和高频电离子治疗做了临床疗效比较,现将结果报道如下：     

红霉素预适应诱发胶质瘤耐药作用机制探讨

目的 探讨红霉素预适应对胶质瘤细胞系U251对亚硝基脲类药物BCNU耐药的影响及其可能的机制. 方法 400 mmol/L红霉素预处理U251细胞3 h后以BCNU刺激细胞(预适应刺激组),同时设刺激组和空白对照组.应用MTT法和流式细胞技术分别检测细胞的增殖和凋亡率,RT-PCR方法检测U251细胞神经型一氧化氮合酶(nNOS)和Bcl-2 mRNA的表达情况. 结果与刺激组相比,红霉素预适应刺激组细胞的增殖能力增加,凋亡率减少,差异有统计学意义(P<0.05),RT-PCR结果显示nNOS、Bcl-2 mRNA的表达增加. 结论红霉素预处理U251细胞可以增加其对BCNU的耐药作用,nNOS和Bcl-2可能参与了这一过程的调节.     

大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达.     

胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的：观察胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响,并探讨其作用机制。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、胸腺素β4组各24只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后,采用干湿重法测定缺血脑组织含水量,通过检测伊文蓝渗透到缺血侧脑组织的含量观察血脑屏障的通透性,应用RT-PCR法检测缺血脑组织紧密连接蛋白5（ Claudin-5）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达。结果脑缺血再灌注损伤24 h后,与假手术组比较,对照组缺血侧脑含水量、伊文蓝含量、MMP-9 mRNA表达明显增加,Claudin-5 mRNA表达显著减少（ P均＜0．01）;与对照组比较,胸腺素β4组缺血侧脑组织含水量、缺血侧伊文蓝含量、MMP-9 mRNA明显降低,Claudin-5 mRNA表达明显升高（P均＜0．01）。结论胸腺素β4对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过促进Claudin-5 mRNA表达和抑制MMP-9 mRNA表达实现的。     

关节病性银屑病发病机制及生物制剂治疗的进展

关节病性银屑病作为一种免疫异常疾病,多种免疫相关细胞和免疫分子参与其发病过程,异常的T细胞活化、增殖、分化是发病的主要环节,肿瘤坏死因子α作为主要致病分子直接或间接导致了疾病的发生发展。因其发病机制十分复杂,目前尚无特异有效的治疗药物,而通过生物技术手段研发的新型生物制剂特异性地针对发病环节,在临床试验和实际应用中显示良好的疗效,且无明显不良反应,可成为治疗关节病性银屑病的新选择。     

抑制TRPV4通道减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,探讨应用瞬时受体电位通道香草酸亚型4(TRPV4通道)抑制剂是否能够减轻脑缺血再灌注损伤诱导的血脑屏障(blood brain barrier, BBB)开放和可能机制。方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型;给予TRPV4抑制剂HC067047进行处理,Evans blue检测脑缺血再灌注后BBB通透性变化,Western bolt检测脑缺血组织中caveolin-1的表达水平。结果大鼠局灶性脑缺血再灌注后,BBB通透性和脑缺血组织中caveolin-1的表达水平明显增加,给予TRPV4抑制剂HC067047后,其BBB通透性和caveolin-1的表达水平明显减少。结论 TRPV4通道抑制减轻脑缺血再灌注诱发的BBB开放,与减少caveolin-1的表达水平相关。     

X线引导下经皮胃造瘘术和传统外科胃造瘘术的对比研究

目的：比较X线引导下经皮胃造瘘术（PRG）与传统外科胃造瘘术（SG）的临床效果。方法：回顾性分析行胃造瘘患者65例的临床资料，分为PRG组35例和SG组30例，比较两组手术时间、住院时间、手术费用、术后并发症的情况。结果：PRG和SG组的手术时间分别为19.60±3.51分钟和50.79±6.97分钟，住院时间分别为5.30±2.87天和12.21±4.93天，手术费用分别为5 246.14±324.35元和8 655.87±586.67元，PRG组均少于SG组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。PRG组出现2例（5.7%）术后并发症，SG组出现5例（16.7%）并发症，PRG组术后并发症发生率低于SG组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：X线引导下经皮胃造瘘术安全可靠，在手术时间、住院时间、手术费用及术后并发症方面优于传统外科胃造瘘术。     

32例左氧氟沙星不良反应监测及合理用药分析

目的研究分析在临床治疗中左氧氟沙星不良反应检测以及合理用药。方法对我院在2016年5月至2017年4月收治的使用左氧氟沙星治疗所发生的不良反应的32例患者回顾性分析,并进行整理与评价。结果引发的不良反应包括,过敏性休克15.6%(5/32),中枢及神经系统12.5%(4/32),皮肤及其附件31.2%(10/32),心血管及血液系统9.4%(3/32),呼吸系统9.4%(3/32),肌肉、骨骼系统6.3%(2/32),泌尿系统3.1%(1/32),消化系统3.1%(1/32),其他9.4%(3/32)。所有患者经过对症治疗后治愈。结论临床治疗中若使用到左氧氟沙星,要结合患者实际情况给药,加强对不良反应的监测力度,最大程度减少不良反应的发生率,保证合理、科学、安全用药。