神经生长因子对格林-巴利综合征周围神经电生理指标的影响

格林—巴利综合征（GBS）脱髓鞘组98例,随机分为A组50例及B组48例;GBS混合型组88例,随机分为C组45例及D组43例;GBS单纯轴索病变组39例,随机分为E组21例及F组18例。A、C、E组常规应用静脉丙种球蛋白、胞二磷胆碱等,并加用神经生长因子。B、D、F组仅行常规治疗。疗程结束后做神经电图评价疗效。发现A组运动腓深神经传导速度高于B组,C组运动腓深神经传导速度与波幅恢复均高于D组,E组运动腓深神经波幅高于F组,P均〈0.05。提示神经生长因子能明显改善GBS患者周围神经电生理指标,对髓鞘再生和轴索恢复有显著疗效。     

猪胰岛与大鼠睾丸支持细胞共同移植对糖尿病大鼠胰岛生长的影响

目的　研究胰岛异种移植的方法。　方法　用SD大鼠睾丸支持细胞 (Sertoli细胞 )与新生猪胰岛样细胞团 (ICCs)共同培养后进行异种移植。　结果　对照组胰岛细胞存活率及存活时间分别为 (63 .6%± 4.2 %和 3 .4d± 1.2d) ,较共同培养组 (87.2 %± 2 .7%和 13 .5d± 4.6d)显著为低(P <0 .0 1) ;对照组大部分胰岛细胞超微结构破坏 ,而共同培养组胰岛细胞超微结构基本正常 ;对照组胰岛素 2 4h累积分泌量和对葡萄糖刺激的反应性下降 ,共同培养组胰岛素分泌量始终处于高水平状态 (P <0 .0 1)。　结论　猪胰岛细胞与Sertoli细胞共同培养移植可以促进胰岛生长 ,明显延长胰岛移植物的存活时间     

氯化锂通过调节自噬通路促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的:研究氯化锂(Li Cl)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)神经分化的影响,并探讨自噬通路在其中的作用。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,细胞分为Li Cl组和对照组,采用β-巯基乙醇诱导MSCs向神经细胞分化,免疫荧光法和Western blot法检测诱导后神经元标志蛋白神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)以及自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化。进一步采用自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin)及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预自噬,Western blot法观察NSE和MAP-2的表达变化。结果:诱导分化后,Li Cl组及对照组细胞均有NSE和MAP-2表达,Li Cl组细胞NSE和MAP-2蛋白阳性表达率及表达量均大于对照组(P0.05);此外,Li Cl组细胞LC3阳性荧光点以及LC3-Ⅱ表达量亦多于对照组(P0.05)。加用雷帕霉素可进一步促进Li Cl处理的细胞NSE和MAP-2蛋白的表达(P0.05),而3-MA则抑制Li Cl处理的细胞NSE和MAP-2蛋白的表达(P0.05)。结论:氯化锂可能通过调节自噬通路促进大鼠骨髓骨髓间充质干细胞向神经细胞分化。     

体外氧糖剥夺再复氧大鼠皮层神经元细胞活性及EphA4蛋白的表达

16.737,P均<0.01),且随着复氧时间延长,活性逐渐降低(F=573.510,P<0.01).再复氧4、12及24 h.模型组EphA4表达较对照组明显升高(t=1.524,6.821,7.950,11.593,P<0.01),并随复氧时间延长有逐渐增高趋势(F=40.205,P<0.01).结论:在缺血再灌注过程中,EphA4可能参与了抑制神经再生.     

脐血源性神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的治疗作用

目的 探讨人脐血源性神经干细胞(NSCs)移植治疗缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠的可行性.方法 7d龄大鼠随机分成NSCs移植(A)组、HIBD模型对照(B)组和正常对照(C)组,每组40只.从人脐血中分离出单个核细胞(UBC-MNCs),定向诱导分化出NSCs并行溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记,经尾静脉移植到HIBD新生大鼠体内.免疫组化法检测移植后1、7、14、21 d各组动物脑组织易损区室管膜前下区(SVZa)神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BrdU染色阳性细胞表达情况及移植细胞在脑内的存活、迁移和分化情况.结果 UBC-MNCs可体外培养并定向诱导分化为NSCs,A组SVZa区NSE、BrdU阳性细胞表达量较B组均增高(P<0.01);移植早期Nestin增高,移植后14 d达峰,以后逐渐下降(P(0.01);A组GFAP表达较B组降低,大鼠损伤区面积显著减小(P<0.01).结论 移植的NSCs可在HIBD新生大鼠SVZa存活、增殖及分化,促进组织结构恢复和细胞功能重建,NSCs移植是治疗HIBD的一种新途径.     

脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

目的：用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法：构建的重组载体鉴定后，以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48 h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果：限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX-1基因；克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致；质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳；细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX-1基因表达。结论：成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体；通过优化转染条件提高了pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

人骨髓基质细胞脑移植改善大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的观察人骨髓基质细胞(BMSCs)移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用,探讨BMSCs脑移植治疗HIBD的可行性.方法36只新生大鼠随机分为对照组、HIBD组和移植组(均n=12).HIBD组和移植组大鼠7日龄时结扎左侧颈总动脉后吸入8%氧气2h制成HIBD模型.对照组仅分离左颈总动脉,不予结扎和缺氧.分离培养人BMSCs,损伤后3 d将BMSCs立体定位脑移植到移植组大鼠左侧感觉运动皮层.3～4周龄时,观察大鼠行为学和组织学的改变,并用免疫荧光检测移植细胞的存活情况.结果缺氧缺血后3周,HIBD组海马DG区和皮层单位面积内神经元数目较正常组减少[海马DG区:(39.2±5.6)个vs(51.1±3.9)个,P＜0.001;皮层:(12.3±3.0)个vs(17.8±3.0)个,P＜0.001].BMSCs移植后海马DG区和皮层单位面积内神经元数目[海马:(44.9±3.1)个,皮层:(17.5±3.1)个]较HIBD组增加(P＜0.01).与对照组比较,HIBD组在T迷宫、感觉运动功能测试中表现出明显的不足.BMSCs脑移植组各项行为学测试成绩较HIBD组均有明显改善.免疫荧光显示移植后3周,BMSCs在脑内存活.结论BMSCs脑移植可以改善新生鼠HIBD.     

Superfect 高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

目的：构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体，并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率，为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。 方法：RT-PCR体外扩增PDX-1 基因，双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体，对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定；利用Percoll 细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs，流式细胞仪检测细胞周期后，Superfect 介导正确重组的载体转染骨髓 MSCs，检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化；G418筛选阳性细胞后，RT-PCR 和Western blotting 检测PDX-1 基因在骨髓 MSCs 中的表达。 结果：重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示 85.9%的MSCs处于G₀/G₁期，提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能；荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光，Superfect 介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关；RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓 MSCs表达，随转染时间延长，表达逐渐增强，与Western blotting结果一致。结论：成功构建了含有PDX-1 基因的真核表达载体；Superfect 能高效介导外源性基因在骨髓MSCs 中表达；转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。     

天智颗粒对大鼠慢性脑缺血神经元特异性烯醇化酶表达的影响

目的研究天智颗粒对慢性脑缺血模型神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响.方法随机分为对照组、假手术组、模型组和天智治疗组,用剪断双侧颈总动脉的方法建立慢性脑缺血模型,用天智颗粒(5g/kg)治疗1月后采用三等分Y型电迷宫和免疫组化方法,观察、比较各组大鼠学习记忆能力和NSE表达的差异.结果治疗1月后,治疗组与模型组相比,学习记忆能力显著增加(P＜0.05),假手术组和对照组大鼠皮质神经元无明显NSE表达,模型组表达明显,治疗组NSE表达较模型组减弱,具统计学意义,均P＜0.05.结论天智颗粒可提高慢性脑缺血大鼠学习记忆能力,并可以减弱慢性脑缺血诱发的NSE表达,这是天智颗粒治疗血管性痴呆和慢性脑缺血的一种可能机制.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作

目的 :建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)模型 ,并讨论模型制作中的有关问题。方法 :健康 7日龄SD新生大鼠随机分为空白对照组 (n =18) ,假手术组 (n =8)和HIBD模型组 (n =19) ,采用经典Rice法制作新生大鼠HIBD模型 ,于 14日龄处死 ,观察HIBD后大鼠体重增长情况 ,左、右脑重比值变化 ,行为能力表现 ,以及脑组织病理形态学改变。结果 :①HIBD模型组体重增长明显慢于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。②HIBD组制成模型后全部发生行为异常改变 ,6 3 .16 %翻身不能 ,89.47%自发或夹尾左旋 ,抽搐占 47.37%。空白对照组和假手术组未见行为异常表现。③HIBD模型组左 /右脑重比值明显低于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。④肉眼观察HIBD组左脑萎缩者占 84.2 1%,出现软化灶占 31.5 8%,液化灶 5 2 .6 3 %,形成空洞脑者占 15 .79%;HE染色可见左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生 ;空白对照组和假手术组左、右脑无明显异常。结论 :本方法制作新生大鼠HIBD模型成功 ,该模型价格相对低廉、成功率高、重复性好、易于制作 ,值得进一步推广。模型制作中环境温度应保持在 36～ 37℃。