一起皮肤炭疽疫情中炭疽杆菌分子特征分析

目的 :对引起2012年江苏省一起皮肤炭疽疫情的炭疽杆菌进行分子特征分析。方法 :采用聚合酶链式反应对患者焦痂标本和病牛组织标本进行炭疽杆菌多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和保护性抗原(protective antigen,PA)基因扩增并测序分析。结果:4例患者焦痂标本和病牛组织标本中的炭疽杆菌具有相同的多位点序列和保护性抗原基因序列,分别为ST1型和PAⅠ型,并与国际参考株str.Ames Ancestor具有相同的基因型。结论:此次皮肤炭疽疫情中通过牛感染人的炭疽杆菌为ST1型和PA基因Ⅰ型菌株。     

心内科临床教学PBL模式的探索与实践

对基于问题的学习（Problem-based learning, PBL）模式在心内科临床见习教学中的应用进行了初步探索。从教学的实施方法、教学中体现出来的优点、PBL教学模式对教师的要求以及目前条件下存在的问题进行了探讨,为PBL教学模式在心内科临床教学中的应用提供一点经验。     

全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性

目的建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的方法,研究MSC的生物学特性。方法贴壁培养法分离纯化大鼠MSC,体外培养和连续传代,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化;利用四唑盐比色（MTF）法测定MSC的生长曲线;流式细胞仪（FCM）鉴定MSC膜抗原。结果原代分离的MSC在接种后48h贴壁,细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形,12天时细胞呈长梭形并达到90％单层融合。经传代扩增,细胞进一步纯化。细胞传代后2天内处于潜伏期,3天后进人生长期,7天后进入平台期。FCM检测CIM5、CD90阳性率分别为19．60％、95．38％。结论贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSC,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSC的一般生物学特性,为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。     

抗生素敏感性微生物源追踪方法建立

目的 建立抗生素敏感性微生物源追踪方法,以分析淮河流域某水库粪便污染来源.方法 采集水库周边已知来源粪便标本,分离指示菌,接种至含抗生素的培养基,筛选能区分不同来源指示菌的抗生素浓度,用YMP7.0软件进行判别分析检验效果.同时采集水样进行粪便污染来源追踪.结果 筛选的不同抗生素及其浓度能将已知来源指示菌正确归类率分别为93.05%(2分类)、85.75%(3分类)和78.53%(9分类).100株指示菌中有58株来自家畜,25株来自家禽,11株来自狗,4株来自人,2株来自野生动物.水样标本中主要的粪便污染来源为猪、牛、鸡,分别占水样分离指示菌总数的36%,17%和15%.结论 所筛选的抗生素浓度均能较好地区分指示菌的不同来源,该方法的建立可以为查找水体粪便污染来源以及水体治理提供参考与帮助.     

实习医师实习周报中逻辑缺陷剖析

临床诊疗思维能力的培养是实习医师临床能力培养的核心与关键,实习周报评审是了解和提高实习医生临床诊疗思维能力的有效方法。将实习周报中存在的缺陷和不足提高到逻辑思维层面来剖析,可以使实习医师从理论高度提高对临床思维过程各个环节的认识,更自觉地训练和提高自己的临床实践能力。     

一种新型戊型肝炎病毒样颗粒的表达、纯化及其免疫原性

目的以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒(HEV)中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析。方法将HEV开放阅读框架2(ORF2)编码452~617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a( ),转化大肠杆菌,获取表达克隆。以Ni-NTA层析柱纯化表达的蛋白,并用SDS-PAGE、Westernblot和直接电镜负染等方法分析鉴定,最后免疫小鼠检测特异性抗体的产生水平。结果表达的重组蛋白天然可溶,相对分子质量(Mr)约为22000,并可形成直径为20nm左右的病毒样颗粒,能与戊型肝炎患者血清发生Westernblot阳性反应,免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性抗体。体外中和试验显示产生的抗体具有中和HEV的活性。结论原核表达的、含HEV中和抗原表位的、长度仅166个氨基酸的HEVORF2近3′端编码蛋白能够形成病毒样颗粒,而且该新型病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性。     

载体和基因片段的选择对戊型肝炎病毒基因免疫抗原表达的影响

目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平。结果成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达。结论载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否。     

阿霉素肾病大鼠肾环磷酸腺苷减少的机制

目的确定阿霉素肾病大鼠肾内髓组织环磷酸腺苷(cAMP)减少的原因,以及血管升压素的刺激反应.方法应用放射免疫分析法,测定大鼠肾髓质组织中腺苷酸环化酶(AC)、环磷酸腺苷-磷酸二酯酶(cAMPPDE)活性.结果在经过血管升压素处理后,正常对照组、血管升压素组、血管升压素拮抗组、阿霉素组、阿霉素+血管升压素组和阿霉素+血管升压素拮抗剂组的肾髓质AC活性(pmol·mg-1·min-1)分别为237±109、329±36、231±10、251±64、249±26、252±38(F=0.659,P=0.463),cAMP-PDE活性的转换率(%)分别为0.19±0.09、0.18±0.07、0.20±0.11、0.34±0.08、0.35±0.05、0.32±0.03(F=11.209,P=0.0290).结论阿霉素肾病大鼠肾髓质AC的活性不再因血管升压素的刺激而增加,但却由于cAMP-PDC活性的增加而使得cAMP降解加速,导致本模型鼠肾组织cAMP含量的下降及水潴留.     

肾环磷酸腺苷含量下降与实验性肾病大鼠水潴留有关

目的确定血管升压素(DDAVP)及其信使环磷酸腺苷(cAMP)在实验性肾病大鼠水潴留中的作用.方法将42只大鼠分为两大组共6个小组,每组7只.第一大组为对照组,包括正常对照组(组1)、DDAVP组(组2)、DDAVP拮抗剂组(组3).第二大组为肾病组,包括阿霉素(ADR)组(组4)、ADR+DDAVP组(组5)、ADR+DDAVP拮抗剂组(组6).测定肾髓质的cAMP含量、尿渗透压和血渗透压等的改变.结果在给予DDAVP或DDAVP拮抗剂以后,第1～6组大鼠的尿渗透压分别为(1771.5±879.4)、(2145.0±936.2)、(1763.6±497.5)、(1049.6±272.3)、(1144.8±242.8)和(992.7±195.7)mmol/L,ADR肾病大鼠尿渗透压显著下降,其一级处理因素ADR的F值(下同)为113.069,P=0.000443;血渗透压分别为(302.2±8.7)、(296.4±9.5)、(307.9±6.4)、(286.2±5.3)、(288.5±6.2)和(290.2±6.5)mmol/L(F=17.3022,P=0.0142);无溶质水清除率(CH20)分别为(-0.84±0.44)、(-1.37±0.74)、(-1.06±0.58)、(-1.03±0.38)、(-1.02±0.6)和(-0.85±0.49)ml/h(F=0.0241,P=0.8843).肾髓质的cAMP含量分别为(652.22±151.97)、(709.07±84.46)、(566.62±38.51)、(77.11±16.02)、(83.01±20.59)和(84.03±25.72)pg/mg蛋白质(F=177.033,P=0.000184).结论肾髓质环磷酸腺苷含量的减少与阿霉素肾病大鼠水潴留有关,由于血管升压素并不能增加本模型大鼠肾髓质组织cAMP的含量,故它在本模型水潴留的机制中并不发挥显著作用.     

澳大利亚药品上市准入管理体系研究

药品上市准入是药品质量管理体系的重要内容之一,是药品进入市场的首要环节,其规范与否直接关系到药品上市后的质量安全。为此,澳大利亚采取风险管理理念对其进行监管,将药品上市渠道分为注册和登记,又将登记划分为未经治疗用品管理局(TGA)评估疗效的登记及经评估登记。本文介绍了澳大利亚这3条途径的适用情形、申请级别及注册程序,为完善我国药品上市准入制度提供参考。