多毛孢菌菌粉含药血清对LLCPK细胞损伤的保护作用研究

肾小管上皮细胞是肾脏固有细胞之一,在结构上与肾间质紧密相连,既是肾脏损伤的受害者,也是直接参与者。肾小管间质疾病是肾脏病学研究的重点,肾间质损伤程度直接关系到肾脏疾病的预后,有关它对肾病进程的影响已引起了广泛重视。目的:研究多毛孢菌菌粉不同提取物含药血清对庆大霉素所致的肾小管上皮细胞的损伤、凋亡的影响。方法:培养猪肾小管上皮细胞株LLCPK,用庆大霉素刺激,同时加多毛孢菌的不同提取物含药血清干预。用MTT法测定存活细胞数;生化显色检测NAG酶活性;流式细胞法测定细胞凋亡。结果:实验结果显示,与正常组细胞相比,庆大霉素可显著降低细胞MTT实验的OD值、细胞上清液中NAG酶活性,并显著增强细胞表面Annexin V的表达;菌粉水提物或醇提物含药血清均能够显著增强细胞的OD值,降低细胞上清液中NAG水平,抑制庆大霉素诱导的细胞表面Annexin V的表达。结论:实验结果表明,多毛孢菌菌粉含药血清可以拮抗庆大霉素的肾小管细胞毒性,促进损伤细胞的修复,抑制细胞凋亡:除了传统水提物外,醇提物也对庆大霉素引起的肾小管上皮细胞损伤有显著的保护作用。     

抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾间质细胞表型转化的影响

目的:通过抗风湿中药青风藤的提取物青藤碱对单侧榆尿管结扎(UUO)小鼠模型肾间质细胞表型转化的影响,探讨其治肾作用及机理。方法:采用小鼠UUO模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素转化酶抑制剂蒙诺作为对照。Masson染色观察肾组织病理及间质纤维化;肾组织中蛋白质表达采用免疫组化和Western-blotting方法检测;基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:UUO模型组和青藤碱、蒙诺治疗组小鼠肾间质纤堆化程度以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高,而各剂量青藤碱和蒙诺均可显著降低上述指标,并呈剂量依赖性。中、高剂量的青藤碱对于波形蛋白的影响显著优于蒙诺。结论:青藤碱可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化,提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。     

HBV感染血清标记物与HBV—DNA定量结果分析

我国约有1．2亿慢性HBsAg携带者．每年约有30万人死于慢性乙型肝炎相关性疾病．且患者也是居高不下。临床对乙肝患者的检测手段也多种多样。其中最常用的是乙肝两对半和HBV—DNA定量检测。因乙肝两对半的检测方法有限。且其组合模式也多种多样。常导致临床诊断困难。而荧光定量PCR法检测HBV—DNA不仅准确度高．且定量的数据能反映体内乙肝病毒复制的程度。因此。我们对本院300例不同HBV感染模式的患者与HBV—DNA定量结果进行了对比分析。     

基于网络药理学-分子对接及实验研究探讨益气活血祛风方调节DKD氧化应激的作用机制

目的 通过网络药理学-分子对接的方法探究益气活血祛风方治疗糖尿病肾病(DKD)氧化应激的作用机制并进行实验验证。方法网络药理学-分子对接利用多个数据库和软件进行,实验采用8周龄雄性db/db小鼠分为模型组、益气活血祛风方低剂量组和高剂量组,并使用同龄雄性db/m小鼠作为对照组,研究周期为8周。PAS染色法用于观察小鼠肾组织的病理变化;PCR和WES检测小鼠肾组织中NRF2的mRNA和蛋白表达。结果 (1)网络药理学分析得到益气活血祛风方的37个有效成分和391个作用靶点,与DKD的1,816个疾病靶点相交得到145个交集靶点。分子对接分析发现甾醇、华良姜素、决明内酯、槲皮素等关键成分和TP53、NEFE2L2、VEGFA、ESR1、PIK3R1、HSP900AA1等靶点有较好的结合活性。(2)益气活血祛风方能上调NRF2信号通路的表达,改善肾脏病理学变化。结论 益气活血祛风方对DKD具有多成分、多靶点、多通路的特点,其调节氧化应激的机制可能与上调NRF2蛋白的表达有关。     

SLE患者外周血P-gp表达与激素疗效关系的研究进展

目的综述P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的多药耐药与系统性红斑狼疮(SLE)激素疗效关系的内在联系及其可能机制.激素与免疫抑制剂是目前治疗SLE的主要手段之一,然而治疗过程中产生的多药耐药(MDR)却是导致治疗失败的重要因素.目前的研究表明,淋巴细胞产生MDR的原因和机制非常复杂,其中多药耐药基因(MDR1)的过度表达最主要也最为经典.MDR1基因编码的P-gp是-ATP依赖性的药物泵,其可以通过水解ATP提供的能量,将进入细胞内的药物泵出细胞,使得细胞内药物浓度下降,最终造成其细胞毒作用减弱甚至丧失从而出现多药耐药.     

益气血祛风湿方对阿霉素肾病大鼠肾组织α-SMA、ROCK1表达的影响

目的:探讨益气血祛风湿方治疗肾脏病的有效作用和细胞生物学机制。方法:采用阿霉素肾病大鼠模型,用益气血祛风湿方水煎剂以及黄芪当归和青藤碱等进行干预治疗4周。实验结束时留取肾脏组织,采用免疫组化、Western-blotting技术观察肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达;采用RT-PCR技术测定肾组织中α-SMA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)等基因表达水平。结果:模型组大鼠肾组织中α-SMA的蛋白表达较正常大鼠显著增多,α-SMA和ROCK1基因表达也显著增高。各治疗组大鼠肾组织中α-SMA的表达均较模型组显著降低,益气血祛风湿方与青藤碱组显著优于芪归治疗组。各治疗组大鼠肾组织中α-SMA、Rock1基因表达水平较模型组显著降低,治疗组间无显著差异。结论:益气血祛风湿方显著降低肾间质纤维化相关分子的表达,在α-SMA方面作用较黄芪当归显著增强。     

白藜芦醇对TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用研究

目的 研究白藜芦醇（Resveratrol）对转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的肾小球足细胞转分化的影响。方法 体外分化条件下培养小鼠足细胞10天,分为正常组、模型组和白藜芦醇高、低剂量组。白藜芦醇高、低剂量组分别用5、2 μmol/L白藜芦醇干预30 min后,模型组和干预组各用5 ng/mL TGF-β1继续诱导72 h,正常组常规培养。分别采用免疫细胞化学、流式细胞术、Western blot技术等检测足细胞表型蛋白分子上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、胎盘钙黏蛋白（P-cadherin）、紧密连接蛋白 （zonula occludens-1,ZO-1）、肾小球足细胞相关蛋白1（NEPH1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）表达。用蛋白滤过试验检测单层足细胞的蛋白滤过功能。结果 与正常组比较,模型组E-cadherin ＋细胞百分率、P-cadherin、ZO-1、NEPH1蛋白表达及蛋白浓度均显著降低（P〈0.05）,α-SMA蛋白表达升高（P〈0.05）,透过单层足细胞的蛋白浓度显著增高（P〈0.05）。与模型组比较,白藜芦醇高、低剂量组E-cadherin＋细胞百分率均升高（P〈0.05）,透过单层足细胞的蛋白浓度均降低（P〈0.05）;白藜芦醇低剂量组P-cadherin及 NEPH1蛋白表达均升高（P〈0.05）;白藜芦醇高剂量组P-cadherin、ZO-1及NEPH1蛋白表达均升高,α-SMA蛋白表达降低（P〈0.05）。白藜芦醇浓度与E-cadherin＋、P-cadherin及NEPH1蛋白表达水平呈显著正相关（rE-cadherin＋=0.772,rP-cadherin=0.756,r NEPH1=0.809,P〈0.05）。结论 白藜芦醇显著抑制TGF-β1诱导的足细胞表型异常可能是其维持肾小球滤过屏障的完整性,降低蛋白尿的重要机制。     

肾小球足细胞骨架蛋白研究进展

足细胞即肾小囊脏层上皮细胞,附着在肾小球毛细血管襻的外侧,其足突之间的裂孔膜与肾小球基底膜(GBM)及肾小球毛细血管内皮细胞共同组成肾小球的滤过屏障,位于肾小球基底膜的最外层,是阻止蛋白丢失的最后屏障.近年来随着一系列新的表达于足细胞的蛋白分子的发现,显示足细胞是一种具有特殊动力学的上皮细胞,在多种肾小球疾病的发生和发展中起着重要作用.     

复方积雪草有效组分干预肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的实验研究

目的：探讨复方积雪草有效组分-积雪草苷／大黄素干预肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的小鼠肾小管上皮细胞（mTEC）Toll样受体4（TLR4）mRNA及蛋白的表达水平。方法：采用mTEC,模型组用TNF—α 5ng／mL诱导,治疗组在TNF-α诱导的同时,以不同浓度的积雪草苷合大黄素进行干预,于24h后分别提取细胞RNA及上清,应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术（FCM）分别检测mTEC TLR4 mRNA和膜蛋白的表达。结果：正常mTEC具有TLR4 mRNA和蛋白表达,经TNF-α诱导后TLR4表达明显上调,当积雪草苷合大黄素干预浓度达4ug／mL＋0．4ug／mL时,能够抑制TLR4 mRNA及蛋白的表达水平。结论：复方积雪草有效组分能够抑制TNF-α上调所致的肾小管上皮细胞TLR4过度表达,从而缓解肾脏局部失控性炎症反应。     

阿霉素肾病大鼠模型肾小管间质损伤的实验研究

目的 探讨阿霉素(ADM)诱导大鼠肾小管间质病变的作用及机制.方法 将16只SD大鼠随机分为肾病组和正常组,分别于尾静脉注射ADM针5mg/kg和等量的0.9%氯化钠溶液,并于不同时点检测24h尿蛋白排泄量(24hUP),注射第6周末时检测Scr、Alb、TG、TC、尿N-乙酰-β-葡萄糖氨基酶(NAG)和肌酐清除率(Ccr),同时观察两组肾脏病理改变和检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的阳性表达面密度.结果 肾病组大鼠注射ADM后第2、4、6周时24hUP水平均较正常组增高(均P<0.05)肾病组第6周末时尿NAG、血TG和TC均较正常组增高(均P<0.05),血Alb水平较正常组降低(P<0.05).而两组间Scr和Ccr水平的差异则无统计学意义(均P>0.05);肾病组大鼠肾间质纤维化面密度和肾间质炎性细胞面密度均较正常组增高(均P<0.05),且肾间质α-SMA、TGF-β1、MCP-1、ICAM-1的阳性表达面密度均较正常组增高(均P<0.05).结论 ADM肾病大鼠肾小管间质损害可表现为较严重的肾小管损伤、肾间质纤维化和肾间质炎症损伤.