活血化瘀法为主治疗糖尿病肾病56例疗效观察

目前,糖尿病肾病(DN)已逐渐成为慢性肾功能衰竭的主要病因.DN在出现显性蛋白尿后,由于西医治疗方面尚无有效治疗措施阻止其向终末期肾病进展,而成为糖尿病(DM)患者死亡的重要原因.1997年来,我们以中药活血化瘀为主配合西药治疗本病56例,取得满意疗效,现报告如下.     

三种抗人细胞色素P450酶合成肽抗体的制备及应用研究

目的 制备兔抗人细胞色素P450酶142、3A4及4A11的特异性抗体,对其在药物代谢方面的应用进行研究.方法 ①利用生物信息学方法 分析CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白的序列,利用DNAstar软件中蛋白质的亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构指标选择多肽序列,应用Blast软件对所选序列进行同源性分析并合成多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP1A2、3A4及4A11抗体.抗体纯化后经酶联免疫吸附(ELISA)、免疫印迹(Western blot)鉴定其特异性;②通过制备大鼠给药模型利用Western blot评价上述抗体在药物代谢酶分析方面的作用.结果 获得抗CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11合成肽的抗体.Western blot结果 显示,三种抗体均可与其合成肽及天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白出现特异性反应,识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)分别为63 000、59 000及53 000.同时,Western blot结果 显示,所制备的抗体能识别药物诱导后大鼠天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11.结论 合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体.制备的抗体特异性良好,可应用于药物代谢酶方面的研究.     

白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2 亚型的影响

目的 观察白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 IA2亚型(CYP IA2)的影响.方法 实验组(高、中、低剂量组)大鼠分别给予白花蛇舌草水提取物5.84g/kg、8.26g/kg、11.68/kg,对照组给予生理盐水,用蛋白印迹方法测定大鼠CYP 1A2的蛋白表达.通过高效液相色谱(FmLC)法测定全血中咖啡因的代谢率,研究白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2的影响;用HPLC法测定非那西丁的代谢率,确定白花蛇舌草水提取物对大鼠肝微粒体CYP 1A2活性的影响.结果 蛋白印迹分析结果表明,白花蛇舌草水提取物对CYP 1A2蛋白表达没有影响.给予高、中、低剂量白花蛇草水提物的大鼠咖啡因代谢率分别为(33.62±5.08)%、(32.19±4.87)%、(31.05±4.93)%;对照组大鼠咖啡因代谢率为(so.73±5.40)%,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>O.0S).肝微粒体体外温孵实验中,实验各剂量组和对照组非那西丁代谢率分别为(3.76±O.83)%、(3.61 4-0.79)%、(3.844-0.86)%、(3.81±0.82)%,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0.05).结论 体内、体外实验结果均表明,白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2没有抑制作用.     

关节镜下双排锚钉缝线桥技术治疗肱骨大结节骨折

目的探讨关节镜下双排锚钉缝线桥固定技术治疗肱骨大结节撕脱性骨折的疗效。 方法随访2013年3月至2017年3月在南通大学附属建湖医院骨科接受治疗的骨折移位大于5 mm、骨折块面积小于3 × 3 cm,无其他损伤(如：肩袖损伤、SLAP损伤、Bankart损伤)的单纯肱骨大结节撕脱性骨折的且接受关节镜下双排锚钉缝线桥固定技术治疗的患者23例。收集患者末次随访的关节活动度、疼痛视觉模拟评分(VAS)、美国肩肘外科医师(ASES)评分等数据资料。采用配对样本t检验对术前术后关节活动度、VAS评分、ASES评分进行比较。 结果所有患者均在3个月内实现骨性愈合。肩关节前屈活动度由术前(92.4±15.3)°提高至术后(148.7±15.3)°(t＝9.956,P<0.01),外展活动度由术前(85.0±12.6)°提高至术后(147.3±14.4)°(t＝15.502,P<0.01);外旋活动度由术前(21.5±10.2)°提高至术后(30.7±11.8)°(t＝12.058,P<0.01); VAS评分比术前降低(Z＝4.107,P<0.01); ASES评分由术前(29.7±6.1)分提高至术后(91.8±4.1)分(t＝41.879,P<0.01)。 结论关节镜下双排锚钉缝线桥技术治疗单纯性肱骨大结节撕脱性骨折效果确切,手术创伤小、恢复快、术后肩关节功能恢复良好。     

富集自体骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石／磷酸三钙植骨材料在脊柱融合中的应用

目的:探索通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙作为植骨材料进行脊柱融合的新方法。方法:①观察对象:选择2005-01/2006-02建湖县人民医院骨科收治的胸腰椎骨折均采用后路椎弓根钉系统复位及固定患者48例。②实验分组:根据植骨融合材料不同随机分为2组,干细胞 复合材料组24例,男13例,女11例;年龄25～49岁。自体髂骨移植组24例,男15例,女9例;年龄26～50岁。③实验干预:采自体骨髓通过密度梯度离心得到富集的间质干细胞悬液与羟基磷灰石磷酸三钙复合2h后作为植骨材料。干细胞 复合材料组采用骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙移植;自体髂骨移植组采用自体髂骨移植。④实验评估:对所有患者脊柱融合情况、临床疗效、伤椎复位后高度丢失等进行比较分析,评定脊柱融合效果。结果:术后随访12个月,48例患者全部进入结果分析。①骨髓富集的有效性:富集前后骨髓间质细胞浓度达到8倍。②临床疗效:干细胞 复合材料组所有病例取髓处疼痛术后1周消失,均未发生感染。自体髂骨移植组术后3个月取骨处仍有疼痛。所有病例无感染和内固定松动断裂等并发症。两组术后12个月LBOS评分优良率干细胞 复合材料组71%(17/24),自体髂骨移植组79%(19/24)。③脊柱融合情况:术后随访6个月以上的患者X射线、检查均示有良好的脊柱融合,两组在术后3个CT月移植物密度降低并可见双侧薄层融合块,术后6个月双侧可见整块新生骨或单侧大块新生骨。按Lenke字母分级法融合分级,两组均无C、级融合。④Cobb角测量结果:伤椎复位后高度丢失干细胞 复合材料组平均为2.38°D,自体髂骨移植组平均为2.42°。结论:通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙应用于胸腰椎骨折后外侧融合可取得与自体髂骨移植同等的临床疗效,是一种安全可靠,简便有效的植骨替代材料。     

T-2毒素致HeLa细胞DNA断裂特征的高效毛细管电泳实验观察

目的 探索T-2毒素中毒的生物标志。方法 用高效毛细管电泳方法。结果 T-2毒素造成HeLa细胞DNA断裂的碎片是50bp的2，4，5，6，7，13倍体。结论 T-2毒素能诱导人体HeLa细胞染色质产生凋亡DNA碎片，其损伤特征的存在可作为生物标志，具有在病因流行病学研究中使用的可能。     

抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。     

小鼠抗人细胞色素P450 1A2合成肽抗血清的制备与鉴定

目的：制备小鼠抗人细胞色素P450 1A2（CYP1A2）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列,根据4个指标（亲水性、柔韧性、抗原性及表面性）选择欲合成的多肽序列,设计、合成CYP1A2多肽。将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联,免疫BALB/c雌性小鼠制备抗CYP1A2抗体。用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot鉴定其特异性。结果：成功地获得针对小分子CYP1A2的抗体。该抗体效价为1∶16000,可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应。Western blot的结果显示,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量（Mr）为58000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的小鼠抗CYP1A2合成肽抗体的效价高及特异性良好。     

兔抗人细胞色素P450 1A2多克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备兔抗人细胞色素P4501A2（CYP1A2）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列，根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列，合成CYP1A2多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素（Keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，免疫日本大耳白兔制备抗CYP1A2抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体，间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数，Western blot鉴定其特异性，免疫组化进行定位。结果：获得针对小分子CYP1A2的抗体。该抗体效价为1∶16000；相对亲和力常数在10^5-10^6/M，具有实用价值；可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应；可识别正常人肝脏组织CYP1A2；Western blot的结果显示，该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为58000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP1A2合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验。     

骨质疏松合并颈椎病病人的颈椎椎体

目的　探讨颈椎椎体骨质疏松在颈椎病发病中的作用。方法　分3组。正常组5例,颈椎间盘突出组(颈椎组)8例,骨质疏松合并颈椎管狭窄(疏松组)8例。标本取自C5椎体上1/4的松质骨。所取标本分别进行光镜和扫描电镜观察。结果　随病情发展,光镜下,骨小梁逐渐变细,间隙大小不一;电镜下见椎体松质骨逐渐丧失了原有海绵样结构,大量骨陷窝形成,造成骨小梁变细、穿孔、吸收甚至消失。骨小梁未见微骨痂形成。结论　骨质疏松是颈椎病发病因素之一,颈椎椎体骨小梁异常改建是以不断增多的吸收陷窝导致骨小梁穿孔、变细、吸收甚至消失完成的,是造成椎体变形的主要原因,而微骨折在颈椎变形中可能不起作用。