脑微血管内皮细胞条件培养液对体外培养正常神经元的影响

目的:探讨体外模拟脑缺血再灌注损伤条件下及通络救脑注射液干预下脑微血管内皮细胞条件培养液(CMEX-CM)对体外正常培养神经元的影响.方法:先分别进行大鼠大脑微血管内皮细胞和神经元的分离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,然后用收集的CMECs～CM 1:1和1:5的浓度作用于体外培养的神经元,MTT法测定神经元的活性、存活率,western～blot检测NF-KB的表达.结果:脑微血管内皮细胞条件培养液可影响神经元生存活性,应用中药通络救脑注射液作用于脑微血管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提高神经元的生存活性,可以提高神经元中NF-KB的表达.     

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。     

精制清开灵及其组分对中风后大鼠内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：清开灵是一种治疗脑中风的传统中药复方。精制清开灵是从清开灵衍生出的有效成分复方，既往研究证明，此药具有减轻大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠血管内皮细胞损伤和抑制炎症过程的作用，从而体现出神经保护的效果。而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）来源的一氧化氮在脑缺血发作后的病理过程中起到重要的保护作用，是近年药理学研究的热点之一。本实验研究了大鼠持久性局灶性脑缺血72h后精制清开灵及其各组分对抗脑缺血损伤的作用以及它们对eNOS表达的影响。方法：以线栓法复制SD大鼠持久性大脑中动脉栓塞（PMCAO）模型。缺血72h后，取出脑组织做冠状切片，1TrC染色计量梗死程度，并以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原（血管性假血友病因子，vWF）含量。以免疫组织化学染色方法观察大鼠脑组织eNOS的表达情况。并根据免疫组织化学分析的结果，取缺血侧脑组织以免疫印记法验证精制清开灵及其各组分对eNOS表达水平的影响。结果：PMCAO72h，模型组大鼠eNOS蛋白在缺血半暗带的血管内皮细胞表达增加。与模型组动物相比，精制清开灵及其各组分治疗组动物eNOS蛋白的表达明显增加，而脑梗死范围则显著缩小。结论：持久性局灶性脑缺血后，在缺血半暗带血管内皮细胞表达增加的eNOS可能具有重要的代偿作用。精制清开灵及其各组分能够不同程度地促进缺血后半暗带eNOS的表达，这可能是它们阻抑脑缺血损伤的重要机制之一。     

通络救脑注射液对氧糖剥夺大鼠脑微血管内皮细胞分泌巨噬细胞炎性蛋白-1β的影响

[目的]观察通络救脑注射液对氧糖剥夺损伤(OGD)的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液中巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)分泌情况及其受体--趋化因子受体5(CCR5)表达的影响.[方法]氧糖剥夺法建立内皮细胞OGD模型,酶联免疫银光法(ELISA)法检测脑微血管内皮细胞条件培养液中MIP-1β含量的变化,免疫组化法及Western blot法观察内皮细胞中MIP-1β及其受体CCR5的表达情况.[结果]OGD组的内皮细胞分泌大量MIP-1β至上清液,该组内皮细胞胞浆大量表达MIP-1β,同时CCR5的蛋白表达量亦随之上升,加入通络救脑注射液的OGD组,其上清液中MIP-1β分泌量显著性下降(P<0.01),MIP-1β及其受体CCR5在内皮细胞上的表达也有不同程度的下降.[结论]通络救脑注射液能够抑制OGD损伤时内皮细胞M1P-1β的分泌,减少MIP-1β和CCR5的表达,对内皮细胞缺氧损伤后趋化因子释放的抑制是其发挥解毒通络药效的途径之一.     

复方通络救脑促进神经细胞突触可塑性

目的: 检测中药复方通络救脑及其主要成分三七总皂苷和京尼平苷对神经突触可塑性有无促进作用。 方法: 实验分为对照组和给药组,采取细胞活力检测法,即CCK-8检测法检测药物对稳转的过表达的瑞典型突变淀粉前体蛋白(swAPP)突变的人神经母细胞瘤(SY5Y)细胞的增殖曲线的影响;通过Western blotting检测药物对于神经细胞突触相关蛋白树突棘肌动蛋白结合蛋白(drebrin)和突触后密度蛋白-95(PSD-95)的表达的变化;用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞长出神经突起后,检测药物对于细胞突起的作用。 结果: 复方通络救脑及其主要组成成分京尼平苷和三七总皂苷不影响过表达的瑞典型突变淀粉样前体蛋白的神经母细胞瘤(swAPP-SY5Y)的细胞增殖曲线,且复方通络救脑中京尼平苷能够显著增加swAPP-SY5Y细胞drebrin和PSD-95的表达(P<0.01),显著增加PC12细胞总突起数(P<0.01);而三七总皂苷没有相应的作用。 结论: 复方通络救脑能促进神经细胞的突触可塑性,初步断定起主要作用的成分是京尼平苷而不是三七总皂苷。     

糖皮质激素受体介导下栀子苷对LPS诱导的脓毒症小鼠的保护作用

目的研究栀子苷对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症模型鼠的保护作用与糖皮质激素受体间的关系。方法 50 mg/kg LPS诱导C57BL/6 J小鼠脓毒症模型,观察栀子苷20mg/kg和40mg/kg两个剂量对模型鼠的影响。通过检测小鼠肛门温度、体重和肺组织病理变化(HE染色法)观察栀子苷对LPS诱导的脓毒症小鼠的保护作用。通过检测小鼠血清中糖皮质激素皮质醇含量[酶联免疫吸附法(ELISA)]的变化和糖皮质激素受体下游基因的表达变化(荧光定量PCR法)探讨栀子苷对脓毒症小鼠保护作用的作用机制。结果栀子苷能够明显改善LPS诱导的模型鼠的肛门温度(P0.05)和体重(P0.01)的下降趋势;栀子苷能明显改善LPS诱导的肺组织病理状态;LPS诱导的模型鼠血清皮质醇含量增加(P0.05),栀子苷作用后能够显著降低皮质醇含量(P0.01);栀子苷两个剂量组不同程度的降低糖皮质激素受体下游基因IL-10、Edn1、Tnf的表达(P0.05)。结论栀子苷通过糖皮质激素受体对LPS诱导的脓毒症小鼠具有保护作用,能够改善脓毒症小鼠皮质醇异常增高现象,调节糖皮质激素下游基因的表达变化。     

TDP-43在人胚胎肾细胞中的代谢及其产物对细胞活力的影响

目的研究TAR DNA结合蛋白43 kD(TDP-43)在人胚胎肾细胞HEK293中的代谢过程及其产物对细胞活力的影响。方法应用不同浓度十字孢碱(STS)作用于HEK293细胞,检测TDP-43含量的变化,并联合使用不同的蛋白降解通路阻滞剂研究其代谢机制,再通过转染外源性TDP-43研究其对细胞活力的影响。结果 STS对HEK293细胞中TDP-43蛋白含量影响不大,在较高浓度时(5、10μM)会诱导HEK293细胞产生35 kD片段。进一步研究发现这一35 kD片段是通过泛素-蛋白酶体通路降解的,且其过表达时会明显降低HEK293细胞的活力。结论过表达外源性TDP-43及其35 kD片段可对HEK293细胞活力产生抑制作用,可能是导致TDP-43相关疾病的原因。     

精制清开灵及其组分对中风后大鼠内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：清开灵是一种治疗脑中风的传统中药复方。精制清开灵是从清开灵衍生出的有效成分复方，既往研究证明，此药具有减轻大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠血管内皮细胞损伤和抑制炎症过程的作用，从而体现出神经保护的效果。而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）来源的一氧化氮在脑缺血发作后的病理过程中起到重要的保护作用，是近年药理学研究的热点之一。本实验研究了大鼠持久性局灶性脑缺血72h后精制清开灵及其各组分对抗脑缺血损伤的作用以及它们对eNOS表达的影响。方法：以线栓法复制SD大鼠持久性大脑中动脉栓塞（PMCAO）模型。缺血72h后，取出脑组织做冠状切片，TTC染色计量梗死程度，并以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原（血管性假血友病因子，vWF）含量。以免疫组织化学染色方法观察大鼠脑组织eNOS的表达情况。并根据免疫组织化学分析的结果，取缺血侧脑组织以免疫印记法验证精制清开灵及其各组分对eNOS表达水平的影响。结果：PMCAO 72h，模型组大鼠eNOS蛋白在缺血半暗带的血管内皮细胞表达增加。与模型组动物相比，精制清开灵及其各组分治疗组动物eNOS蛋白的表达明显增加，而脑梗死范围则显著缩小。结论：持久性局灶性脑缺血后，在缺血半暗带血管内皮细胞表达增加的eNOS可能具有重要的代偿作用。精制清开灵及其各组分能够不同程度地促进缺血后半暗带eNOS的表达，这可能是它们阻抑脑缺血损伤的重要机制之一。     

三七和栀子有效成分对AD转基因小鼠早期脑内淀粉样蛋白清除作用的研究

目的研究三七和栀子有效组分(三七总皂苷和栀子苷)对APPV717I转基因小鼠脑内淀粉样蛋白的影响。方法转基因小鼠♀♂各半,分别随机分为三七和栀子有效成分高剂量组,中剂量组,低剂量组,阳性药安里申组,模型组。阴性对照组为同窝出生的野生型小鼠。小鼠自3月龄开始自主进食给药3个月,进行免疫组织化学、Western blot、ELISA实验,检测海马和皮层区淀粉样蛋白Aβ1-40、Aβ1-42,降解酶IDE和NEP的表达水平。结果在♀性小鼠各组中,三七栀子中剂量组能够明显降低其脑内Aβ1-42的水平,且淀粉样蛋白的主要降解酶之一IDE的水平也有升高的趋势;而在♂性小鼠各组中,三七栀子的作用并不明显。结论三七和栀子有效成分可能通过促进Aβ的降解来降低♀小鼠Aβ1-42水平,对♂小鼠作用不明显。