p8218中的人白细胞干扰素基因的亚型分析

质粒 p8218是在载体 pBR322的Pst Ⅰ位置插入人白细胞干扰素 cDNA 后得到的。p8218上人白细胞干扰素基因中几种限制性内切酶的切点数目与位置与IFN-αD一致。部分片段的 DNA序列分析也证明与IFN-αD的相应片段顺序相同。这都说明克隆在p8218中的人白细胞干扰素基因属于D亚型。限刷性内切酶分析结果还表明,p8218中人白细胞干扰素基因和抗氨基苄青霉素基因的转录方向一致。     

伴有干扰素基因表达变异的抗病毒L细胞系的选育及其特性的研究

用亚硝基胍诱变、VSV攻击选育的方法获得 3株抗病毒 L细胞系,后者对VSV、Sindbis病毒、痘菌病毒有明显的抗病毒性质。抗病毒细胞系的干扰素诱生系统和活性发挥系统都发生了明显的改变,表现在对病毒攻击发生干扰素加速反应以及提高对“细胞内”2-5P3A3的抑制细胞分裂活性的敏感性。对抗病毒细胞系干扰素基因表达的变异机理进行了讨论。     

人角质化细胞生长因子2基因克隆、表达及其产物的纯化和鉴定

背景：人角质化细胞生长因子2具有广慢的生理功能，在胚胎发育、组织的修复、神经的再生、血管的生成和肿瘤发展中具有重要作用。目的：克隆人角质化细胞生长因子2基因，于大肠杆菌中表达，并检测其生物学活性，为进一步开发提供实验依据。设计：开放性实验。单位：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。材料：实验于2000—09／2002—05在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室完成。pBV220温控表达载体为病毒基因工程国家重点实验室构建．EcoRⅠ、BamHⅠ、T4 DNA连接酶（Promega公司）；人角质化细胞生长因子2特异性聚合酶链反应引物（上海博亚生物技术有限公司合成）；肝素-Sepharose CL-6B（Pharmacia公司）；快速聚合酶链反应产物纯化试剂盒、总RNA提取Trizol试剂盒、反转录-聚合酶链反应试剂盒（GIBCO公司）；质粒DNA快速提取试剂盒（博大公司）；BL-21-codon plus compent cells（Stratagene公司）。方法：用高表达菌株BL-21-codon plus compentent cells表达重组人角质化细胞生长因子2蛋白并初步纯化和检测其活性。通过反转录-聚合酶链反应从自然流产胎儿肺组织中钓取人角质化细胞生长因子2cDNA，将其克隆人pBV220载体质粒。在大肠杆菌BL-21-codon plus compent cells中表达人角质化细胞生长因子2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化．以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。主要观察指标：人角质化细胞生长因子2cDNA的片段长度和序列，人角质化细胞生长因子2基因在大肠杆菌中的表达，纯化人角质化细胞生长因子2的活性。结果：人角质化细胞生长因子2cDNA片段大小约500bp．人角质化细胞生长因子2蛋白在BL-21中得到高效表达，于上清中可溶性表达，SDS-PAGE显示相对分子质量约20000；人角质化细胞生长因子2蛋白对NIH3T3细胞具有显著的促有丝分裂活性，1，5，10μg／L人角质化细胞生长因子2A值（490nm）高于空白对照组，差异有非常显著性意义（分别为0.174&;#177;0．022，0．220&;#177;0、029，0．306&;#177;0．050,0．066&;#177;0．004，P〈0．001）。结论：成功克隆人角质化细胞生长因子2基因，并于大肠杆菌BL-21中得到高效表达；纯化的人角质化细胞生长因子2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖，具有显著的促有丝分裂活性。     

长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童人博卡病毒感染的初步研究

目的 了解人博卡病毒(HBoV)在长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童中的流行情况及临床特征,比较分析其区域流行特点.方法 收集2007年9月 - 2008年3月长沙地区773份急性下呼吸道感染住院儿童鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirates,NPAs)样本进行HBoV病毒NP1基因检测,将PCR阳性产物测序,并将所测序列在GenBank中进行比较分析.结果 773例样本中,HBoV阳性例数87例,HBoV感染患儿年龄为18 d ～ 64个月,冬春季节流行,主要的临床诊断与症状是支气管肺炎与咳嗽;所测序列与GenBank公布的不同地区的HBoV NP1基因核苷酸序列同源性达99.53%,氨基酸序列同源性达99.8%,对核苷酸序列作基因进化树分析显示属于1种基因型.结论 长沙地区部分急性下呼吸道感染儿童与人博卡病毒有关,且HBoV 感染在低年龄组的儿童中更常见;一种基因型在长沙地区流行.     

1165例急性下呼吸道感染住院儿童的病毒病原学分析

目的：了解长沙地区急性下呼吸道感染(ALRTI) 住院儿童中常见呼吸道病毒的流行特点,为本地区儿童ALRTI的防治提供依据。方法：收集2007年9月至2008年8月诊断为ALRTI的住院患儿鼻咽抽吸物标本1165份,采用RT-PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、流感病毒A(IFVA)、流感病毒B(IFVB)、副流感病毒1~3(PIV1~3)、偏肺病毒(hMPV)、冠状病毒NL63(HCoV-NL63)及冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1);PCR方法检测腺病毒(ADV)、博卡病毒(HBoV);巢式PCR方法检测多瘤病毒WU(WUPyV）和多瘤病毒KI(KIPyV)。并对阳性标本进行基因测序以证实。结果：1165份标本中有871份检出了病毒,总检出率74.76%,其中RSV最为常见,检出率为27.03%,其次为HRV（17.33%）、PIV3（13.73%）及新发现病毒HBoV(8.67%)和hMPV(6.52%)。病毒总检出率在男女之间差异无统计学意义,但男性PIV3、hMPV和HBoV的阳性检出率高于女性。病毒阳性检出率在各年龄组之间差异有统计学意义（χ2=10.934,P=0.027）,以6个月至1岁以内年龄组检出率最高。病毒总检出率在四季分布差异有统计学意义（χ2=12.307,P=0.006）,以冬季检出率最高。结论：病毒病原在长沙地区儿童ALRTI中占重要地位,其中RSV、HRV及PIV3是主要病毒病原,近年新发现的HBoV和hMPV也占较高比例;病毒检出率以6个月至1岁以内年龄组最高;冬季病毒总检出率高于其他季节。     

加强我国狂犬病防控

1我国狂犬病形势依然严峻狂犬病俗称疯狗病,是由狂犬病病毒引起的一种重要人兽共患病,病死率高达100%。自1950年以来,我国人狂犬病死亡人数累计已经超过12万例。进入21世纪之     

人αD型基因工程干扰素的研制

人干扰素系人细胞的一类诱生性蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性。近十多年来的临床研究已经表明,干扰素对某些病毒病和恶性肿瘤有明显疗效。然而,天然人干扰素大都用人血白细胞制备,来源困难,价格昂贵,不可能推广使用。本研究采用基因工程方法、从干扰素mRNA的高效诱生、cDNA合成、基因克隆及鉴定,cDNA结构测定、高效表达,产品纯化,多肽N端部分序列测定以及实验室小试生产流程等,使大肠杆菌发酵生产人αD     

海南岛两株甲病毒基因组3＇末端核苷酸序列的克隆与分析

目的 从分子水平鉴定海南省分离的两株甲病毒（ＨＢｂ１７和Ｍ１病毒）。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,分别扩增两株病毒基因组的３’末端核苷酸序列,扩增产物经亚克隆,筛选重组子并测定核苷酸序列对序列进行分析。结果 ＨＢｂ１７和Ｍ１病毒分别扩增出约１．６ｋｂ和１．３ｋｂ的特异片段。序列分析表明,在３’末端非翻译区ＨＢｂ１７病毒和Ｍ１病毒与罗斯病毒（国际标准株Ｔ４８病毒）核苷酸同源性为９９％,Ｍ１病毒与鹭山病