基于BV2小胶质细胞极化探索片仔癀抗炎机制

目的:从小鼠小胶质瘤细胞(BV2)极化角度探索片仔癀(PTH)的抗炎作用机制。方法:将对数生长期的BV2细胞分为空白组,M1模型组[脂多糖(LPS)100μg·L~(-1)+干扰素-γ(IFN-γ)10μg·L~(-1)],M1片仔癀组[LPS 100μg·L~(-1)+IFN-γ10μg·L~(-1)+PTH 0.4 g·kg~(-1)],M2模型组[白细胞介素-4(IL-4)20μg·L~(-1)],M2片仔癀组[IL-4 20μg·L~(-1)+PTH0.4 g·kg~(-1)],给以相应处理。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),一氧化氮(NO),白细胞介素-10(IL-10),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的含量,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中一氧化氮诱导合酶(i NOS),精氨酸-1(Arg-1)mRNA的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中i NOS,p-STAT1,p-STAT3,Arg-1,p-STAT6蛋白表达情况。结果:与空白组比较,M1模型组上清TNF-α,NO含量显著升高(P0.01),细胞i NOS mRNA,i NOS,p-STAT1,p-STAT3蛋白水平显著升高(P0.01),而与M1模型组比较,M1片仔癀组上清TNF-α及NO的含量显著下调(P0.01),细胞i NOS mRNA显著下调(P0.01),i NOS,p-STAT1,p-STAT3蛋白水平也明显下调(P0.05,P0.01)。与空白组比较,M2模型组细胞培养上清中IL-10及TGF-β_1含量显著升高(P0.01),细胞Arg-1 mRNA,Arg-1,p-STAT6蛋白水平显著升高(P0.01)。与M2模型组比较,M2片仔癀组上清中IL-10及TGF-β_1含量明显上调(P0.05,P0.01),细胞Arg-1mRNA水平,Arg-1及p-STAT6蛋白水平明显上调(P0.05,P0.01)。结论:片仔癀可以通过调节BV2的极化发挥抗炎作用。     

一株健康人γδT细胞克隆的建立及鉴定

目的 建立健康人γδT细胞克隆并进行鉴定。方法 以60Co照射的同种异体PBMC作为饲养细胞,以有限稀释法对经过阳性分选的γδT细胞进行克隆化。用流式细胞术及分子生物学检测鉴定所获克隆,以MTT掺入法对所获克隆进行增殖实验检测。结果 获得一株γδT细胞单克隆,为Vγ9Vδ2亚型,CD4分子和CD8分子表达均为阴性。进一步的研究发现表位肽EP6不仅能够特异性结合γδT细胞单克隆,而且能够促进其增殖。结论 成功建立了健康人外周血γδT细胞克隆,为深入研究γδT细胞抗原识别机制、亚群及功能奠定了坚实的基础。     

常山酮抗肿瘤作用机制研究进展

常山酮（HF）是中药有效成分常山碱的衍生物,长期作为广谱抗球虫药使用。近年来,研究发现HF可促进伤口修复、抑制组织纤维化,其在抗肿瘤临床前研究中表现尤为突出,展示了HF抗肿瘤的巨大潜力。查阅近年来国内外相关文献,从抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抗血管新生、抑制纤维母细胞活化和抗炎等方面,综述了HF抗肿瘤研究进展,同时为HF的深入研究提供参考。     

雷公藤甲素毒性作用及减毒研究的整合探析

雷公藤甲素是从卫矛科植物雷公藤的木质部提取到的环氧二萜内酯类化合物,是雷公藤的主要活性成分之一,具有抗炎、免疫调节及抗肿瘤等生物活性及药理学作用,可以用于治疗类风湿关节炎,多种肿瘤如白血病、乳腺癌、胰腺癌和肺癌等疾病。近年来,雷公藤甲素制剂虽然在临床中得到了一定的应用,但在发挥治疗作用的同时,其对机体消化系统、泌尿系统、生殖系统、循环系统、免疫系统等器官也产生了一些毒性作用,包括肝功能损伤,生育能力下降,胸闷、心悸、心动过缓、房室传导阻滞、心律失常,肾脏功能异常,淋巴器官的萎缩、淋巴组织内淋巴细胞的坏死和细胞数目的减少,免疫功能受损等。这些毒性作用极大限制了雷公藤甲素在临床中的应用,也限制了与其相关的制剂研发,引起了临床医生和科研人员的广泛关注。为了确保雷公藤甲素发挥治疗作用的同时,降低其在使用过程中对机体脏器的毒性,国内外研究者做了大量研究和尝试,如改变雷公藤甲素的化学结构提高其溶解性,开发载药系统削减其毒性,与中草药联合使用增效减毒等。该文对雷公藤甲素在基础研究中产生毒性作用的致毒剂量和机制,以及雷公藤甲素衍生物、载药系统、配伍减毒研究方面进行了整理分析,以期为雷公藤甲素毒性作用及减毒研究的深入探索提供参考。     

探索进展型EAE 小鼠中枢神经系统不同部位的组织病理学和小胶质细胞的动态变化

目的 建立进展型实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,观察中枢神经系统（central nervous system,CNS）不同部位在病变不同阶段的组织病理学变化以及M1型、M2型小胶质细胞的动态变化。方法 以C57BL/6为实验小鼠,建立EAE模型,于不同发病时期对CNS各部位进行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）检测髓鞘脱失、苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色检测炎细胞浸润;免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测M1型、M2型小胶质细胞的动态变化;Real-Time PCR检测腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。结果 LFB和HE染色结果显示EAE 小鼠CNS各部位均于发病点出现髓鞘脱失和炎细胞浸润,且随疾病进展逐渐加重。IHC结果显示,M1型小胶质细胞浸润随疾病进展不断增加;M2型浸润先增加后减少。Real-Time PCR结果显示,iNOS,TNF-α的mRNA水平随疾病进展逐渐增加;Arg-1,IL-4的mRNA的表达水平为先增加后降低。结论 在进展型EAE小鼠的病理变化中,CNS各部位髓鞘脱失程度和炎细胞浸润随疾病进展变得更加严重,且以腰髓段的病理变化最为严重。随着疾病进展,M1型小胶质细胞数量逐渐增加,M2型的浸润先增加后减少。     

白术黄芪汤分子网络及细胞免疫作用的生物信息学分析

目的:利用生物信息学方法分析白术黄芪汤的分子网络及与细胞免疫相关的生物通路,为白术黄芪汤免疫调节机制研究提供思路和依据。方法:利用在线数据库查找白术黄芪汤组方中药含有的化学成分,在Pub Chem数据库检索化学成分的靶蛋白,将靶蛋白上传至生物信息分析软件,分析上传的靶蛋白构成的分子网络及与细胞免疫相关的生物通路。结果:共检索到白术黄芪汤化学成分的靶蛋白61个,构建成6个分子网络,得到多条与细胞免疫相关的生物通路,前3个生物通路分别是Calcium-induced T Lymphocyte Apoptosis,CCR5 Signaling in Macrophages和IL~(-1)2 Signaling and Producing in Macrophages。参与前3个生物通路的白术黄芪汤的靶蛋白包括T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR),蛋白激酶C(protein kinase C,PKC),过氧化物酶体增殖物激活受体gamma(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARG)。结论:通过生物信息学分析,得到了白术黄芪汤的复杂分子网络及与细胞免疫相关的生物通路,为其免疫调节机制研究提供了一定的思路和依据。     

具有生物学活性的hMSH2蛋白在昆虫sf9细胞中的表达

目的 表达具有生物活性的hMSH2蛋白.方法 用搭桥PCR获得hMSH2全长基因,构建pAcGP67B-hMSH2重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫细胞sf9,表达hMSH2蛋白(同时构建pET30a-hMSH2重组质粒,用大肠杆菌表达hMSH2蛋白);Western blot鉴定hMSH2蛋白;ELISA,流式细胞仪检测蛋白与OT3肽及TCRγδ的结合特异性;检测细胞增殖(MTT法)和细胞因子分泌,观察重组蛋白体外活化γδT细胞的生物学功能.结果 克隆到正确的hMSH2基因,并将其插入到表达载体pAcGP67B和pET30a中的正确位置.经Western blot鉴定获得了hMSH2蛋白.用昆虫病毒表达载体系统表达的hMSH2蛋白能与其探针肽OT3及TCRγδ特异性结合,并能在体外刺激γδ细胞增殖及分泌IFN-γ,其活性更优于原核表达的蛋白.结论 成功利用昆虫病毒载体表达系统得到了比原核大肠杆菌表达系统更具生物活性的hMSH2蛋白.     

用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建噬菌体抗独特型抗体库

目的 :构建噬菌体人源抗独特型抗体库。方法 :体外致敏并用EBV转化鼻咽癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH 和VL 基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,转化大肠杆菌MC10 6 1,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果 :经EBV转化的 10例鼻咽癌患者的PBMC中 ,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经多次PCR ,扩增出 5种VH(γ、μ)和 7种VL(κ、λ)基因 ,经连接组成 14种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,导入大肠杆菌MC10 6 1。经四环素抗性筛选 ,得到库容为 1.1× 10 7的初级噬菌体抗独特型抗体库 ,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为 70 %。结论 :用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术 ,制备人源抗独特型单链抗体(Ab2 βScFv)的策略是可行的     

肿瘤基因工程抗体研究进展

综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展，显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。     

中药有效成分治疗骨质疏松症的基础研究进展

骨质疏松症（osteoporosis,OP）是一种以骨量低下,骨微结构破坏,导致骨脆性增加,易发生骨折为特征的全身眭代谢性骨病,多见于老年人群和绝经后妇女。OP的产生源自体内骨代谢失衡。任何原因由破骨细胞激活骨吸收活动增强,导致骨量丢失增加,可产生OP;或由成骨细胞功能受到抑制,骨生成活动降低,形成骨量不足,亦可导致OP。