治疗类风湿关节炎骨破坏的生物制剂研究进展

类风湿关节炎（rheumatoidarthritis,RA）是一种病因复杂的自身免疫炎性疾病,以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要表现,骨破坏可发生在疾病活动的早期。并逐步进展,是导致RA中晚期患者劳动能力丧失的主要原因之一．因此预防和阻断RA骨破坏也成为了治疗目标。随着研究深入,许多与RA骨破坏相关的细胞因子、信号通路及细胞被发现。针对于此,最近用于治疗RA骨破坏的相关生物制剂研究也在不断被推进,许多有价值的实验研究结果被报道,故本文试图在RA骨破坏机制基础上探讨生物制剂实验研究方面的最新进展。     

白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NLRP3炎症小体的作用研究

摘 要：目的：观察白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NOD样受体-3（NLRP3）炎症小体的影响。方法：用佛波酯（PMA）（10 ng?mL-1）刺激U937细胞48 h,诱导其成为巨噬细胞,观察不同剂量白术黄芪汤乙酸乙酯提取物（0,3.125,6.25,12.5,25,50,100 μg?mL-1）对细胞活力的作用,并选择合适的浓度。采用实时荧光定量（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）测定细胞中NLRP3,半胱天冬酶-1（caspase-1）的含量,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素（IL）-1β 的含量。结果：细胞计数试剂盒（CCK-8）实验表明,当药物浓度低于25 μg?mL-1时,对细胞活力没有影响,当药物浓度高于50 μg?mL-1时,对细胞活力有抑制作用（P＜0.05）,选择25 μg?mL-1浓度进行后续实验。与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3,caspase-1表达明显增加（P＜0.01）,细胞培养上清中的IL-1β浓度也明显增高（P＜0.01）。白术黄芪汤乙酸乙酯提取物作用后,NLRP3,caspase-1,IL-1β表达均明显下降（P＜0.05）。结论：白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对LPS刺激的巨噬细胞NLRP3炎症小体有抑制作用。     

肿瘤基因工程抗体研究进展

综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展，显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。     

人鼻咽癌组织定向cDNA文库的构建

目的快速构建成人鼻咽癌组织cDNA文库.方法从人鼻咽癌组织分离总RNA,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经sfiI(IA & IB)酶切,以CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库.结果经检测共获得 3.64×106个重组子,重组率＞94%,文库经扩增后滴度为 3.8×109 pfu/ml.结论用SMART方法构建的鼻咽癌组织cDNA文库质量较高,这为以后筛选获取鼻咽癌特异抗原基因或其他相关基因奠定了基础.     

周龄对C57BL/6小鼠胶原诱导关节炎造模成功率的影响

目的：建立C57BL/6小鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型,探讨小鼠周龄对造模成功率的影响。方法：取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只。相同饲养条件下分别饲养到7,10,11,12及14周龄,相同造模方法构建小鼠CIA模型,观察小鼠造模成功率。结果：7周,10周,11周,12周及14周小鼠造模成功率分别为20%,30%,30%,50%及60%,其中雌性小鼠占46%,雄性小鼠占54%。结论：胶原诱导关节炎小鼠造模成功率受周龄影响,14周时成功率可达60%;造模成功率不受小鼠性别影响。     

胶原诱导类风湿关节炎小鼠的重要脏器病理变化

目的：观察胶原诱导关节炎（Collagen Induced Arthritis, CIA）小鼠发病高峰期重要脏器的病理变化。方法：20只雄性DBA/1小鼠随机分为正常组和模型组,模型组给予牛II型胶原混合完全弗氏佐剂诱导CIA模型。造模后每周进行关节炎指数评分,于第63天处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾各组织和踝关节,利用HE染色法观察各脏器的病理变化,并采用Real-time PCR法检测小鼠肺组织中转化生长因子β1（Transforming Growth Factor Beta 1, TGF-β1）以及肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor Alpha, TNF-α）的mRNA表达水平。结果：成功建立了DBA/1小鼠胶原诱导关节炎模型。HE染色结果表明,除了踝关节出现明显的病理变化外,CIA小鼠的肺部有大量的炎细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡腔中有炎性浸出物,而心脏、肝脏、脾脏和肾脏没有出现明显的病理变化。Real-time PCR结果显示病变的小鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α的含量均显著高于正常的肺组织。结论：胶原诱导的DBA/1小鼠,其踝关节呈现严重的病理变化,其肺部也出现明显的炎症,且与类风湿关节炎肺部并发症的病理变化有相似之处,这些结果提示该模型可用于类风湿关节炎肺部病变的相关研究。     

一种基于EDTA脱钙法的改良骨组织脱钙方法

目的:探索操作方法简便、脱钙时间更短且对骨组织伤害较小的脱钙方法。方法:DBA/1小鼠40只,随机分组为胶原诱导关节炎模型组和正常组,并对模型组小鼠建立胶原诱导关节炎模型。分别取模型组和正常组踝关节,使用改良前后的脱钙方法进行脱钙,从关节病理及其评分、免疫组织化学方面进行比较脱钙效果。结果:经改良后,在脱钙温度4℃和脱钙液更换周期24 h条件下,脱钙速度较高(7 d),且此时对骨组织结构和骨组织内蛋白表达无明显影响。结论:优化的螯合剂脱钙法可以有效提高脱钙速度,可为快速制备病理诊断用骨切片提供了参考。     

黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞的作用

目的: 探讨黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞(Treg)免疫活性的影响。方法: 建立B16-F10荷瘤小鼠模型,C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、环磷酰胺(CTX)组、黄芪多糖低剂量组(0.15 g·kg^-1)、黄芪多糖高剂量组(0.3 g·kg^-1)。造模后第2天开始ig给药,给药14 d后处死各组小鼠,取肿瘤称重计算抑瘤率,取脾脏制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测小鼠脾脏中Treg的比例,通过实时定量PCR检测小鼠脾脏中转化生长因子-β (TGF-β)mRNA,白细胞介素-10(IL-10) mRNA的表达。结果: 黄芪多糖能够抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.05),降低脾脏中Treg的比例(P<0.01),降低脾脏中TGF-β mRNA, IL-10 mRNA(P<0.05)的表达。结论: 黄芪多糖可能通过降低荷瘤鼠脾脏中Treg数目,抑制TGF-β, IL-10分泌,从而实现其抑瘤作用。