慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证的差异表达基因比较

目的：比较慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证患者差异表达基因。方法:分别提取慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热患者胃黏膜组织RNA各4例，逆转录荧光探针标记后杂交制作BiostarH-140 s基因芯片。采用荧光值ratio、生物信息学、t检验等方法分析结果，实时荧光定量PCR检测部分相关基因。结果:获得差异表达基因245条，主要为营养物质消化吸收运输、物质能量合成代谢、细胞周期增殖分化、免疫反应等相关基因；有显著意义的差异表达基因77条；实时定量PCR检测10条基因，6条与芯片结果一致。结论:慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热2个证型基因表达存在明显差异，提示中医的临床辨证分型与基因差异表达有一定关系。     

骨髓间充质干细胞与仿生纳米壳聚糖-胶原复合物修复大鼠胫骨缺损的实验研究

目的： 4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞离体培养后与仿生纳米壳聚糖-胶原（nano chitosan-sodium collagen, nano-CS-COL）形成复合支架，植入SD大鼠胫骨缺损处, 比较修复节段性胫骨缺损的效果, 初步探讨治疗骨缺损的组织工程学方法。方法: 4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 离体培养、纯化、鉴定、扩增后在等同于细胞培养的条件下与nano-CS-COL复合培养, 制成MSCs/nano-CS-COL复合物并经电镜扫描证实复合物有细胞生长。制成同种异体SD大鼠胫骨干5mm节段性动物模型, MSCs/nano-CS-COL复合物通过手术移植入动物模型胫骨缺损处, 通过大体观察、X线放射学、组织学对比实验组与对照组、空白组骨缺损修复情况。结果: 术后6、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成有显著差异(P<0.05) 。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著差异。实验组标本与正常组基本一致。空白对照组不能自行修复骨缺损, 最后缺损由纤维组织充填。结论: BMSCs是骨组织工程中适宜的种子细胞。Nano-CS-COL复合支架能够与SD大鼠骨髓间充质干细胞体外复合培养, 移植入异体SD大鼠后未见明显免疫排斥反应, 是可以选择的细胞载体。MSCs/nano-CS-COL复合物植入修复鼠胫骨缺损能够加速新骨形成, 修复效果明显优于单纯CS植入组。     

Precise mapping of the EGF receptor gene on the human chromosome 7p12 using an improved fish technique

Summary The gene for epidermal growth factor receptor (EGFR) has been localized to the p14-p12 region of human chromosome 7 by somatic cell hybridization and radioisotopein situ hybridization techniques. In this paper, we report the precise mapping of the EGFR gene to the band p12 of chromosome 7 using a novel method in which fluorescence images fromin situ hybridization and Q-banding are computer graphically merged. The novel procedure is described in detail.     

腹腔镜治疗多囊卵巢综合征临床疗效评价

目的探讨治疗多囊卵巢综合征合并不孕症的快捷方法。方法分析65例多囊卵巢综合征合并不孕的临床资料（年龄24～34岁，平均年龄27．8岁；体质量48～79kg，平均62．27kg），观察采用腹腔镜手术治疗后妊娠率及流产率。结果腹腔镜手术治疗多囊卵巢综合征合并不孕术后妊娠率53-4％，妊娠后流产率9．7％。结论腹腔镜手术为目前治疗多囊卵巢综合征合并不孕有效快捷的方案。     

两种细胞表面抗原标记法流式仪检测健康成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例实验研究

目的了解正常成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例，并比较以CD3＋CD4双标记法和以CD3＋CD8双标记方法对检测结果的影响。方法全血以PMA和伊能霉素刺激培养4h，以三色标记法流式检测T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞因子阳性细胞的比例。结果CD3、CD8、CD4抗原在刺激后明显下调，但是不影响T亚群比例值。以CD3＋CD8双标记法检测了23例正常成人，n1和Tcl细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例分别为2．6％（0％-23．8％）和2．2％（0％-23．3％）。Th2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞2．8％（0．7％-13．3％）和1．6％（0％-5．1％）。以CD3＋CD4双标记法检测了12例正常成人，Th1和Tc1细胞占CD^＋淋巴细胞的比例分别为4．8％（0％-15．6％）和1．8％（0．3％-18．6％），Trh2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例分别为2．6％（0％-6．5％）和1．2％（0％-10．6％），均与以CD3＋CD8标记检测的结果无统计学意义。以CD3-FTTC和CD8-PerCP双标记法检测了17例正常人的IL-2表达，IL-2阳性的CD4^＋T细胞占CD3＋淋巴细胞的比例为3．7％（0％-30．0％），高于CD8^＋IL-2^＋T细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例0％（0％-1．7％），P=0．005。结论可以建立有效的流式检测正常人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例方法。以CD3＋CD4双标记或以CD3＋CD8双标记检测分析T亚群的Ⅰ、Ⅱ型细胞比例都是可行的。     

抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制

目的：采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA，以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法：诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白，用rHpaA免疫鸡，以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY，采用Bradford法测定含量，SDS—PAGE电泳分析纯度，Western blot鉴定抗原特异性，ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果：IgY提纯后含量为24．6mg／ml，纯度约为90％，Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带，ELISA效价为1：12800，巴氏消毒后未见效价损失。结论：成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY，为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。     

斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的　克隆斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并对其进行测序和序列分析。方法　利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果　RT PCR扩增出了一约5 0 0bp的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 95bp。将推导的氨基酸序列作同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着较高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。结论　克隆获得了斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,该片段包含了与半胱氨酸蛋白酶活性和空间结构相关的重要基因位点。     

低压缺氧延迟预适应对小鼠海马神经元的保护作用研究

目的：了解低压缺氧预处理是否能够诱导小鼠海马神经元产生延迟预适应，增强神经元耐缺氧能力。 方法： 将近交系Babl/c小鼠放入减压舱，模拟海拔7 000 m高度减压2.5 h/d，连续3 d。第3次减压毕36 h后，观察严重低压缺氧(12 000 m 4 h)、严重缺血(双侧颈总动脉阻塞18 min)、缺血合并低压缺氧 (结扎右侧颈总动脉后，低压缺氧8 000 m 4 h)对低压缺氧预处理及正常对照小鼠海马神经元的损伤情况。 结果： 7 000 m 2.5 h低压缺氧预处理对小鼠海马神经元无显著损伤，能够诱导其产生延迟预适应，显著增强海马神经元耐受严重低压缺氧、严重缺血、缺血合并低压缺氧损伤的能力。 结论: 本研究所采用的低压缺氧预处理方法能够诱导海马神经元产生延迟预适应，增强其抗缺血缺氧能力。     

内皮素-1对人系膜细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响

目的研究内皮素-1(ET-1)对人系膜细胞(MC)基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用体外MC培养,应用细胞ELISA法测定MC内MMP-3、TIMP-1蛋白的表达。结果ET-1促进MC内MMP-3、TIMP-1蛋白表达,但MMP-3/TIMP-1比值呈剂量及时间依赖性下降。结论ET-1可能是人系膜细胞内MMP-3/TIMP-1比值下降的原因之一,这与肾小球细胞外基质降解受抑密切相关。     

不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）心室肌组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达以及与心肌肥厚的关系。方法： 用左心室重量与体重的比值作为心肌肥大指数并以此指标反映心肌肥厚；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定心室肌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达和MKP-1 mRNA的含量。结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），心肌肥大指数明显大于WKY（P<0.05），ERK和MKP-1的表达均比WKY高（P<0.05）；（2）SHR的血压随年龄增长而升高（P<0.05），至14周趋于稳定，心肌肥大指数则在24周时出现激增（P<0.01）；（3）p-ERK随年龄增长呈递增趋势，而MKP-1呈递减趋势，且与心肌肥大指数和ERK的表达呈负相关（P<0.01）。结论： MKP-1在高血压大鼠随年龄和血压增加的心肌肥厚过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，进而引起心肌细胞肥大的重要原因。