致肾盂肾炎大肠杆菌132特异性基因的筛选

目的通过抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,比较致肾盂肾炎大肠杆菌132(UPEC132)与非致病性E.coli K-12 MG1655之间基因组的差异,筛选UPEC132特有的基因片段。方法应用SSH技术构建UPEC132(tester)与非致病性E.coli K-12 MG1655(driver)菌株差异DNA消减文库,经PCR和斑点印迹法筛选鉴定阳性克隆,并进行测序及生物信息学分析。结果获得约1600个重组菌的UPEC132消减文库,随机挑取其中的300个克隆,有37个含有UPEC132特异的DNA序列。特异性片段测序后进行生物信息学分析,发现与其相关的37个基因为UPEC132所特有,其中1个为新发现的DNA片段,9个为与致病相关基因,7个为与代谢和物质转运相关基因,2个为与外膜蛋白相关基因,3个为与调节相关基因,10个为未知功能蛋白的基因,其他5个为功能未分类的基因。结论SSH技术是筛选病原菌特异基因的有效方法,已确定了37个UPEC132的特异基因,为进一步阐明其致病分子机制打下了基础。     

双歧杆菌细胞壁组分免疫调节作用的研究

目的 :比较两种方法制备的双歧双歧杆菌细胞壁组分即双歧杆菌完整肽聚糖 (WPG)和细菌裂解物 (BL)的免疫调节作用。方法:分别以化学提取法和超声法制备双歧杆菌完整肽聚糖和细菌裂解物。采用淋巴细胞转化法和溶血空斑法分别研究它们对细胞和体液免疫的调节作用。结果:与对照组比较,BL对T细胞有明显的刺激作用(P<0.05) ,WPG无此作用(P>0.05) ;二者对B细胞都有明显的刺激作用(P<0.05或P<0.01)。结论:双歧双歧杆菌的BL和WPG均有免疫调节作用 ,前者优于后者 ,预示有良好的应用前景。     

变形链球菌耐氟菌株对葡萄糖摄取的体外研究

目的　探讨变形链球菌发生耐氟突变后摄取葡萄糖能力的变化。方法　采用逐步法诱导变形链球菌产生耐氟菌株 ,用葡萄糖氧化酶法测定不同PH值 ,有氟和无氟条件下变形链球菌耐氟菌株培养物上清液中葡萄糖减少量 ,并与亲代菌株进行比较。结果　在氟化物存在时 ,耐氟菌株糖摄取量大于亲代菌株 ;耐氟菌株和亲代株在有无氟化物条件下糖摄取量不同 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论　变形链球菌耐氟菌株具有致龋性 ;其致龋力大于亲代菌株。     

多重聚合酶链反应用于D－K型沙眼衣原体基因分型的研究

目的摸索一套泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型的多重聚合酶链反应法。方法选择某一型与其它各型均不同的可变区部位作为下游引物，以恒定区 1区的高度保守区作为各型的公用上游引物，优化反应条件，进行标准株和临床野生株的多重聚合酶链反应扩增，并与聚合酶链反应－限制性内切酶片段多态性方法比较。结果用摸索出的反应系统和条件，对 8个标准株进行扩增，扩增出与理论值一致的片段，并可直接在普通水平琼脂糖凝胶进行电泳。特异性检测证明：①衣原体各型之间没有非特异性交叉扩增，②对泌尿生殖道病原和寄生微生物进行扩增，未扩出任何 DNA带。对临床野生株分型结果证明：复合聚合酶链反应阳性率为 100％，而聚合酶链反应－限制性内切酶片段多态性为 94.44％。结论本套衣原体基因分型的多重聚合酶链反应法特异、敏感、快速、实用，最终能用于临床分型。     

乙肝疫苗免疫失败者中乙型肝炎病毒感染及S基因变异研究

目的研究乙肝疫苗免疫失败者中乙型肝炎病毒(HBV)隐匿性感染及编码S基因(surface)变异状况。方法选择乙肝疫苗免疫后抗-HBs阴性的儿童血清标本167份,利用聚合酶链反应(PCR)扩增HBVS基因片段,对PCR阳性产物进行脱氧核糖核酸(DNA)序列测定和基因片段分析。结果在167份标本中,HBV核酸阳性63份,在测序42份标本中11份标本S基因片段出现氨基酸变异,共有5个氨基酸位点发生变异,其中一个在"a"决定簇片段内。结论免疫失败儿童HBV隐匿性感染率较高,HBVS基因存在不同位点的变异。     

肾综合征出血热IMMS-ELISA检测方法建立

目的建立一种用于检测肾综合征出血热(HFRS)特异性抗体IgG的ELISA方法—免疫磁性微球(IMMS)ELISA。方法利用重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET32a-L99S诱导表达SEO型汉坦病毒(HV)重组核蛋白(rNP),并进行镍亲和层析纯化,以纯化rNP为抗原,分别建立检测HFRS特异性抗体IgG的3种ELISA法:间接ELISA、捕获ELISA和IMMS-ELISA,并进行方法学比较。结果新建立的3种ELISA的检测灵敏度和特异度为≥90%,总符合率≥95%。其中间接ELISA的灵敏度达100%,而假阳性率为10%;捕获ELISA特异度达100%,灵敏度较低(92.5%),且假阴性率为7.5%;IMMS-ELISA的灵敏度和特异度均达到100%。结论 IMMS-ELISA较其他2种ELISA检测方法更为简单、安全和准确,易于在基层公共卫生和临床医疗机构推广使用。     

江苏省人体重要寄生虫感染家庭聚集性分析

目的了解江苏省农村人体重要寄生虫感染家庭聚集性现状.方法按<全国人体重要寄生虫病现状调查实施细则>的要求和方法,以江苏省19个县(市、区)、58个抽样点调查结果,应用G检验对重要感染虫种进行家庭聚集性分析.结果蛔虫、钩虫、鞭虫和华支睾吸虫的感染存在家庭聚集性.被调查各县(市、区)则随各虫种感染率的高低和感染度的轻重,家庭聚集性在分界点上下.结论江苏省人体重要寄生虫感染的家庭聚集性现象随感染率降低和感染度减轻,呈逐渐消失趋势.建议在防治工作中应注重提高家庭内成员的服药和健康教育力度,以提高和巩固防治效果.     

麻疹病毒变异的分子生物学研究进展

麻疹病毒具有高度传染性,全球每年约有100万儿童死于麻疹,在疫苗可预防的病毒性疾病中麻疹仍是死亡例数最多的疾病。随着对麻疹病毒认识的不断加深,发现其流行病学发生了许多变化,本文就麻疹病毒变异的分子生物学研究进展作了综述。     

肺炎克雷伯菌表面成分对细胞因子的影响

目的：了解肺炎克雷伯菌表面成分诱生细胞因子的作用。方法：不同浓度的Kp表面成分刺激小鼠脾细胞诱生细胞因子并用细胞增殖试验和细胞毒法测定其活性。结果：2．5、5、10、20、40μg／ml的Kp表面成分均可刺激小鼠脾细胞分泌IL-2、IL-6、TNFa，高浓度组(20、40μg／m1)可单独刺激IL-6、TNFa的产生，具有类似LPS作用。结论：Kp表面成分可提高机体免疫功能，作为非特异免疫调节剂用于感染防治有良好的应用前景。     

氟化物对变形链球菌耐氟菌株的葡萄糖摄入量的影响

目的 :探讨变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株葡萄糖摄入能力的差异。方法 :在 pH为6.0和6.5时将变形链球菌耐氟菌株及亲代菌株在含氟缓冲液和无氟缓冲液培养3h ,采用葡萄糖氧化酶法测定3h中培养物上清液中葡萄糖减少量 ,并对两者进行比较。结果 :在有氟情况下时 ,糖摄入量耐氟菌株显著大于亲代菌株 ,两者比较有显著性差异 (P<0.01)。在有氟和无氟两种条件下耐氟菌株糖摄入量有显著性差异 (P<0.01),亲代株的糖摄入量也有显著性差异 (P<0.01)。结论 :变形链球菌耐氟菌株糖转运能力比亲代菌株强 ,致龋力大于亲代菌株