不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织蛋白的过敏原组分分析

目的:分析不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织的蛋白组分及过敏原组分,为检测中华绒螯蟹特异性IgE提供最佳抗原制备方法。方法:分别采用PBS提取法、丙酮抽提法和裂解液提取法提取中华绒螯蟹组织蛋白,并用裂解液提取法分别提取加热前、后的蟹蛋白;采用SDS-PAGE和双向电泳分析蛋白组分,采用Western blot分析过敏原组分。结果:不同方法提取的蛋白组分、sIgE与蛋白结合的强度和所识别的蛋白组分存在一定差异。PBS提取液蛋白主要分布在94、85、76、66、18kD,丙酮提取液蛋白主要分布在94、85、76、36 kD,裂解液提取液蛋白主要分布在200、125、51、43、38 kD。PBS提取液与sIgE结合的阳性反应条带主要分布在76、66、53、43、38、18 kD;丙酮提取液主要分布在94、76、66、50、43、38、18 kD;裂解液提取液主要分布在200、105、94、76、43、38、18 kD。加热前、后蟹蛋白过敏原组分差别不大。结论:裂解液提取法提取的中华绒螯蟹过敏原更适于制备测定特异性IgE的抗原。加热不影响蟹过敏原组分和与特异性IgE的结合活性。     

牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。     

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素（EPO）的EUSA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法，并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释，150μL/孔滴加到96孔板，用以包被。以正常人血清和临床血清为标本，用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1：600，最佳抗原工作浓度为1：100，酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为：y=0．017x＋0．3002，r=0．9710，P〈0．05。灵敏度为0．46U／L，高、低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044％、7．964％，批间变异分别为1．379％、12．915％。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO，其敏感性、特异性、准确度均良好，为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据．     

促红细胞生成素ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

[目的]建立一种检测血清促红细胞生成素（EPO）的双抗体夹心ELISA方法，建立试剂盒，并且对其临床检测方法学进行研究。[方法]EPO抗体包被96孔板，以正常人血清和临床血清为标本，用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。[结果]最佳包被抗体浓度为1：600，最佳抗原工作浓度为1：100，酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为Y=0．017x＋0．3002，相关系数r=0．9710。灵敏度为0．46mU／ml，高低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％，批内变异为3．04％～7．96％，批间变异则为1．38％～12．92％。[结论]该方法建立了一种定量检测EPO的ELISA试验，敏感性、特异性、准确度均良好，提供了临床上快速、准确、方便检测EPO的工具。     

轮叶婆婆纳的抗肿瘤活性二萜成分研究

目的 研究轮叶婆婆纳Veronica sibirica中二萜类成分及其体外抗肿瘤作用.方法 应用现代提取分离和波谱分析方法对轮叶婆婆纳进行提取、分离、纯化和结构鉴定;以SK-N-SH和BEL-7402肿瘤细胞株为研究对象,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从轮叶婆婆纳中分离鉴定了一个新二萜类化合物,鉴定为1,2-去氢隐丹参酮(Ⅰ);其他7个已知化合物:轮叶婆婆纳对醌A(Ⅱ)、轮叶婆婆纳对醌B(Ⅲ)、隐丹参酮(Ⅳ)、弥罗松酚(Ⅴ)、二氢丹参酮Ⅰ(Ⅵ)、丹参酮Ⅰ(Ⅶ)、丹参酮Ⅱa(Ⅷ).体外抗肿瘤活性实验结果显示化合物Ⅱ,Ⅳ～Ⅷ对SK-N-SH肿瘤细胞生长的抑制作用较强,化合物Ⅱ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅷ对BEL-7402肿瘤细胞生长的抑制作用较强.结论 轮叶婆婆纳中的二萜类化合物对不同种肿瘤细胞具有细胞毒选择性,有一定的抗癌活性.     

天津地区1670例皮肤病患儿过敏原流行特征分析

目的 分析天津地区湿疹、荨麻疹患儿过敏原特异性免疫球蛋白E(sIgE)定量检测结果,为临床诊疗提供参考.方法 采用酶联免疫捕获法对2019年8月至2020年3月就诊于天津市儿童医院的1023例湿疹、647例荨麻疹患儿进行吸入及食物过敏原sIgE检测,并对检测结果进行统计分析.结果 1670例患儿检出过敏原sIgE阳性1254例,检出率为75.09％;检出食物过敏原sIgE阳性1185例(70.96％),检出吸入过敏原sIgE阳性739例(44.25％).食物过敏原sIgE检出前3位由高到低依次为鸡蛋白/蛋黄(943例,56.47％)、牛奶(533例,31.92％)、小麦面粉(336例,20.12％),吸入过敏原sIgE检出前3位由高到低依次为屋尘(561例,33.59％)、交链孢霉(182例,10.90％)、粉尘螨(127例,7.60％).不同性别患儿过敏原sIgE检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);1～<4岁患儿鸡蛋白/蛋黄、屋尘、牛奶、小麦面粉sIgE检出率最高,4～6岁患儿交链孢霉sIgE检出率最高,>6岁患儿粉尘螨sIgE检出率最高.荨麻疹患儿屋尘sIgE检出率高于湿疹患儿,其余几种过敏原sIgE检出率与湿疹患儿比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 该研究结果在一定程度上反映了湿疹、荨麻疹患儿过敏原sIgE的流行特征,有助于疾病的诊断和防治.     

多重荧光定量PCR检测婴幼儿腹泻病毒感染及其临床应用

目的:建立一种能同时检测婴幼儿腹泻粪便中常见病毒的多重荧光定量 PCR技术。方法:根据GenBank上几种病毒基因组保守序列设计引物序列,建立多重荧光定量PCR方法,对所建立的多重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性及重复性进行验证;并以所建立的方法对150例婴幼儿病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果:所建立的多重荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性,灵敏性检测可达102拷贝/mL,检测不同病毒核酸浓度各自的检测 Ct 值标准差均较小,变异系数均低于1.0%,具有较好的重复性;检测150 份粪便标本,多重荧光定量 PCR 的检出率为36%,胶体金方法检出率为38.67%,两者比较差别无统计学意义（χ2= 6.91,P > 0.05）。多重荧光定量 PCR方法中轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒的检出率分别为12.67%、6.00%、13.33%和4.00%,测序结果与已知病毒株基因都具有高度同源性。结论:所建立的多重荧光定量PCR方法快速、特异、灵敏,可以作为临床病原诊断的一个重要工具且适用于流行病学调查研究。     

兔肺动脉内皮细胞DNA损伤检测方法的建立及初步应用

[目的]建立兔肺动脉内皮细胞单细胞电泳方法检测DNA的损伤并初步观察肺心病患者血清对兔肺动脉内皮细胞DNA的损伤作用。[方法]用胶原酶Ⅰ消化分离获得兔肺动脉内皮细胞(RPAECs)，将血管内皮细胞与含不同浓度肺心病患者和正常人血清的培养基共同孵育12h，收集细胞利用溶解液破坏细胞膜，再用高盐溶液将细胞DNA解链，然后对其进行琼脂糖凝胶电泳(AGE)。电泳后经溴乙啶染色并在荧光显微镜下观察彗星样的电泳形状，判断细胞DNA的损伤程度。[结果]高浓度的肺心病患者血清作用后的内皮细胞，可见彗星样电泳形状。[结论]高浓度肺心病患者血清对兔肺动脉内皮细胞的DNA有损伤。     

过敏原特异性IgE抗体实验室检测及其临床应用

摘要：过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测对过敏性疾病的诊断和治疗具有重要价值。从待检抗体角度分析，sIgE抗体检测分为sIgE抗体物质含量检测和sIgE抗体病理活性检测，前者采用免疫化学(血清学)方法，后者采用细胞生物学方法。血清学检测为临床实验室常用方法，涉及斑点-酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)、ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA)等标记免疫技术。从已知抗原角度分析，sIgE抗体检测分为混合组分诊断(MRD)和单一组分诊断(CRD)。CRD可获得sIgE抗体谱结果，为临床提供更丰富的诊断信息。无论采用何种标记免疫技术，sIgE抗体实验室检测已从定性分析发展到定量分析，且分析灵敏度不断提升，这将逐渐满足临床诊断的需求，提高过敏性疾病的诊断和治疗水平。