肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的生物信息学分析及其单克隆抗体的制备和鉴定

摘 要： 目的 生物信息学分析肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的结构,制备特异性的抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体。 方法 用ProtParam、SignalP、NPS@ 、和PSORT等软件对Cpn0797蛋白的理化参数、信号肽、二级结构、蛋白亚细胞定位进行分析;原核表达纯化GST-Cpn0797融合蛋白,以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和特异性。 结果 生物信息学分析表明Cpn0797蛋白二级结构以无规则卷曲为主;成功地建立了能稳定分泌抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体能特异性的识别Cpn0797内源性蛋白。结论 成功制备特异性的Cpn0797单克隆抗体,为进一步探究Cpn0797蛋白的生物学功能提供实验基础。     

临海市城乡居民健康档案信息化现状与分析

电子健康档案(Electronic health record,EHR)是人们在健康相关活动中直接形成的具有保存备用价值的电子化历史记录,是电子病历的高级形式,是涵盖社区居民基础健康档案以及预防免疫、就诊记录、健康检查记录、计划生育和慢性病管理等方面的健康档案信息.     

沙眼衣原体MIP蛋白的原核表达、纯化及免疫学特性鉴定

目的 采用pGEX-6p载体原核表达沙眼衣原体(Ct)巨噬细胞感染增强因子(MIP),进一步纯化后免疫小鼠,评价该蛋白作为Ct疫苗候选抗原的可行性。方法聚合酶链反应技术从Ct D型基因组扩增MIP编码基因,构建pGEX-6p-1/MIP重组质粒并转化大肠杆菌,IPTG诱导重组菌表达GST-MIP融合蛋白,PreScission蛋白酶切除GST标签后免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测MIP的免疫学特性。结果MIP编码基因正确插入pGEX-6p-1载体,核苷酸序列与GenBank登陆的Ct D型MIP基因完全一致;重组融合蛋白在E.coli中稳定高效表达,酶切后纯度达90％以上;MIP蛋白具有良好的免疫原性,诱导小鼠产生高滴度特异性IgG型抗体,亚型以IgG2a为主;MIP免疫组小鼠脾淋巴细胞受MIP蛋白刺激,分泌高水平IFN-γ。结论重组表达的Ct MIP 蛋白具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生高特异性的体液及细胞免疫应答,可进一步探讨其作为Ct亚单位疫苗的可行性。     

甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响

目的观察甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响,为进一步开发壳聚糖提供理论依据.方法用盐酸林可霉素复制肠道脱污染小鼠动物模型,将模型小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组灌服甲壳低聚糖600mg@kg-1@d-1,对照组灌服等体积蒸馏水.7天后分析肠道菌群.结果模型小鼠治疗组肠道菌群基本恢复正常,与对照组相比差异具有显著性意义(P＜0.05).结论甲壳低聚糖对小鼠肠道菌群失调具有一定的调整作用.     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测伤寒杆菌脂多糖O抗体的研究

我们试用ELISA 法检测了抗伤寒杆菌脂多糖O抗体。结果表明,与肥达氏试验相比,本法有较高的特异性,敏感性和重现性,具有快速、简便、经济和用血置少等优点。材料和方法1.既往伤寒病人(平均发病5～6月后,均分别经血和粪培养阳性及肥达氏试验效价增高而证实)血清109份,发病一周以内伤寒病人的血清3份,健康人血清43份,非伤寒发热病人血清6份。2.热酚——水萃取法提取伤寒杆菌的脂多糖抗原,751型分光光度计测提取液的蛋白质浓度。每毫升包被抗原溶液含蛋白质10~μg。3.ELISA 操作程序如前报道。结果和讨论1.ELISA 特异性:(1)用10μg/ml牛血清白蛋白代替伤寒杆菌脂多糖抗原包被反应板凹     

氨基糖苷类药物对副猪嗜血杆菌的流行折点

摘要：目的 副猪嗜血杆菌(HPS)严重危害养猪业，抗菌药滥用导致该菌耐药率升高，建立流行折点(epidemiology cutoff values, ECV)对副猪嗜血杆菌的防治具有重要意义。方法 目前美国临床和实验室标准协会(CLSI)和欧盟抗微生物药物敏感性检 测委员会(EUCAST)并没有建立关于副猪嗜血杆菌的敏感性ECV，为减少药物滥用和更好地精准用药，本研究在NCBI、知网等 网站上搜索大量文献，查找近10年来中国和欧洲不同地区和不同来源的、关于各种氨基糖苷类药物对副猪嗜血杆菌的最小抑菌 浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)数据。将这些MIC数据进行汇总，运用ECOFFinder软件进行统计分析，拟合出不同 氨基糖苷类药物对副猪嗜血杆菌MIC分布图。结果 分析并建立了95%置信区间下阿米卡星(中国)、安普霉素(中国)、庆大霉素 (中国)、卡那霉素(中国)、链霉素(中国)、奇霉素(中国)、庆大霉素(欧洲部分国家)、链霉素(欧洲部分国家)、奇霉素(欧洲部分国 家)、新霉素(欧洲部分国家)对副猪嗜血杆菌的敏感性ECV，分别为64、32、16、32、64、32、4、64、8和16 μg/mL。结论 为 临床合理用药，减少副猪嗜血杆菌的耐药性的发生，提升精准用药的可行性，缩短临床用药周期等一系列监测、防控、治疗工 作提供理论基础与支持。     

沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定

目的表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性。结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1∶1280以上。结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性。     

湖南衡阳地区呼吸道感染革兰阴性杆菌的菌群分布及耐药性分析

目的了解本院近2年呼吸道感染革兰阴性杆菌菌群分布及常见致病菌的耐药情况。方法收集本院2006年10月~2008年10月临床送检的5914份痰标本,采用API鉴定系统进行菌株鉴定及药敏试验。结果共分离出1386株革兰阴性杆菌,最常见的呼吸道革兰阴性杆菌是铜绿假单胞菌(31.0%),其次是鲍曼不动杆菌(14.2%)、大肠埃希菌(12.6%)、肺炎克雷伯菌(11.3%)、阴沟肠杆菌(8.4%)、产酸克雷伯菌(7.6%)与嗜麦芽寡养单胞菌(4.6%)。主要革兰阴性杆菌均对头孢哌酮/舒巴坦敏感,且除嗜麦芽寡养单胞菌外对亚胺培南和美罗培南也均敏感。各主要致病革兰阴性菌对替卡西林、替卡西林/克拉维酸、头孢他啶、环丙沙星、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦、哌拉西林、庆大霉素与妥布霉素均耐药。产酸克雷伯菌产ESBLs的菌株高达52.8%,大肠埃希菌为46.0%,肺炎克雷伯菌为38.5%,肠杆菌科中产ESBLs菌株对青霉素类和头孢类抗生素耐药率明显高于非产ESBLs菌株。产ESBLs和非产ESBLs肠杆菌科细菌均对替卡西林、头孢噻吩、复方磺胺甲唑与阿莫西林耐药,而对亚胺培南、美罗培南与头孢哌酮/舒巴坦均敏感。结论呼吸道分离的革兰阴性杆菌均存在严重耐药问题,及时监测病原菌变化及耐药趋势以指导临床用药至关重要。     

高效离子色谱法测定二氧化氯消毒剂中二氧化氯含量

目前开发的稳定性二氧化氯消毒剂中二氧化氯（ＣｌＯ２）以稳定的亚氯酸盐（ＣｌＯ２－）形式存在［１,２］。本文以阴离子色谱分离,电导检测可同时分析该消毒剂中ＣｌＯ２－、ＣｌＯ－、ＣｌＯ３－、Ｃｌ－离子,能有效排除现在常用的ＣｌＯ２含量测定方法的干扰,如碘...     

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFNγ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果小鼠接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后抗体最高滴度达1∶1024,培养上清液中IFNγ达(532.0±45.4)pg/mL;实验组小鼠脾淋巴细胞刺激指数为3.94±0.25,其抗原特异性反应明显高于对照组。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗能刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫。