四环素基因表达调控系统调控HSV-tk基因表达的单载体构建

目的 构建能够调控自杀基因表达的单载体四环素基因表达调控系统.方法 以真核表达载体pcDNA3.1为载体构建骨架,将两个四环素基因表达调控元件(TetO2)克隆到pcDNA3.1载体CMV启动子下游,构建成pcDNA3.1-TetO2载体;将单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)与核糖体进位位点(IRES)相连的基因片段克隆入pcDNA3.1-TetO2载体的多克隆酶切位点,构建成pcDNA3.1-TetO2-HSV-TK-IRES载体;将四环素调控子基因(TR)克隆至pcDNA3.1-TetO2-HSV-TK-IRES载体IRES下游,从而构建成pcDNA3.1-TetO2-HSV-TK-IRES-TR载体.利用酶切与测序鉴定克隆结果.结果 载体构建过程的酶切结果以及测序结果表明载体构建正确.结论 成功构建了能够调控自杀基因表达的单载体四环素基因表达调控系统,为调控自杀基因体外杀伤肿瘤奠定实验基础.     

微量营养素对1型糖尿病小鼠血淋巴细胞细胞因子的调控作用

目的　研究 1型糖尿病 (DM)的发生与细胞因子作用的关系及微量营养素对细胞免疫失衡的调节作用。方法　应用小剂量、多次注射链脲佐菌素的方法诱导 1型DM小鼠模型。分别通过饮食、饮水方法添加不同组合微量营养素硒、维生素E、铬、钒。应用流式细胞仪检测外周血表达CD4 、CD8、TNF α、IFN γ、IL 4、IL 1 0淋巴细胞数百分比。结果　 1型DM模型小鼠外周血表达TNF α淋巴细胞数升高 (P <0 .0 5) ,表达IL 4、IL 1 0淋巴细胞百分比低于正常对照组 (P <0 .0 5)。不同组合添加微量营养素各组外周血表达TNF α淋巴细胞百分比不同程度低于 1型DM模型组 ,IL 4、IL 1 0淋巴细胞百分比高于 1型DM模型组 (P均 <0 .0 5)。结论　微量营养素可调节 1型DM小鼠发病过程中细胞因子水平 ,干预 1型DM发生发展。     

拒绝流感大行动——动态篇：预防流感总动员

SARS与我们分别不久，流感却在我国一些地区小面积流行，目前浙江、广东、福建、江苏、天津等地都有关于流感的消息——     

环巴胺诱导大肠癌Caco-2细胞凋亡效应和线粒体蛋白质组学研究

目的:探讨环巴胺对大肠癌Caco-2细胞的促凋亡效应,在线粒体蛋白水平阐明其作用机制.方法:取对数生长期大肠癌Caco-2细胞分为环巴胺处理组及阴性对照组,以5、10、20和40 μmol·L-1环巴胺处理Caco-2细胞,分别应用MTS法及流式细胞术测定Caco-2细胞生长抑制率及凋亡率,采用nano LC-ESI-...     

HPLC法测定头孢曲松含量的不确定度评估

目的对高效液相色谱法(HPLC)测定头孢曲松含量的测量不确定度进行评估。方法采用HPLC法测定头孢曲松的含量,建立数学模型,分析不确定度来源。结果通过对各变量的分析,计算各变量的不确定度,最后计算出合成标准不确定度。结论本方法建立的数学模型合理、可靠。     

核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其在A549中的表达

目的 建立人核心蛋白聚糖(decorin,DCN) 真核表达载体,并在A549细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法 用PCR法扩增出DCN分子编码序列的cDNA全长,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建真核表达载体pcDNA3.1-decorin,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体;脂质体介导重组载体转染A549细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和Western印迹法检测其表达.结果 获得了约1 080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型DCN cDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中.RT-PCR方法可见转染组mRNA表达明显增多,免疫组化和Western印迹方法可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-decorin,建立了稳定转染DCN的A549细胞株.     

5种血浆游离DNA提取方法的比较

目的分别应用5种方法进行血浆游离DNA的提取,从而判定与筛选最佳的血浆cfDNA提取方法。方法采集19例健康人血浆标本,针对每一样本取350ml血浆分别应用经1次／2次酚-氯仿-异戊醇抽提法,经1次／2次酚-氯仿-异戊醇抽提配合微量DNA助沉剂法和介孔纳米磁珠法5种方法进行cfDNA提取,应用紫外分光法测定提取cfDNA的含量与纯度,应用实时荧光定量PCR方法以提取血浆cfDNA为模板进行扩增反应,以验证提取效果。结果应用5种方法从19例350ml血浆样本中提取的血浆cfDNA含量分别为（6971．43±1934．40）ng／ml、（2196．86±823．94）ng／ml、（12397．14±4197．37）ng／ml、（5568．29±1618．17）ng／ml和（7458．57±3706．83）ng／ml,A260／A280值分另0为0．93±0．07、1．09±0．12、1．15±0．05、1．16±0．12和0．89±0．19,RT-qPCR扩增成“功率为100％。结论经1次酚-氯仿-异戊醇配合微量DNA助沉剂法提取量大,纯度高,所提取的血浆cfDNA可以为RT-qPCR提供模板,进行后续实验。     

Se、VE、V、Cr对1型糖尿病小鼠脾脏细胞因子抗原表达的影响

目的 :　研究 1型糖尿病 (T1 DM)与脾脏淋巴细胞亚群及其表达细胞因子种类的关系及微量营养素拮抗 T1 DM作用。方法 :　应用链脲佐菌素 (STZ)小剂量 ,多次注射方法复制T1 DM小鼠模型 ,分别联合添加一定剂量的硒 (Se)、维生素 E(VE)、铬 (Cr)、钒 (V) ,应用流式细胞术检测脾脏 CD4、CD8、肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)、干扰素 - γ(IFN- γ)、白介素 - 4(IL- 4)、白介素 - 1 0(IL- 1 0 )阳性淋巴细胞百分比及活性氧产量。结果 :　T1 DM模型组小鼠脾脏 CD8阳性细胞百分比降低 ,活性氧产生量增加 ,联合补充 Se、VE、Cr、V明显提高了脾脏 CD8淋巴细胞数目 ,降低了脾组织活性氧含量和升高的血糖水平 ,但脾脏淋巴细胞表达细胞因子的种类各组间无统计学意义。结论 :　微量营养素分别通过抗氧化和免疫调节机制对 T1 DM时脾脏淋巴细胞抗原表达进行调控 ,对 T1 DM发生发展起一定程度的拮抗作用     

P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中的表达

目的:探讨P21/waf1/cip1在U937细胞分化中表达情况.方法:用佛波脂(PMA)诱导U937细胞向单核-巨噬细胞分化,经流式细胞术测定细胞P21/waf1/cip1基因表达及细胞周期的变化.用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化.结果:U937细胞向单核-巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁,呈现了P21/waf1/cip1高度表达,同时细胞周期停滞于G1和G2/M期,无细胞凋亡. 结论:P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中有高表达,并伴随细胞周期变化.     

抗氧化微量营养素对T1DM小鼠胰岛细胞保护作用的超微结构研究

目的探讨联合抗氧化微量营养素(antioxidant micronutrients,AM)对胰岛β细胞超微结构的保护作用。方法应用多低剂量链脲佐菌素法(multipe low dosage of streptozotocin,MLDS)方法制备T1DM(type 1 diabetes mellitus)小鼠模型,分别联合添加4种AM[硒(Se)+维生素E(VE)+钒(V)+铬(Cr)]和7种AM(Se+VE+V+Cr+VC+硫辛酸+烟酰胺)进行干预,观察胰岛β细胞超微结构的变化。结果联合补充AM使T1DM小鼠血糖明显降低;T1DM模型组胰岛β细胞及内分泌颗粒数量减少,内质网明显扩张囊泡变,部分线粒体发生肿胀变性;AM4、AM7组小鼠胰岛β细胞超微结构完好,胞浆内胰岛素分泌颗粒数量明显增多于T1DM模型组小鼠。结论联合AM对T1DM模型小鼠胰岛β细胞超微结构具有良好的保护作用。