地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450的诱导作用

目的 本实验通过用相同剂量地非三唑油溶液对大鼠进行不同天数的腹腔注射，观察地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450(CYP)的诱导作用。方法 (1)用CYPIA与CYPIIB的两种特征性最物乙氧基异吩恶唑与7-戊氧基异吩恶唑在经不同天数地非三唑处理的鼠肝微粒体中代谢，用紫外分光光度仪直接测定代谢物异吩恶唑的生成量。从而测定乙氧基异吩恶唑-脱甲基酶(EROD)与7-戊氧基异吩恶唑-脱烷基晦(PROD)的含量，用来表征微粒体中CYPIA与CYPIIB的活性。（2）用CYPIIIA的特征性底物地西泮与经不同天数地非三唑处理的鼠肝微粒体体外共孵育，用氯仿终止反应并提取剩余底物，用反相高效液相(RP-HPLC)内标法测定剩余底物浓度。结果 不同天数地非三唑处理的鼠肝微粒体中EROD的含量比空白组有明显的增加，而且与诱导天数有良好的相关性。而PROD的含量在地非三唑组与空白组之间无明显差异。地西泮在用不同天数地非三唑处理的鼠肝微粒体中则无明显代谢，其代谢程度与诱导的天数没有相关性。结论 地非三唑对CYPIA有诱导作用。     

人细胞色素P450 1A2的异源表达及代谢活性测定

目的 获得单一的具有活性的人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)重组酶,以进一步进行该酶参与的药物代谢研究。方法 以人肝组织提取的总RNA为模板,RT- PCR扩增全长的人类CYP1A2基因片段,插入转座载体pFastBac构建重组转座质粒pFastBac-CYP1A2,转化入DH10Bac 大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CYP1A2,以之转染草地夜蛾细胞(Sf9),与细胞色素氧化还原酶(CYPOR)进行共表达。利用蛋白质印迹分析鉴定其表达,并以非那西丁为底物,利用HPLC对其进行代谢活性测定。 结果 蛋白质印迹分析表明人CYP1A2蛋白在Sf9细胞中成功表达,且该重组酶对非那西丁的Km值为(82.04±11.39)μmol·L^-1(n=3),Vmax值为(1.78±0.26)nmol·min^-1·mg^-1蛋白(n=3),表观清除率Clint值为0.02 mL·min^-1·mg^-1蛋白。结论 利用杆状病毒/昆虫细胞系统,可获得具代谢活性的人CYP1A2重组酶,该酶可进一步用于其他底物的I相代谢研究。     

地非三唑在鼠肝微粒体中的体外代谢

目的　为了解地非三唑 (Dip)在不同预处理的鼠肝微粒体中主要受何种酶代谢影响 ,为其临床合理应用和进一步开发利用提供科学依据。方法　将Dip与 6种不同诱导剂〔苯巴比妥 (PB)、地塞米松(Dex)、β 萘黄酮 (BNF)、Dip、吡啶和空白对照〕诱导的鼠肝微粒体进行体外共孵育 ,用氯仿终止反应 ,以地西泮为内标 ,采用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法测定孵育后剩余的Dip的含量。结果　BNF诱导的鼠肝微粒体对Dip代谢具有强烈的催化活性 ,Dip诱导的微粒体的催化能力次之 ,PB诱导组也有一定的催化能力 ,其他几种诱导剂诱导的微粒体对Dip代谢能力与对照组无明显差别。测得Dip在BNF诱导的鼠肝微粒体中的Km 为 (6 0 .5± 1.3) μmol·L- 1,vm 为 (5 .6± 0 .4 )mmol·g- 1·min- 1。结论　由BNF诱导的鼠肝微粒体 (主要为细胞色素P4 5 0 1A)和PB诱导的鼠肝微粒体 (主要为细胞色素P4 5 0 2B)在Dip的体外代谢中可能起主导作用 ;Dip诱导的鼠肝微粒体对其自身的代谢也起了重要作用。     

兔血浆中地非三唑(DL111-IT)高效液相色谱荧光检测方法

目的　建立兔血浆中DL111 IT的高效液相色谱荧光检测法。方法　血浆样品和内标格列本脲经氯仿提取后 ,选用DiamonsilODS C18柱 (15 0mm× 4 . 6mm ,5 μm) ,乙腈 - 0 . 0 2 5mol·L-1磷酸氢二铵缓冲溶液 (磷酸调pH 5 .0 ) (6 0 .4 0 ,V/V)为流动相 ,流速 1 0mL·min-1,荧光检测 (λex=2 5 0nm ,λem=332nm)。结果　DL111 IT在浓度 1 .0 0～ 2 0. 0 0ng·mL-1范围内呈良好线性 ,r=0. 9996 ,n =5。高 (2 0 . 0 0ng·mL-1)、中 (10 . 0 0ng·mL-1)、低 (1 .0 0ng·mL-1) 3个质控样本平均提取回收率分别为85 . 3%± 1 .3% ,84 .9%± 2 . 7% ,85 . 8%± 1 .8% ,方法回收率分别为 99 .5 %± 0 . 4 % ,10 2 . 1%± 1. 8% ,10 .1 3%± 2 .4 % ;日内(n =5 )和日间 (n =5 )RSD分别低于 3 .0 %和 7. 0 %。血浆样品检测限为 0 3ng·mL-1(S/N =3) ,定量限为 1ng·mL-1(S/N =10 ,RSD <7 .0 % )。结论　本法准确、灵敏、操作简便 ,为DL111 IT药代动力学研究提供了方法学基础。     

反相高效液相色谱法测定鼠肝微粒体中依普黄酮及其在代谢研究中的应用

目的　建立鼠肝微粒体中依普黄酮的反相高效液相色谱测定法 ,以研究依普黄酮的体外代谢。方法　本法中依普黄酮与鼠肝微粒体共孵育之后用氯仿提取 ,采用地非三唑为内标 ,以Nova parkC18柱为分析柱 ,乙腈 0 .1%醋酸溶液 ( 6 0∶4 0 )为流动相 ,流速 1.0mL·min-1,紫外检测波长为 2 5 0nm。结果　依普黄酮在 1～ 10 0 μg·mL-1内线性关系良好 (r =0 .9998)。检测限为 0 .0 2 μg·mL-1(S/N≥ 3) ,定量限为 0 .1μg·mL-1(RSD <5 .0 % ,S/N =8,n =3)。方法回收率达 96 .90 %～ 112 .8% ,日内 ,日间RSD分别 <8.0 %和 <10 % (n =5 )。结论　此法简便 ,准确 ,可用于依普黄酮的体外代谢研究     

高效液相色谱法测定大鼠肌肉中普伐他汀的含量

目的：普伐他汀是一种ＨＭＧＣｏＡ还原酶的竞争性抑制剂,通过抑制胆固醇的合成降低血中胆固醇的含量。建立一种灵敏可靠的测定大鼠肌肉中普伐他汀含量的方法。方法：以固相提取技术从肌肉匀浆中提取富集普伐他汀,采用高效液相色谱法紫外检测测定。结果：最低检测限０．４ｎｇ,定量限５ｎｇ／ｇ肌肉,方法线性范围５～１００ｎｇ／ｇ肌肉,固相提取回收率５２％～６６％,方法精密度为６％～１８％。结论：建立了灵敏、准确测定大鼠肌肉中普伐他汀的方法,并测定了该药经灌胃后在肌肉组织中的含量。     

P450ⅢA在2,4,5—三氟苯胺代谢生成一氧化碳中起主导…

２，４，５－三氟苯胺（２，４，５－ＴＦＡ）与空气氧，ＮＡＤＰＨ及地塞米松（ＤＥＸ）预处理的大鼠肝微粒体共温育，可生成大量的一氧化碳（ＣＯ）。但是，未处理或β－萘黄酮预处理的大鼠肝微粒体却无上述能力。与ＤＥＸ相比，苯巴比妥（ＰＢ）诱导的鼠肝微粒体使２，４，５－ＴＦＡ生成ＣＯ的能力仅为前者的１／４。Ｐ４５０ⅢＡ是ＤＥＸ所诱导的最主要的Ｐ４５０亚族，亦能为ＰＢ所诱导，因而在Ｐ４５０ⅢＡ对２，４，５－ＴＦ     

培养学生研究创新能力的多元化教学模式在药物分析教学中的尝试

为培养学生的创新思维和研究能力,在药物分析课程教学中采用传统的课堂教学、新型的以问题为基础(PBL)的教学模式和个性化自主学习相结合的多样化教学方式,包括课堂教学、自学讨论、社会调查、自主实验、论文撰写等。培养了学生的独立工作能力、团队协作精神、创新思维和实验研究能力,体现了为学生全面发展提供优质和个性化服务的教学理念。     

自主性实验实践活动培养学生综合能力

本文介绍了药物分析课程教学中为加强大学生综合能力培养而特意开设的自主性实验和社会调查活动。这些活动的开展为大学生科研能力和人文素质的提高创造了良好的学习氛围。