抑制NGR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨抑制Nogo蛋白受体(NGR)对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用.方法 尾静脉注射1％链脲佐菌素50 mg/kg建立30只SD大鼠DM模型,分别向双侧眼球玻璃体腔内注射NGR小干扰RNA(siRNA)病毒10μl(A组,10只)、病毒稀释液10μl(B组,10只)和病毒阴性对照液10μl(C组,10只);另取10只正常SD大鼠(D组),同法注射病毒稀释液10μl.12周后,免疫组化法检测NGR在视网膜中的定位,Western blot检测NGR的表达,DNAladder检测各组细胞凋亡情况.结果 NGR主要表达于RGC.与D组相比,B、C组NGR表达明显上调(P＜0.01),A组表达无明显变化(P＞0.05).B、C组RGC呈现明显的DNA ladder带,而A、D组未见明显DNA ladder带.结论 抑制NGR的表达可减少DM的RGC凋亡.     

NgR-Rhoa-Rock信号通路在早期糖尿病大鼠RGC凋亡中的作用

目的： 研究NgR-Rhoa-Rock信号通路在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。

方法：健康SD大鼠,以50mg/kg体质量单次腹腔注射1%链脲佐菌素的方法处理,以血糖值大于16.7mmol/L定为糖尿病模型; 然后随机分成3组,每组10只。另取10只健康SD大鼠作对照组。再依次对4组大鼠进行双侧眼球玻璃体腔内注射NgR小干扰病毒10μL(siRNA组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(DM组)、NgR小干扰病毒阴性对照液10μL(siRNA空白组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(正常对照组),正常喂养。期间对血糖、体质量等一些生命指标进行观查、测量并记录。12wk后,行视网膜Western blot检测NgR、Rhoa的表达,HE染色、TUNEL染色。

结果：Western检测：与正常对照组相比,DM组和siRNA空白组中NgR、Rhoa表达明显增加(P<0.01),而siRNA组无明显变化(P>0.05); 与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组NgR、Rhoa表达明显下调。HE染色：与正常对照组相比,三组模型鼠均有不同程度节细胞排列紊乱、形态不规则、间距不一致; 与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组节细胞在排列顺序、外形大小等有一定程度改善。TUNEL染色：与正常对照组相比,三组模型鼠均有节细胞凋亡; 与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组凋亡细胞数量较少,细胞外形有明显改善。

结论：DM时大鼠视网膜NgR、Rhoa表达上调,抑制NgR-Rhoa-Rock可以改善糖尿病视网膜神经节细胞的凋亡。     

TORCH感染与不良妊娠关系的分析

目的比较正常妊娠和异常妊娠妇女血清TORCH感染情况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对3851例妊娠(包括3449例正常妊娠和402例异常妊娠)妇女进行TORCH-IgM抗体检测。结果 3449例正常妊娠孕妇血清弓形虫(TOX)、风疹病毒(RUV)及巨细胞病毒(CMV)IgM抗体阳性率分别为0.32%、0.20%、1.88%,总阳性率为2.41%;402例异常妊娠妇女TOX、RUV、CMVIgM抗体阳性率分别为3.48%、2.74%、9.20%,总阳性率为15.42%。异常妊娠妇女TOX、RUV、CMV的IgM阳性率以及TORCH感染总阳性率明显高于正常妊娠孕妇,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TORCH感染与不良妊娠密切相关,应重视TORCH感染的早期筛查和诊治。     

重组碱性成纤维细胞生长因子通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)的保护作用。方法　雄性SD大鼠40只，随机分成对照组、糖尿病组、rbFGF组、rbFGF+DAPT组(DAPT为Notch1通路的特异性拮抗剂)，每组10只。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，rbFGF组给予rbFGF 10 μL(200 U)玻璃体内注射给药，rbFGF+DAPT组在给予rbFGF基础上加用DAPT(10 μmol·L^-1)。注射12周后，HE染色检测RGC密度，免疫组织化学染色检测神经元再生相关蛋白GAP-43、Notch1蛋白表达，Western blot检测GAP-43、Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3相对表达量。结果　与对照组RGC密度(433.49±6.02)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(8.96±0.26)%、Notch1阳性率(45.04±0.46)%及Caspase-3 (27.91±0.63) %蛋白表达相比，糖尿病组RGC密度(328.35±6.43)mm^-2，Notch1荧光强度(31.66±0.40)%蛋白表达明显降低，GAP-43荧光强度(13.66±0.52)%、Caspase-3 (48.91±0.64)%蛋白表达明显增加(均为P<0.05)；而与糖尿病组相比，rbFGF组RGC密度(425.30±7.98)个·mm^-2，Notch1阳性率(41.76±0.62)% 及GAP-43荧光强度(33.05±0.37)%蛋白表达明显增加，Caspase-3 (28.86±0.71)%蛋白表达明显降低(均为P<0.05)；而rbFGF+DAPT组RGC密度(324.91±8.22)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(14.27±0.64)%、Notch1阳性率(30.40±0.82)%及Caspase-3 (47.63±0.68)%蛋白表达均无明显变化(均为P>0.05)。结论　rbFGF可上调糖尿病状态下视网膜GAP-43蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，进而提高RGC的存活，其机制可能与激活Notch1信号通路有关。     

尾静脉注射STZ制备1型糖尿病大鼠模型实验的技巧

目的探讨STZ尾静脉不同给药方法和补造模时不同给药剂量致大鼠糖尿病成模状况的差异。方法本实验通过尾静脉不同的给药方法（非盐水导入组、盐水导入组）以建立大鼠糖尿病模型。以及未成模的大鼠给予不同剂量的STZ补造模（全量组、2／3全量组）。观察给药后大鼠成模情况、一般状况及检测各组成模后3d、4W、8W血糖值的变化。结果盐水导入方法可以大幅度降低STZ尾静脉注射造模时的死亡率（6．52％）,并提高成模率（73．9％）。补造模时2／3剂量组死亡率降低（6．67％,P〈0．05）且成模后血糖各组间,各时间点无差异（P〉0．05）。结论盐水导入的尾静脉给药方法是注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的最佳途径,补造模时以2／3剂量为宜。     

复合导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的翻转静脉为内层、壳聚糖导管为外层组成复合神经导管,透明质酸钠凝胶为细胞外基质并加入神经生长因子,构成新型组织工程化人工神经,桥接大鼠坐骨神经缺损,观察其对神经再生的作用。方法取24只成年雄性SD大鼠随机分为4组,建立大鼠坐骨神经缺损10mm的动物模型,分别用复合导管（翻转静脉与壳聚糖）加神经生长因子,翻转静脉加神经生长因子,壳聚糖导管加神经生长因子和自体神经修复大鼠右后肢坐骨神经约10姗的缺损。术后12W进行形态学（光镜、透射电镜、免疫组织化学、轴突图像分析）和神经电生理学（运动神经传导速度、复合肌肉动作电位）检测。结果纳入大鼠24只,均进入结果分析。①术后12W时,对于各项形态学指标,A组与D组接近,差异无统计学意义;但A组优于B组、C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。②电生理指标：术后12W时,A组坐骨神经平均传导速度明显高于B组、C组,但低于D组,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组平均动作电位幅度与自体神经移植组接近,优于B组、C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。③术后12W时,A组腓肠肌湿重恢复率接近于D组,明显优于B组、C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论以翻转静脉为内层、壳聚糖导管为外层组成复合神经导管,透明质酸钠凝胶为细胞外基质并加入神经生长因子,构成新型组织工程化人工神经,为神经缺损修复创造良好微环境,可明显促进神经再生。     

糖尿病大鼠视网膜黏附连接蛋白表达的变化

目的:探讨链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病视网膜黏附连接VE-cadherin和β-catenin的表达。方法:SD大鼠50只,随机分为正常对照组(Con)、糖尿病组(DM)。腹腔注射STZ建立DM模型,2,5,8wk处死动物。用伊凡思蓝方法检测视网膜的渗透性;用免疫组织化学和Western blot方法检测各组大鼠视网膜VE-cadherin和β-catenin的表达情况。结果:造模后2,5,8wk大鼠视网膜血管渗透性增加。免疫组化分析证实DM大鼠视网膜VE-cadherin主要表达在视网膜血管上,β-catetin主要表达在视网膜外界膜、外核层、外网状层、内网状层和内界膜。Western blot分析证明随着DM视网膜病变的发生发展,视网膜VE-cadherin表达量显著减少,2,5,8wk组与Con组两两比较均有差异(P<0.05);而β-catetin表达量显著增加,2,5,8wk组与Con组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:STZ诱导的DM大鼠VE-cadherin表达量减少而β-catetin表达量显著增加,两者成反比。     

Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 探讨Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响及机制。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,分为对照组,糖尿病组,siNgR组,siRNA空白组,每组10只。siNgR组糖尿病大鼠玻璃体内给予Nogo受体反义核苷酸序列;siRNA空白组糖尿病大鼠玻璃体内注射阴性核苷酸序列。1个月后,免疫荧光组化检测Nogo受体与视网膜神经节细胞（RGC）标志物Brn3a的共存;以TUNEL染色观察RGC凋亡;试剂盒检测视网膜丙二醛（MDA）含量;Western blot检测视网膜Nogo受体及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达。结果 Nogo受体大量表达于视网膜RGC内,对照组、糖尿病组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为（3.68±0.47）、（8.07±1.24）、（7.54±1.53）及（5.12±0.62）μmol/g 蛋白。与对照组相比,糖尿病组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡明显,Nogo受体及caspase-3表达上调,MDA含量增加（P<0.05）。与糖尿病组相比siNgR组视网膜RGC凋亡减少、Nogo受体及caspase-3表达下调、MDA含量降低（P<0.05）。结论 Nogo受体表达上调参与了糖尿病视网膜RGC凋亡,其机制可能与Nogo受体上调caspase-3表达、诱发视网膜氧化应激有关。     

牛磺熊去氧胆酸对急性胰腺炎大鼠内质网应激蛋白的影响

摘要:目的 观察牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）对蛙皮素诱导的急性胰腺炎大鼠内质网应激相关蛋白GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12表达的影响,探讨其对急性胰腺炎保护作用的机制。方法 3月龄SD大鼠96只,随机分为NaCl对照组、TUDCA对照组、CER组、TUDCA治疗组,每组24只。于造模成功后的第0.5、1、2、4 h取胰腺组织,采用常规HE染色法观察各组大鼠胰腺组织学改变;应用免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12蛋白的表达情况。结果 CER组、TUDCA治疗组均出现炎症反应及凋亡形态学改变,而TUDCA治疗组反应较轻。诱导后各时间点CER组GRP78/BIP呈上升趋势;TUDCA治疗组较比CER组表达降低(P＜0.05),但仍高于NaCl对照组。CER组sXBP-1在诱导后1 h、2 h表达增加,与TUDCA治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。CER组、TUDCA治疗组pJNK的表达于05 h达到峰值,其后呈下降趋势,但仍显著高于NaCl对照组、TUDCA对照组（P＜0.05）,TUDCA治疗组pJNK水平较CER组降低,在时间点2 h、4 h的表达差异有统计学意义（P＜0.05)。CER组Caspase-12的表达增加,于2 h达到峰值。TUDCA治疗组与CER组比较,Caspase-12的表达降低,在时间点0.5 h、1 h、2 h差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 TUDCA通过下调GRP78/BIP、sXBP-1,抑制pJNK、Caspase-12表达,发挥其对大鼠急性胰腺炎的细胞保护潜能。     

WILLIS覆膜支架治疗颅内复杂动脉瘤的初步经验

目的 探讨WILLIS覆膜支架治疗颅内复杂动脉瘤的初步经验. 方法 搜集采用WILLIS覆膜支架治疗颅内复杂动脉瘤患者6例(其中血泡样动脉瘤2例,巨大动脉瘤3例,垂体瘤手术致假性动脉瘤1例,共6个动脉瘤),分析患者的临床资料和疗效.结果 6例患者共置入WILLIS覆膜支架6枚,均一次成功置入支架;4例一次球扩后支架贴壁良好封堵瘤颈,动脉瘤不显影,l例3次球扩后,造影动脉瘤不显影,l例4次球扩后造影动脉瘤仍淡淡显影,10 min后造影动脉瘤不显影.4例术后3个月血管造影随访,WILLIS覆膜支架治疗动脉瘤均无复发,载瘤动脉通畅,所有患者随访无再次蛛网膜下腔出血及血栓栓塞症状,预后良好.结论 WILLIS覆膜支架治疗颅内复杂动脉瘤疗效好,无需瘤腔内弹簧圈栓塞,但需严格掌握适应症,术中对动脉瘤血液动力学影响小及术后复发率低是其突出的优点,但仍需更长期的随访和大样本多中心研究.