核受体NR4A1在卵巢卵泡膜细胞内调节雄激素的生成

目的:孤儿核受体NR4A1是核受体超家族中的一员,其广泛分布于不同的细胞类型并参与多种生物学过程的调控。探讨在卵泡膜细胞中NR4A1对甾体激素生成酶的转录及雄激素生成的影响。方法:构建小鼠NR4A1重组腺病毒载体AdCMV-NR4A1及AdH1-NR4A1,重组病毒感染卵泡24 h后,蛋白质印迹(Western Blot)验证NR4A1在卵泡膜细胞中的超表达及干涉效果。实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测Nr4a1超表达及干涉后对雄激素生成酶(Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2)的转录调节,放射免疫法测定培养液中睾酮的浓度。结果:AdCMV-NR4A1感染卵泡膜细胞后NR4A1蛋白的表达水平显著升高。NR4A1在卵泡膜细胞内超表达后明显促进Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2的转录,增加睾酮合成。相反,AdH1-NR4A1感染卵泡膜细胞后,NR4A1蛋白的表达水平显著降低。NR4A1干涉后明显抑制Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2的表达,降低睾酮的合成。此外,在卵泡培养液中加入cAMP/PKA通路激动剂———福斯高林后,N...     

人类辅助生殖技术来源胎盘全基因组表达谱研究

目的:通过比较辅助生殖技术(ART)来源和自然妊娠来源胎盘全基因组表达谱的差异,研究ART技术对胎盘功能和胎儿发育的影响,借此评估ART子代的安全性.方法:胎盘组织取自因输卵管因素行体外受精-胚胎移植和自然妊娠足月产妇各3例.利用Affymetrix HG-U133 Plus 2.0基因芯片对2组胎盘组织进行芯片杂交分...     

对不孕不育症病因初筛临床路径的初步建立

目的设计、实践和推广一项实用、科学、合理的对不孕不育的病因进行初步筛查的临床方案和路径。方法在江苏省8个基层医疗单位的不孕门诊试点,对不孕不育的初诊夫妇进行精液常规检测、女性排卵监测、盆腔妇科检查和输卵管碘油造影的四步病因初筛检查。结果在江苏省8个市、区级医院和妇幼保健院所的不孕不育门诊按上述路径进行不孕不育夫妇的初筛,共6501对夫妇。女方平均年龄28.4岁,初筛平均费用为776.5元。向上级医院转诊的比例为8.8%。初筛路径导出的诊断分类,排卵因素占25.28%(其中持续无排卵占94.71%,卵巢功能减退占5.29%);盆腔因素占48.73%(其中输卵管因素占81.12%,子宫内膜异位症占16.9%,子宫畸形占1.99%);男性因素占16.11%(其中无精症占8.89%,少弱畸精子症占87.84%,性功能障碍占3.27%);不明原因占9.88%。结论我们的初步研究证明这个不孕不育病因初筛方案是一个切实可行、经济科学的临床路径。初步的使用结果表明,获得的关于不孕不育的病因构成数据是可靠、可信、合理的。     

激活素-抑制素-卵泡抑素系统与子宫内膜异位症所致排卵障碍的关系

激活素、抑制素和卵泡抑素是细胞转化生长因子口超家族的成员,可以通过多方面多层次调控卵泡的生长发育,其既能负反馈调节下丘脑-垂体-卵巢轴,又能参与卵巢内局部信号微调节。排卵障碍指不能产生正常的卵子,是女性不育的第二位原因。子宫内膜异位症患者因卵泡发育微环境改变可导致排卵障碍。本综述通过对激活素-抑制素-卵泡抑素与卵泡发育及在子宫内膜异位症患者体内的变化情况,探讨该系统与子宫内膜异位症患者所致排卵障碍的关系。     

辅助生殖技术与妊娠风险

辅助生殖技术（ART）日渐成熟,并在世界范围内得到广泛的应用。世界上通过ART诞生的婴儿已超过200万;在发达国家,每出生100个婴儿,就有1个应用了ART技术;而在欧洲和北美,该比例甚至达到了1％～3％“。随着“ART人群”的增多,ART安全性引起更多关注。本文现就辅助生殖技术与妊娠风险做一综述。     

单卵患者体外受精与卵胞浆内单精子注射授精方式的比较

目的探讨仅获得一枚卵子的患者行体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）治疗后受精率及妊娠率的差别。方法通过对本中心133个仅获得一枚卵的IVF治疗周期临床指标的分析,调查IVF与ICSI不同授精方式处理后受精率和妊娠率的差别。结果76个获得一枚卵IVF周期与57个获得一枚卵ICSI周期受精率和妊娠率均无统计学差异（73．7％vs82．5％,P〉0．05;10．5％vs14．0％,P〉0．05）;其中〈38岁组受精率和妊娠率分别为（73．9％vs83．3％,13．0%vs23．3％）,〉38岁组受精率和妊娠率分别为（73．3％vs81．5％,6．7％vs3．7％）,均无统计学差异（P〉0．05）。结论对于仅获得一枚卵子进行IVF或ICSI授精方式,其受精率及妊娠率没有统计学差异。     

高雄激素对性成熟前小鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高浓度雄激素对性成熟前小鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其机制,为研究多囊卵巢综合征(PCOS)病理生理机制积累更多的实验资料.方法 体外培养21 d 龄小鼠卵巢颗粒 细胞,用不同浓度的睾酮(10 -5,10 -6,10 -8 mol/L)作用24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,流式 细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Realtime PCR 检测Caspase-3/9、Bcl-2、Bax 等凋亡因子的变化.结果 10 -5 mol/L睾酮显著增加颗粒细胞的细胞活力;10 -5 mol/L 睾酮作用48 h,细胞周期由G1 期进入S 期,细胞早期凋亡率减少1.36%,Caspase-3 活性降低,Caspase-3/9、Bcl-2、Bax mRNA 水平表达均下降.结论高浓度雄激素增加性成熟前的卵巢颗粒细胞的细胞活力,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用可能 通过抑制线粒体通路相关的凋亡因子的表达.本研究提示,性成熟前的高雄激素作用,可能是导致青春期 PCOS发生的原因之一.     

辅助生殖技术与妊娠风险

辅助生殖技术（ART）日渐成熟，并在世界范围内得到广泛的应用。世界上通过ART诞生的婴儿已超过200万；在发达国家，每出生100个婴儿，就有1个应用了ART技术；而在欧洲和北美，该比例甚至达到了1％～3％“。随着“ART人群”的增多，ART安全性引起更多关注。本文现就辅助生殖技术与妊娠风险做一综述。     

白细胞介素1与子宫内膜异位症发生机制

细胞因子在子宫内膜异位症(EMs)的发生、发展中起着重要的作用,白细胞介素1(IL-1)系统在细胞因子网络中占有重要地位,通过调节其他细胞因子和甾体激素的合成与分泌,对病灶部位的炎症反应和逆流到腹腔的内膜细胞的黏附、侵袭和血管形成过程发挥重要的调节作用.深入研究IL-1系统的调节机制将为寻求新的治疗方法提供思路.     

人NR4A1基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

目的:克隆人NR4A1基因,构建其重组腺病毒载体。方法:用RT-PCR的方法从人卵巢组织中扩增NR4A1基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdtrack-NR4A1。PmeI酶切pAdtrack-NR4A1,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-NR4A1转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacI酶切线性化重组质粒AdCMV-NR4A1后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。通过GFP报告基因观察重组病毒的产生。PCR、Western blot检测NR4A1基因的表达。结果:用RT-PCR方法,从人卵巢组织中扩增出1797bp的cDNA,测序证实为人NR4A1基因。构建了NR4A1基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论:成功地克隆了人NR4A1基因,并构建其重组腺病毒载体,为进一步研究NR4A1基因在相关疾病中的作用奠定了基础。