巢式多聚酶链反应在诊断乙型重型肝炎中的意义

重型乙型病毒性肝炎的病例,血清病毒水平极低,以至于在部分病例即使以极灵敏的聚合酶链反应也难以检测出来。巢式多聚酶链反应可检测出低至1—10个模板DNA的水平,我们应用此方法检测了12例重症肝炎病人血清乙肝病毒DNA。结果:以C_1、C_3引物一次能检出HBVDNA者4例,其中有3例HBeAg阳性者全部被检出;经C_(12)、C_(16)内引物巢式扩增后,12份标本中全部检出HBVDNA。说明巢式多聚酶链反应在乙型重症肝炎的病原诊断中,具有重要意义。     

艾滋病二例

艾滋病二例王援朝李慧于红骆抗先例１患者男，４０岁，无业。因发热伴寒战２个月余，１９９５年６月１９日以“发热原因待查”入院。患者于１９９５年４月初开始无诱因发热，体温３８～４０℃，无明显规律。伴寒战、头痛、咳嗽，咳少量白痰。偶有尿痛，曾在当地医院就诊，...     

乙型,丙型和庚型肝炎：1995—1996年的述评

乙型、丙型和庚型肝炎：１９９５～１９９６年的述评５１０５１５广州第一军区大学南方医院骆抗先我国是多种病毒性肝炎的高流行区，本文评述有严重危害或潜在严重危害的几种肝炎及其相关问题。１乙型肝炎我国人群ＨＢｓＡｇ检出率约１０％，包括抗ＨＢｓ和抗ＨＢｃ的ＨＢ...     

乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建

目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具,采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,鉴定和测 序分析等技术构建目的载体。结果　成功构建了ＨＢＶ全基因ＣＰ ２０／２１个ｂｐ缺失（ｎｔ １７４８／１７４７－１７６７）和ＣＰ２０／２１个ｂｐ 缺失＋１８９６热点变异的重组真核质粒表达质粒,并经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ序列分析证实。结论　此重组真核表达质粒构建可为 体外进一步研究上述变异的生物学意义奠定基础。     

乙型肝炎病毒前C变异体的体外转录和翻译

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ第１７位和２９位密码子突变体对ｅ抗原合成和分泌的影响。方法用ＰＣＲ 方法扩增ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区,克隆后测序及进行序列分析。将ＨＢＶ前Ｃ区Ｔ１８６２／Ａ１８９９位点突变体亚克隆人表达 质粒 ｐＧＥＭＴ中,经体外翻译后,比较野毒株和变异株的表达产物。结果该前 Ｃ区突变株在体外仍能合成 ＨＢＶ ｅ前体 蛋白。结论前 Ｃ区 Ｔ１８６２／Ａ１８９９突变并不能阻断 ＨＢＶ ｅ抗原前体蛋白合成,ｅ抗原前体可能在分泌过程中受阻。     

乙型肝炎病毒S区蛋白肝癌细胞株的稳定表达

构建了乙肝病毒S区不同蛋白的重组真核表达质粒pcLS2、pcLS4,并转染肝癌细胞株HepG2。转染细胞经新霉素筛选后,获得稳定表达S区不同蛋白的细胞株。Westernblotting可分别检测到相对分子质量为39000的大蛋白及24000的主蛋白在pcLS2、pcLS4稳定转染的细胞中表达。免疫组化实验显示这些蛋白均主要呈细胞质分布。     

慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性Th细胞克隆的建立及初步分析

目的 了解Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎（CHB）外周血及肝组织中的分布情况。方法 采用有限稀释法,建立CHB患者外周血及肝组织HBcAg特异性Th细胞克隆,并对所获得细胞克隆进行分析。结果 发现自肝组织分离的HBcAg特异性T细胞克隆,92.5%为CD4+表型,以Th1为主;而来源于外周血的T细胞克隆主要以Th0 为主,并与HBeAg是否阳性无关。仅15% （6/40）的T细胞克隆呈现明显的HBcAg特异性淋巴细胞增殖反应。结论 在肝组织及外周血占主导地位的Th细胞极化群的不同,较高比例的Th1细胞在肝组织炎症局部的聚集,提示在HBV的免疫发病机制中,Th1细胞可能起重要作用。     

e抗原阴性重症乙型肝炎患者HBV前C区热点变异研究

目的　研究ＨＢＶ信号肽区热点变异与重症乙型肝炎发生及转归的关系。方法　采用错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限 制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析方法检测６８例ＨＢｅＡｇ阴性的重症乙型肝炎病人（其中急性重肝６例、亚急性重肝３８ 例、慢性重肝２４例）及４４例慢性乙型肝炎患者的Ｔ１８６２、Ａ１８９６变异情况。结果　急性重肝的Ａ１８９６、Ｔ１８６２变异分别 为６６．７％（４／６）、０（０／６）;亚急性重肝４２．１％（１６／３８）、１５．８％（６／３８）;慢性重肝 ２５．０％（６／２４）、１６．７％（４／２４）;慢性肝炎 ４５．５％（２０／４４）、２．３％（１／４４）。重症乙型肝炎组与慢性肝炎组比较Ｔ１８６２变异率有显著差异（Ｐ＜０．０１）,Ａ１８９６变异率无显 著差异（Ｐ>０．０５）。结论　提示Ｔ１８６２变异与乙型肝炎的重症化密切相关。而Ａ１８９６变异与乙型肝炎重症化进程是否有 关还不能确定。     

表达CD95L的HepG2细胞自分泌和旁分泌的细胞毒效应

背景和目的清除感染ＨＢＶ的肝细胞主要由免疫细胞经ＣＤ９５途径,我们发现乙型肝炎时肝细胞可表达细胞毒效应分子ＣＤ９５Ｌ,为阐明其效应机制。方法ＨｅｐＧ２细胞诱导表达ＣＤ９５Ｌ,与ＨｅｐＧ２．２．１５细胞共培养;或以其培养上清液加于另一份未经诱导的ＨｅｐＧ２细胞中,以流式细胞仪检测后者的凋亡率;又以单个ＨｅｐＧ２细胞培养试验其自体凋亡。结果表达Ｃｈ９５Ｌ的ＨｅｐＧ２细胞杀伤表达ＣＤ９５的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞,２４ｈ凋亡１６．５％,４８ｈ４３．０％;培养上清液引起的凋亡２４ｈ３８．７％,４８ｈ７３．３％,单个ＨｅｐＧ２细胞经诱导后的自杀率２４ｈ４３．８％,均高于对照。结论ＨｅｐＧ２细胞以其ＣＤ９５Ｌ的膜性或可溶性分子,经自分泌或旁分泌发生“自杀”或“同胞相杀”。