粗壮女贞提取物抗甲型流感病毒的作用及机制初探

目的 探讨粗壮女贞提取物体外不同作用方式下抗甲型流感病毒的作用及机制。方法 以狗肾上皮（Madin-Darby Canine Kidney,MDCK）细胞建立甲型H1N1流感病毒感染模型,采用粗壮女贞提取物对MDCK细胞最大无毒浓度（0.8mg/ml）进行实验,CCK-8法测定提取物预防式、治疗式和共同式干预下MDCK细胞存活率;荧光定量PCR法、间接免疫荧光法检测预防式干预下细胞内病毒核蛋白（nucleoprotein, NP）基因表达、蛋白定位;荧光法检测病毒神经氨酸酶（neuraminidase, NA）荧光强度;ELISA法测定细胞内炎症因子IL-6、IL-8、IFN-γ、IP-10表达水平。结果 与病毒对照组相比,治疗式、共同式干预下实验组细胞存活率差异无统计学意义（ q =2.658, P >0.05; Z =1.547, P >0.05）;预防式干预下,实验组中细胞存活率上升（ Z = 4.195, P <0.001）,病毒NP多定位于细胞核内,且基因表达下降（ Z =-2.662, P< 0.05）;NA活性降低（ Z =-2.405, P< 0.05）;IL-6（ Z =-2.772, P <0.05）、IL-8（ q =8.493, P <0.001）和IFN-γ（ Z =-2.863, P <0.05）蛋白表达量下降。结论 预防式干预下粗壮女贞提取物具有抗甲型H1N1流感病毒作用,其机制可能与干扰病毒NP功能、抑制NA活性以及减轻炎症反应有关。     

市售川产水豆豉分离株中高产蛋白酶与β-葡萄糖苷酶菌株的菌属鉴定与产酶能力评价

目的 筛选并鉴定72株川产水豆豉分离株中高产蛋白酶及β-葡萄糖苷酶的菌株,为深入研究水豆豉的营养价值及开发其发酵菌株提供实验依据。 方法 采用酪蛋白法和对硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(pNPG)法分别测定菌株产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶的能力,选出优势菌株,通过形态学、生化特征、16S rRNA和基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。绘制菌株生长曲线和产酶曲线并测得其遗传稳定性。 结果 选择产蛋白酶能力前10名菌株中β-葡萄糖苷酶活力最高者(0.084 U/L)作为优势菌株,表型及分子生物学法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株生长曲线、产酶曲线符合枯草芽孢杆菌特性,遗传稳定性结果显示其产酶能力能稳定遗传至第9代并于第10代开始下降。 结论 从72株川产水豆豉分离株中筛选出的高产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌。     

根除治疗失败患者幽门螺杆菌的耐药特性及毒力基因研究

目的 研究根除治疗失败患者幽门螺杆菌（Helicobater pylori,Hp）的耐药表型、耐药基因和毒力基因,为补救治疗提供参考依据。方法 采集根除治疗失败患者胃黏膜组织分离培养Hp,药敏实验检测分离菌株对甲硝唑（metronidazole, MTZ）、克拉霉素（clarithromycin, CLA）、左氧氟沙星（levofloxacin, LEV）、阿莫西林（amoxicillin, AMX）、四环素（tetracycline, TET）和呋喃唑酮（furazolidone, FZ）的耐药情况,PCR扩增CLA、LEV耐药基因23S r RNA、gyr A及毒力基因cag A、vac A、ice A、oip A,进一步探究耐药表型与耐药及毒力基因的关系。结果 从58例患者中分离获得40株Hp(69.0%),其对MTZ、CLA、LEV、AMX、TET、FZ的耐药率分别为100.0%、82.5%、72.5%、0%、0%、0%。23S r RNA、gyr A基因最常见的突变位点分别为T2182C(78.6%)和N87K(32.0%),并在CLA耐菌株中新发现了C2165T和A2219...     

肠道菌群与粪便性状关系初探

[目的]初步探讨肠道菌群与粪便性状之间的关系。[方法]取受试者的粪便,将其分级后培养,计数粪便中大肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌和乳杆菌的菌落数,比较不同级别的粪便中各细菌数量及所占比例有无统计学差异。[结果]I级与III级、II级与III级粪便的所有指标均无统计学差异(P﹥0.05);I级与II级比较,双歧杆菌、6种菌的总菌落数、厌氧菌、益生菌、硬壁菌门/总菌数、硬壁菌门/非硬壁菌门菌、产气荚膜梭菌/总菌落、拟杆菌/总菌落均有统计学差异(P﹤0.05)。[结论]肠道细菌与粪便性状之间存在一定关系,粪便性状在一定程度上可以反映人体肠道菌群数量的多少。     

德阳市MSM人群HIV、HCV和梅毒感染现状及性行为特征研究

[目的]了解四川省德阳市男男性行为人群(MSM)的艾滋病病毒(HIV/AIDS)、丙型肝炎病毒(HCV)和梅毒螺旋体(梅毒)感染状况及性行为特征。[方法]2010年4～8月,对德阳市251名MSM进行问卷调查及血液样品收集,分别用联免疫吸附试验、蛋白印迹实验、快速血浆反应素环状卡片试验检测HIV、HCV梅毒感染情况。[结果]被调查对象中,HIV,HCV和梅毒的阳性率分别为16.33%(41/251),0.8%(2/251),14.34%(36/251);HIV和梅毒均阳性人员占4.4%(11/251),占感染HIV人数的25%(11/41);HCV和梅毒均阳性的人员占0.4%(1/251);距调查结束前6个月,与男性、女性均发生过性行为的MSM较多,在与女性发生性行为时安全套使用率为76.08%(35/46),低于其同男性发生性行为时安全套使用率91.3%(42/46)(χ2=3.903,P﹤0.05)。[结论]该市MSM人群3种病原体感染不容忽视,其高危性行为普遍存在,需要进一步加强艾滋病/性病宣传教育,预防二代传染。     

自贡市2007～2010年感染性腹泻沙门菌监测结果分析

目的 了解自贡市感染性腹泻沙门菌分布和流行情况、沙门菌菌型分布、耐药情况,为制定预防措施和临床治疗提供科学依据.方法 采集辖区内感染性腹泻患者的粪便样本,依据GB/4789.4进行分离鉴定和血清分型,采用WHO推荐的改良K-B纸片法对分离菌株进行12种抗生素敏感试验.结果 2007～2010年自贡市感染性腹泻样本1 084份中检出沙门菌23株,检出率为2.12％; 23株沙门菌中B群(73.91％)最多,排列前3位的血清型依次为鼠伤寒沙门菌(52.17％)、肠炎沙门菌(13.04％)和德尔卑沙门菌(13.04％); 23株沙门菌对磺胺(65.22％)、氨苄西林(39.13％)和萘啶酸(39.1％)、链霉素(34.78％)耐药性较大,对链霉素和磺胺的中介率较高,分别为39.13％和26.08％,对头孢他啶、环丙沙星、头孢噻肟、头孢吡肟和甲氧苄啶较敏感;有19株(82.61％)沙门菌具有耐药性,其中15株(65.22％)耐3种以上抗生素.结论 自贡市感染性腹泻沙门菌血清分布呈多态性,各血清型沙门菌均有不同程度的耐药及多重耐药.加强对沙门菌的综合监测,有利于指导沙门菌病的防治,提高对疫情的应急能力.     

592例呼吸道感染住院患儿呼吸道合胞病毒感染研究

目的 对592例呼吸道感染住院儿童进行呼吸道合胞病毒(HRSV)感染监测及亚型鉴定,探讨其流行规律.方法 于2010年3月至2011年2月间采集四川大学妇女儿童医院因呼吸道感染住院儿童的鼻咽抽吸物,使用RT-PCR方法检测HRSV及鉴定亚型,收集病历资料进行统计分析.结果 592份呼吸道鼻咽抽吸物检出HRSV感染145份(24.5％),其中A亚型107份(73.8％),B亚型38份(26.2％).HRSV感染高峰季节在冬季,患儿年龄多为2岁以内,临床诊断以肺炎和支气管炎为主;多因素非条件Logistic回归分析表明年龄、季节和潜在基础性疾病对病毒感染有影响,年龄2岁以下、感染季节冬季和潜在基础性疾病是HRSV感染的危险因素.结论 HRSV是2010～2011年四川婴幼儿呼吸道感染的主要病原之一,A亚型毒株在此流行期占优势地位.四川HRSV感染监测结果为全国HRSV流行病学研究积累了资料.     

沙门菌REP-PCR分子分型技术的优化及其在耐药菌株中的应用

目的优化沙门菌REP-PCR分子分型技术,并在沙门菌耐药菌株分型研究中应用,为构建沙门菌同源性追踪体系提供数据。方法以肠炎沙门菌510041基因组DNA为模板,根据参考文献确定REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列。对反应体系模板量、Mg2+浓度和引物浓度的优化,采用对优化项目设置梯度,其它条件不变的方法进行。以优化的REP-PCR法分析24株沙门菌流行耐药株REP-PCR指纹图谱。根据指纹图谱条带对菌株进行分型,并将分型结果与菌株耐药谱分型结果作比较。结果PCR反应体系DNA模板量100ng/25μl,Mg2+浓度2.0mmol/L,上下游引物浓度各0.4μmol/L时,指纹图谱条带最清晰、明亮;不同血清群和血清型沙门菌株间REP-PCR指纹图谱差异较大,可在0.5kb到2.5kb范围内出现2至6条条带;24株沙门菌流行耐药株用该法可分为15型,根据耐药谱可分为7型。结论建立了优化的沙门菌REP-PCR分子分型技术;REP-PCR指纹图谱分型比耐药谱分型更加敏感。     

中药复方对早期糖尿病肾病大鼠血糖及肾脏糖代谢的影响

目的研究中药复方对早期糖尿病肾病大鼠血糖及肾脏糖代谢的影响。方法 95只SD雄性大鼠,随机选取10只大鼠设置为正常对照组,其余85只大鼠通过腹腔注射STZ,喂以高脂高糖饲料进行造模。模型鼠随机分为阳性对照组(50 mg/kg·bw,盐酸二甲双胍)、模型对照组(蒸馏水)、低剂量组(0.83 g/kg·bw,中药复方)、中剂量组(1.67 g/kg·bw,中药复方)、高剂量组(3.33 g/kg·bw,中药复方)。灌胃30 d后,采集血液和肾脏标本,采用自动生化分析仪检测每组大鼠Glu、Hb A1c含量,酶联免疫吸附法和化学法分别测定大鼠肾组织中AR和Na~+-K~+-ATP表达水平。结果低、中和高剂量组Glu差值高于模型对照组(均P0.01);低剂量组Hba1c水平低于模型对照组(P0.01);中剂量和高剂量组AR活性低于模型对照组(均P0.05);各剂量组大鼠肾脏组织中Na~+-K~+-ATP水平差异无统计学意义(均P0.05)。结论该中药复方可降低早期糖尿病肾病大鼠Glu和Hb Alc水平,同时通过减少AR的表达进而抑制多元醇通路来减缓DN的发展。     

多重PCR检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7方法的研究

[目的]建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的多重PCR方法。[方法]探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性,根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157︰H7rfbE基因筛选设计新引物,优化反应条件,测定方法灵敏度和特异性。8h短时增菌后,对24份模拟粪便样品进行检测。[结果]已报道的多重PCR体系不适用于粪便中3种目的菌的检测;新建立的体系适用于粪便样品的检测,能在12h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌,该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的灵敏度分别为:8.5cfu/10ml增菌液,27cfu/10ml增菌液,5cfu/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。[结论]成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的多重PCR检测方法,该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查,为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。