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21.
一种简单快速的cDNA文库构建方法 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立一种以LD-PCR(long-distance-PCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法.方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶M-MLV的作用下合成cDNA第一链,进而利用末端转移酶在合成的cDNA第一链的3′末端引入poly-dC尾;以含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16和含Hind Ⅲ酶切位点的Oligo(dG)10为引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,通过T4 DNA连接酶连接到经相同双酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库,对文库的容量、重组率以及多样性进行分析.结果:通过本方法构建的cDNA文库容量约为5.84×105个/μg ds-cDNA,重组率为96.7%;对随机提取的30个克隆质粒的插入序列进行分析,共获得25个不同的cDNA序列,且未见重复序列.结论:本法构建的cDNA质粒文库具有快速、简单的特点,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析. 相似文献
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目的 研究肺表面活性物质蛋白B(SP-B)基因1580位点与内蒙古地区汉族新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选择100例汉族NRDS患儿(病例组)与100例汉族正常新生儿(对照组)作为研究对象,应用PCR基因分析技术检测SP-B 1580位点基因多态性,分析多态性与NRDS的关系.结果 内蒙古地区汉族SP-B 1580位点基因型均可检出3种基因型:即TT、CT及CC型.汉族NRDS组此3种基因型频率分别为:9.0%、27.0%和64.0%,T等位基因频率为19.5%,C等位基因频率为80.5%.汉族正常对照组3种基因型分别为13.0%、40.0%和47.0%,T等位基因频率为33.0%,C等位基因频率为67.0%.汉族NRDS组SP-B 1580位点基因型以C等位基因分布频率显著增高,关于SP-B 1580位点基因多态性汉族NRDS组与汉族正常对照组相比有统计学差异(x2=5.499,P=0.019).结论 内蒙古汉族新生儿SP-B基因型及等位基因频率在不同性别、出生体质量、胎龄、生产方式等无明显关联;SP-B 1580C等位基因可能是内蒙古地区汉族新生儿患RDS的易感基因之一. 相似文献
23.
《中药制剂分析》教学模式的改革 总被引:1,自引:0,他引:1
中药制剂分析作为中药类专业的一门主干专业课,实践性强,结合实际紧密,因此更新学科知识、改革教学模式已势在必行。本文以坚持实用、创新为原则,从教学理念、教学方法及试验教学三个方面进行探索与改革,旨在提高学生的学习能力、实践能力和创新能力。 相似文献
24.
目的构建具有代表性的小儿骨科护理质量敏感指标,为医院小儿骨科护理质量评价与监测提供依据。方法 2023年4—7月, 以结构-过程-结果三维质量结构模式为理论框架, 通过检索国内外文献, 拟订条目池, 通过2轮德尔菲法专家函询, 最后采用层次分析法确定各层次指标及其权重。结果 2轮函询问卷的有效回收率均为100%(20/20);专家的权威系数分别为0.87和0.88;变异系数分别为0.00~0.27和0.00~0.24。2轮函询二、三级指标的Kendall协调系数分别为0.140、0.166和0.192、0.161(均P<0.05)。最终构建的小儿骨科护理质量评价指标体系包括3项一级指标、21项二级指标、83项三级指标。一级指标中, 过程质量指标权重最大为0.493 4, 其次为结果质量指标, 权重为0.310 8, 结构质量指标权重最小, 为0.195 8。在二级指标中, 肢体血循环评估标准的组合权重最大, 为0.099 8。结论本研究构建的小儿骨科护理质量评价指标体系涵盖关键内容, 可操作性更强, 能更好地指导护理干预和质量控制。 相似文献
25.
目的:研究肺表面活性物质蛋白( surfactant protein,SP)-C基因多态性,尤以外显子4(T138N)、5(S186N)位点为重与内蒙古地区蒙古族新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)的关系。方法采用前瞻性研究方法,选择51例NRDS患儿(病例组)与51例正常新生儿(对照组)作为研究对象,应用PCR基因分析技术检测候选基因SP-C外显子4和5有无突变现象,并检测外显子4(T138N)、5(S186N)位点基因多态性,分析多态性与NRDS的关系。结果 SP-C外显子4和5未发现基因突变现象。在内蒙古地区蒙古族,SP-C外显子4(T138N)位点均可检出3种基因型:即AA、AC及CC型,SP-C外显子4(T138N)位点基因多态性病例组与对照组相比差异无统计学意义(χ2=0.454,P=0.797)。外显子5(S186N)位点可检出3种基因型:即AA、AG及GG型,SP-C外显子5(S186N)位点基因多态性病例组与对照组相比差异无统计学意义(χ2=0.493,P=0.782)。结论内蒙古地区蒙古族新生儿SP-C基因型及等位基因频率与性别、出生体重、胎龄、生产方式等无明显关联。内蒙古地区蒙古族NRDS患儿的SP-C外显子4和5未发现基因突变现象。 SP-C基因外显子4(T138N)、外显子5(S186N)位点基因多态性未发现与内蒙古地区蒙古族NRDS患儿有相关性。 相似文献
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目的:探讨爱阔尔达包茎扩张矫形器治疗小儿包茎的临床疗效。方法:选取从2010年10月至2013年1月间接受的226例包茎患儿,按治疗方法不同,分为爱阔尔达包茎扩张矫形器治疗法(治疗组,113例)和传统包皮口扩张法(对照组,113例),回顾性分析这两组患儿手术的时间、疼痛情况、包皮水肿及复发率。结果:治疗组113例患儿疼痛率5.3%,包皮水肿率19.5%,术后复发率8.8%,手术平均时间(1.50±0.50)min;对照组113例患儿疼痛率93.8%,包皮水肿85.8%,术后复发率28.3%,手术平均时间(2.99±0.93)min。两组患儿疗效的各项指标比较,治疗组较对照组的疼痛率、水肿率及复发率均有明显降低,两组相比较差异有显著性(P〈0.05);治疗组手术时间较对照组手术时间缩短,差异有显著性(P〈0.05);术后2个月治疗组治愈率和总满意度分别为100%和97.3%,均显著高于对照组(P〈0.05)。结论:一次性使用包茎扩张矫形器治疗包茎具有操作简便、温和持续扩张、并发症少、生物相容性好、疗效确切等特点,是治疗小儿包茎的又一良好的非手术治疗方法。 相似文献