TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的　本研究旨在明确TGF β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase 3及Caspase 8的关系。方法　通过 5 0 ?l4腹腔注射 ,用 8周时间诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF β1(5ng/ml)诱导凋亡 ,利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带 ,应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色 ,并在荧光显微镜下观察比较Caspase 3和Caspase 8在TGF β1诱导的凋亡中的作用。 结果　胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为 95 .2 %。正常肝细胞予以TGF β1处理后 ,应用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现 ,其凋亡率明显高于未处理组 ,分别为 5 8.76 %和 18.0 3% ,两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase 3和Caspase 8抑制剂阻止。 结论　硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF β1诱导的凋亡 ,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF β1通过Caspase 3和Cas pase 8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。     

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的本研究旨在明确TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-8的关系。方法通过50％CCl4腹腔注射，用8周时间诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF-β1(5ng／ml)诱导凋亡，利用1．5％的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带，应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色，并在荧光显微镜下观察比较Caspase-3和Caspase-8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95．2％。正常肝细胞予以TGF-β1处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF-β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现，其凋亡率明显高于未处理组，分别为58．76％和18．03％，两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase-3和Caspase-8抑制剂阻止。结论硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡，提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过Caspase-3和Caspase-8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。     

药物负荷试验诊断冠心病的临床评价

近年来,药物负荷试验已逐步成为冠心病诊断及其危险程度分级的重要检测手段.临床上常用的药物有潘生丁、腺苷、多巴酚丁胺等,与核影像图、超声心动图、核磁共振和心电图联合应用,可以准确地评价受损心肌的位置、范围和严重程度.     

海南省消除新生儿破伤风研究报告

目的 通过在海南省开展消除新生儿破伤风的研究，为我国制订消除新生儿破伤风策略与措施提供科学依据。方法 用回顾性和PPS调查方法调查NT死亡率、育龄妇女TT接种率、抗体水平；开展NT病例监测，对育龄妇女进行TT突击接种并与儿童常规免疫系统同时运行，开展广泛的社会动员。结果 三亚、琼中NT发病率逐年下降，2001年三亚已降到1.07%，琼中县达到0.92‰，育龄妇女TT3针累计接种率达到95.1%、97.8%，育龄妇女TAT水平血清学监测结果与接种率调查结果一致，育龄妇女TT 1针接种后可产生保护水平TAT，并且有51％的人可维持13个月左右，在符合最短间隔条件下，不同免疫间隔TAT差异没有显统计学意义。建议 将育龄妇女TT接种与计划生育工作密切挂钩，在育龄妇女领取计划生育指标时，必须出示TT接种证，使育龄妇女TT接种工作可持续发展。     

山楂古今应用谈

山楂味甘、酸、微温 ,归脾、胃、肝经。功能消食化积、行气散瘀、止泻止痢。现代医学认为 ,山楂含有酒石酸、柠檬酸、山楂酸、维生素Ｃ、黄酮类、内脂、糖类及甙类等。药理研究证明 ,山楂能增加胃中消化酶的分泌 ,促进消化 ,所含脂肪酶可促进脂肪分解。所含多种有机酸能提高蛋白酶的活性 ,使肉食易消化。山楂药效成分还具有收缩子宫、强心、抗心律失常、增加冠脉血流、扩张血管、降低血压、对痢疾杆菌及大肠杆菌有较强的抑制作用等等。1　健脾消食化积《脾胃论》 :“夫脾者行胃津液 ,磨胃中之谷 ,主五味也。胃伤饮食不化 ,口不知味 ,四肢困…     

膀胱癌术后复发髂内动脉脏支灌注化疗药5-FU、拓僖、吡柔比星疗效观察

目的探讨膀胱癌术后复发髂内动脉脏支介入灌注化疗药5-FU、拓僖、吡柔比星的疗效。方法对13例膀胱癌术后复发患者采用Seldinger技术穿刺右股动脉,选择性动脉插管（放置5F子宫动脉导管）,分别置入两侧髂内动脉脏支造影,显示肿瘤供血动脉,根据造影结果分配两侧化疗药用量,每月1次连续3次。结果 13例膀胱癌术后复发患者11例血尿消失,2例血尿减少,随访13月肿瘤染色影减小,有效率82.6%,缓解率100.0%。结论 5-FU、拓僖、吡柔比星化疗药物联合髂内动脉脏支灌注治疗效果好,是一种有效的治疗方法。     

基于W m啡eaterin信号通路探讨去霉附子场对骨关节类大鼠的软骨保护作用

[目的]基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨去毒附子汤(detoxicated Fuzi decoction，FZT)对膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)的作用及相关机制。[方法]将30只雌性无特殊病原体(specific pathogen free，SPF)级SD大鼠随机分为正常组，模型组，FZT低、中、高剂量组，每组6只。模型组，FZT低、中、高剂量组均采用碘乙酸关节腔注射造模法构建大鼠KOA模型。建模成功后，FZT低、中、高剂量组分别以2.4、4.8、9.6 g·kg-1的FZT灌胃，模型组和正常组以同剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃，连续4周。首次给药前和末次给药后，对各组大鼠进行疼痛行为学检测。末次给药后1周，取各组大鼠膝关节软骨组织，进行番红O染色和Mankin评分。分离大鼠原代软骨细胞进行培养，以不同浓度的FZT含药血清进行干预，采用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)法测定FZT含药血清对软骨细胞增殖活力的影响，选取最佳浓度。将软骨细胞随机分为NC组、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)组、TNF-α+FZT组，TNF-α+FZT组以10%的FZT含药血清干预，其余组使用空白培养基处理，以实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR)检测2型胶原(collgen type 2，Col2)、10型胶原(collgen type 10，Col10)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13，MMP13)、带有血小板凝血酶敏感蛋白结构域的解聚素与金属蛋白酶4(adisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4，Adamts4)、带有血小板凝血酶敏感蛋白结构域的解聚素与金属蛋白酶5(adisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5，Adamts5)、卷曲关联蛋白(frizzled-related protein，FRZB)、Wnt、低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(low density lipoprotein receptor related proteins 5/6，LRP5/6)、糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)以及β-catenin的mRNA表达情况，Western blot检测Wnt、LRP5/6、FRZB、GSK-3β以及β-catenin的蛋白表达情况。[结果]疼痛行为学数据显示，模型组大鼠的热痛和压痛阈值显著低于正常组(P＜0.01，P＜0.01)，FZT低、中、高剂量组大鼠的热痛和压痛阈值较模型组显著提高(均P＜0.01)。Mankin病理评分表明，模型组评分较正常组显著增高(P＜0.01)，FZT组评分较模型组显著降低(均P＜0.01)，且具有剂量依赖效应。MTT结果提示FZT含药血清能显著提高软骨细胞增殖活力。Real-time qPCR结果显示，与TNF-α组比较，FZT含药血清干预显著下调Col10、MMP13、Adamts4、Adamts5、Wnt、LRP5/6、GSK-3β及β-catenin的表达(均P＜0.01)，同时上调Col2的表达(P＜0.01)。Western blot结果显示，与TNF-α组比较，TNF-α+FZT组Wnt、LRP5/6、FRZB、GSK-3β以及β-catenin的蛋白表达减少(均P＜0.01)。[结论]FZT能显著改善KOA大鼠的疼痛行为学指标，修复软骨损伤，其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路以及软骨细胞分解代谢有关。     

结核流行病学分析和防治

目的通过对结核病流行病学调查,分析结核病流行病学特征,进行预防,制定防治措施提供科学依据。方法 56例结核病患者作为观察组,同时选取112例健康人作为对照组,观察两组与结核发生危险因素进行对比分析。结果观察组患者吸烟饮酒比例远高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;体育锻炼、睡眠开窗意识健康教育和接种疫苗远远小于对照组（P〈0.05）;而翻晒被褥和摄食新鲜蔬菜的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论本次调查住院和门诊结核病患者男性高于女性,体育锻炼和接受结核健康教育情况差。提示不锻炼和防治知晓率度的人为高危人群。     

人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒的构建及鉴定

背景：生长分化因子5是一种刺激肌腱、韧带塑型，增强愈合反应有效的生长因子，在活性组织工程肌腱构建中有重要作用。目的：构建人重组pcDNA6．2／生长分化因子5质粒，为转染基质干细胞向肌腱诱导分化实验奠定基础。设计、时间及地点：细胞基因工程体外实验，于2007-08／12在哈尔滨医科大学遗传学教研室和分子生物学教研室完成。材料：根据Genbank（NM000557）中人生长分化因子5的序列化学合成一对引物，从人胎儿软骨组织提取总RNA。方法：通过反转录聚合酶链反应得到人生长分化因子5完整成熟肽基因。将所得基因片段插入克隆载体pcDNA6-2并转化入JM109菌株，提取重组质粒，PCR鉴定、酶切鉴定并测序。主要观察指标：反转录聚合酶链反应检测结果，PCR及Sal I和BamH I双酶切鉴定结果，重组质粒测序与Genbank中序列比较结果。结果：电泳显示，反转录-聚合酶链反应产物为一长约380bp的带，阳性克隆质粒经PCR电泳及双酶切均出现约380bp的片段。测序表明与Genbank中的序列完全相符。结论：成功构建出人重组DcDNA6．2／生长分化因子5质粒，为组织工程化肌腱过程中种子细胞的制备提供转染质粒。