腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用

目的 通过腺病毒(adenovirus,Ad)载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC),探讨bel-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用.方法 体外培养新生大鼠SGC,携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒载体Ad-GFP转染SGC,并行神经丝蛋白(NF200)免疫细胞化学染色鉴定,激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察.携带bel-2基因的腺病毒载体Ad-bel-2转染SGC,蛋白质印迹法(Western Blot)检测bcl-2蛋白表达.设立Ad-bcl-2转染加顺铂组(A组),Ad-GFP转染加顺铂组(B组),顺铂组(C组)和正常对照组(D组),顺铂作用浓度为2μg,/ml;顺铂作用48 h后,行各组SGC计数,并通过lmageJ软件测量各组SGC轴突长度.结果 成功分离并培养新生大鼠SGC.激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC.Ad-bcl-2转染3 d后,Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达,而Ad-GFP转染组和顺铂组未检测到表达.顺铂作用后,A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩,胞体缩小、变圆,甚至浮起.A组SGC数目明显多于B组和C组(P值均＜0.01),但少于D组(P＜0.05);A组SGC轴突长度明显长于B组和C组,但短于D组(P值均＜0.01).结论 腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC.bel-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用.     

谷氨酸诱导细胞凋亡的机制及对内毛细胞突触复合体的损伤

谷氨酸在中枢神经组织和内耳神经组织都是重要的兴奋性递质,其过量的释放可致兴奋毒性损伤.凋亡是谷氨酸致组织损伤的途径之一.其引起凋亡的机制包括线粒体途径和非线粒体途径.在内耳组织,过量的谷氨酸造成的兴奋毒性也可引起内毛细胞突触复合体的损伤,其具体的信号途径还需要进一步的探讨.     

CD4+T细胞对损伤面神经元的保护作用

面神经是脑神经中最易受损的神经之一.面神经断伤将引起一定数量的面神经元死亡或萎缩;而神经元数量的减少,功能的降低必然影响神经功能的恢复.在面神经损伤后免疫反应机制的研究中,研究者发现CD4+T细胞可以维持受损面神经元存活,并再次激活萎缩的神经元.本文就该领域的研究进展做一综述.     

CD4^＋T细胞对损伤面神经元的保护作用

面神经是脑神经中最易受损的神经之一。面神经断伤将引起一定数量的面神经元死亡或萎缩;而神经元数量的减少,功能的降低必然影响神经功能的恢复。在面神经损伤后免疫反应机制的研究中,研究者发现CD4^＋T细胞可以维持受损面神经元存活,并再次激活萎缩的神经元。本文就该领域的研究进展做一综述。     

噪声性聋耳蜗螺旋神经节磷酸化c-Jun活性变化

目的:通过神经损伤性噪声引起4周昆明小鼠出现暂时性阈移(TTS)和永久性阈移(PTS),探讨听觉通路N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)活性调节耳蜗螺旋神经节(CG)磷酸化c-Jun变化.方法:采用30只昆明小鼠制作噪声性聋动物模型,进行听觉脑干诱发反应听力检测,并采用免疫组织化学对耳蜗听觉通路中NMDAR关键成分(磷酸化c-Jun)的表达进行检测.结果:噪声性聋诱导PTS后8 h、48 h、7 d、14 d CG磷酸化c-Jun的相对吸收度值明显增加,而阳性细胞数依次减少.噪声性聋诱导PTS前后立即腹膜腔注射MK-801引起相似改变.而诱导TTS后48 h则降至正常水平.结论:磷酸化c-Jun在噪声性聋后表达的增加具有时间相关性;MK-801通过阻断噪声暴露后传入神经递质谷氨酸,减少突触后钙内流所致的兴奋性毒性,从而保护听觉神经.因此,NMDAR可能参与了内耳损伤.     

隔声后听觉重塑模型中听皮质突触NR2A表达的变化

目的：观察隔声后听觉重塑模型中听皮质突触N甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚基NR2A表达的变化。方法：采用清洁级SD大鼠45只,分成隔声组、隔声后听觉重塑组及对照组各15只,Optiprep沉降梯度超速离心从初级听皮质提取高度纯化的突触体后,采用Western blotting蛋白质印迹检测技术对生后隔声14d组、28d组、42d组、隔声7d后再给予纯音暴露的各实验组听皮质突触体NR2A表达进行比较。结果：隔声使生后14d组和28d组动物听皮层NR2A表达水平明显下降（P〈0．05）,隔声7d后再给予纯音暴露则又使NR2A表达水平明显提高（P〈0．05）,呈现双向调节趋势。隔声和纯音暴露对生后42d组成熟大鼠听皮层NR2A表达不再产生明显调节作用（P〉0．05）。结论：在大鼠生后发育关键期,听觉经验可改变听皮层NMDA受体NR2A蛋白表达水平。研究结果为研究感觉功能发育可塑性的机制提供了重要的实验资料。     

JNK信号通道在强噪声诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡的作用

目的：探讨强噪声对豚鼠耳蜗细胞死亡的机制及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通道在强噪声诱导耳蜗细胞凋亡的作用。方法：将实验组豚鼠暴露在4kHz窄带噪声120dBSPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1d、4d、14d组及对照组（每组各8只）在处死前测ABR。取每组4只豚鼠耳蜗作石蜡切片,另外4只豚鼠提取耳蜗总蛋白。脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术（TUNEL）检测耳蜗凋亡细胞,免疫组织化学及WesternBlot方法检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun的表达。结果：实验组耳蜗Corti器毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞存在TUNEL阳性细胞,以1d组最多,逐渐减少,14d组最少,而对照组未见阳性细胞。免疫组织化学观察到实验组P-JNK、P-c-Jun有免疫反应阳性,定位于细胞核,对照组未见阳性细胞。Western Blot检测P-JNK、P-c-Jun含量在噪声刺激后迅速增高并快速活化,1d、4d达到高峰,随后逐渐下降,但在14d仍然维持较高水平。结论：强噪声可以通过诱导凋亡造成耳蜗细胞损伤,同时P-JNK标志着JNK信号途径的激活,提示JNK信号通道可能也是介导强噪声诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡信号通道之一。     

种植硅橡胶义耳在临床中的应用

目的对耳廓缺损的患者使用种植硅橡胶义耳,种植体是解决义耳的支持与固定的关键。方法在患耳（其中包括耳外伤1例和先天性耳廓畸形4例）颞骨乳突皮质骨处植入2枚钛钉种植体,采用杆卡式结构作为义耳的固位装置,完成种植义耳的修复。结果术后经3～6个月观察,钛钉种植体的骨亲和性良好,种植义耳外形逼真,患者满意。结论种植硅橡胶义耳是耳缺失的修复方法之一。     

结核性中耳乳突炎的临床特征及疗效分析

目的 探讨结核性中耳乳突炎的临床特点以及手术疗效.方法 回顾性分析经病理学证实的16例(18耳)结核性中耳乳突炎的临床表现、影像学特征以及治疗方法,并随访其预后.结果 16例(18耳)患者均表现为耳流脓、听力下降,并发重度感音神经性聋患者3例(4耳),并发周围性面神经麻痹患者3例.16例颞骨高分辨率CT均表现为鼓室、乳突充满软组织密度影,其中骨质破坏11例(12耳),颞骨内存在死骨7例(7耳).16例患者中伴发肺结核7例.15例患者接受了手术治疗去除病灶并联合抗结核治疗.除2例患者术前经穿孔的鼓膜取活检明确诊断为结核性中耳乳突炎外,其余14例患者均为术中或者术后确诊.除1例患者失访外其余15例患者均随访1年以上,中耳乳突结核无复发,3例面神经麻痹患者基本恢复正常.结论 对于顽固性耳流脓,影像学提示鼓室、乳突充满软组织密度影且存在骨质破坏或者死骨者,应仔细询问是否有结核病史,以便鉴别结核性中耳乳突炎.手术去除病灶并结合抗结核治疗对该病有较高的治愈率.     

传导性聋理论及诊断技术

由外耳及中耳病变导致的听力损失称为传导性聋.近年来的临床实践及相关研究表明内耳疾病亦可导致传导性聋,脑组织及脑脊液在将声音传到内耳的过程起重要作用,激光多普勒振荡仪的使用使得对传导性聋病变部位的诊断更加精确.本文就传导性聋理论及诊断技术的新进展进行综述.