环磷酰胺代谢产物丙烯醛对未成熟睾丸支持细胞骨架的影响及机制研究

目的 探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)代谢产物丙烯醛(acrolein,ACR)对未成熟睾丸Sertoli细胞骨架的损伤及其机制.方法 建立新生SD大鼠Sertoli细胞原代培养模型,实验组给予100 μmol/L浓度的ACR溶液,对照组给予PBS溶液,12 h后分别用超氧化物阴离子荧光探针染色观察Sertoli细胞内超氧化阴离子的变化,透射电子显微镜观察ACR对细胞超微结构的影响,免疫荧光染色观察细胞骨架中F-actin的分布变化,Western blot方法测定ERK和p38的表达水平.结果 ①ACR能增强sertoli细胞内活性氧的水平;②ACR处理后,实验组细胞线粒体发生了肿胀,染色质发生了凝集,出现胞质浓缩、核溢裂及并且空泡化现象,而微丝发生聚集、边缘化和区域化;③ACR干预后实验组ERK和p38MAPK表达活性明显上升.结论 CP的主要毒性代谢产物ACR通过引起未成熟睾丸Sertoli细胞的氧化应激反应损伤支持细胞骨架,从而导致儿童生精功能障碍,而其可能通过活化ERK和p38的表达使MAPK信号途径激活来实现这一损伤过程.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism and the effect of Acrolein on cytoskeleton of Sertoli cells. Methods We isolated and identified Sertoli cells from 8-day-old SD rats' testes. The experimental groups were treated with Acrolein, The control group were treated with phosphate buffered solution. After 12 hours, the treated cells were dyed with DHE to assay the distribution of superoxide anion, and the ultrastructure of the Sertoli cells was examined with transmission electron microscope, F-actin was stained with fluorescent antibody, and the expression of ERK and p38 in Sertoli cells were assayed by Western blot. Results The photodensity of superoxide anion, the expression of ERK and p38 were increased in the experimental groups. After treatment with Acrolein, the ultrastructure of the Sertoli cells was changed, manisfested as chondriosome swelling; chromatin clumping, condensed endochylema; split nuclei and vacuolization. All of these changes were followed by a F-actin accumulation, marginalization and regionalization. Conclusions Acrolein, the main toxic metabolite of cyclophosphamide, damages the cytoskeleton of immature Sertoli cells through oxidization stress, which might activate the MAPK signaling pathway mainly by increasing the expressions of ERK and p38.     

HoxA13基因在尿道下裂胎鼠阴茎中的表达及意义

目的研究尿道下裂胎鼠阴茎中HoxA13核酸及其蛋白的表达,探讨其与尿道下裂发生的相关性。方法选用清洁级C57BL／6小鼠,用邻苯二甲酸二（2-乙基）己脂（DEHP）诱导并建立先天性尿道下裂模型;交配怀孕后,孕鼠随机分为玉米油对照组、实验组（DEHP500mg·kg^-1·d^-1）;各组持续灌胃;于怀孕第19天取出仔鼠,测量各组雄鼠体重、AGD;统计各组胎鼠尿道下裂的发生率,并观测阴茎的组织病理学变化;应用常规RT-PCR及免疫组织化学方法检测诱导出的尿道下裂胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中HoxA13的mRNA及蛋白表达水平。结果对照组、实验组的AGD值分别为（0．208±0．01）cm、（0．181±0．12）cm,P〈0．01;尿道下裂发生率分别为0％、75．7％,P〈0．01。实验组胎鼠尿道板及包皮于阴茎腹侧隆起融合落后,该组尿道与腹侧皮肤间的皮下组织明显减少。DEHP500mg·kg^-1·d^-1诱导的尿道下裂胎鼠阴茎组织中HoxA13mRNA及蛋白表达较对照组明显降低。结论DEHP能影响胎鼠的生长发育及体重,并导致雄鼠外生殖器发育异常;HoxA13mRNA及蛋白的表达在DEHP诱导的尿道下裂胎鼠阴茎中均较正常对照组降低,提示HoxAl3基因异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

文化建设助推医院发展的思考

医院文化建设是医院发展的精神财富和核心竞争力之一,文化建设是医院深化改革与发展的重要内容。在当今的医疗卫生事业发展中,文化建设对医院的发展发挥着越来越突出的作用,成为医院发展生命力的重要指标。     

细胞外信号调控激酶在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导的尿道下裂大鼠中的表达

目的在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]诱导的先天性尿道下裂大鼠模型上,研究细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2在DEHP暴露后的胎鼠阴茎中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠完全随机分为DEHP组[750 mg/(kg·d)DEHP+1.5 mL大豆油]和对照组(1.5 mL大豆油),每组20只,2组分别于母鼠怀孕天数(GD)第12～19天持续经口灌注给药。2组分别取10只孕鼠让其正常分娩,并计数每窝产雄性活仔鼠数量;出生后1、3、7、14、21、30日龄时称取雄性仔鼠体质量并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD);30日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况。余孕鼠在GD20行剖宫产取雄性胎鼠,应用实时定量聚合酶链反应(qPCR)和免疫组化方法分别检测胎鼠阴茎组织中ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平。结果 DEHP组孕期暴露诱导的尿道下裂发生率为28.2%。DEHP组每窝产雄性活仔鼠数量、各日龄雄性仔鼠体质量及AGD较对照组明显减少或缩短(P<0.01)。与对照组比较,DEHP组胎鼠阴茎组织中ERK1和ERK2 mRNA表达水平明显增加(P<0.05);DEHP组ERK1/2磷酸化蛋白表达水平有增加趋势。结论 DEHP诱导先天性尿道下裂发生可能与胎鼠阴茎组织中ERK信号的过度表达有关。     

术前化疗在肾母细胞瘤中的应用

肾母细胞瘤是儿童时期最常见的肾脏实体恶性肿瘤,随着以手术为主的综合治疗的不断发展,肾母细胞瘤术后无瘤生存率有了显著提高,而术前化疗在其中起了举足轻重的作用。目前长春新碱、放线菌素D及表柔比星是术前化疗的基础药物。术前化疗有不同的给药途径及方法,各种方法又有不同的化疗方案,其使肿瘤缩小增加肿瘤全瘤切除率和预测肾母细胞瘤患者预后方面的作用得到了越来越广泛的认可。未来术前化疗的目标将是提高化疗有效性,降低化疗药物近期、远期毒性。     

小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性

 目的 研究携带多药耐药基因（MDR1）小干扰RNA（siMDR1）的真核表达质粒对L2RYC卵黄囊瘤细胞株中MDR1基因及蛋白表达的抑制效果,并观察siMDR1作用前后细胞对长春新碱（VCR）耐药性的变化。方法 设计4对特异性针对大鼠MDR1的siRNA序列,分别与pSES-HUS质粒重组获得pSES-siMDR1真核表达质粒,通过脂质体转染到L2RYC细胞中,用实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后MDR1 的mRNA及蛋白表达。转染后的细胞中再加入不同浓度的VCR,用MTT法检测吸光度,并计算出各组半数抑制浓度（IC50）值。结果 4对siMDR1分别转染均能不同程度地抑制L2RYC细胞MDR1基因表达,pool组MDR1的相对表达量最低为0.396±0.080,MDR1蛋白表达也能被有效抑制,经不同siMDR1转染的细胞加入VCR后细胞增殖被抑制,IC50降低,pool组最显著为1.632±0.423 mg/L,与其余各组比较有明显差异（P<0.05）。结论 pSES-siMDR1真核表达质粒能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达,MDR1表达被抑制后L2RYC细胞对VCR的敏感性增加。     

Smad7,Smad3和Smad2在DEHP诱导的尿道下裂大鼠阴茎中的表达

目的研究Smads(7,3和2)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠随机分为2组:实验组(将DEHP溶于1.5 mL大豆油中灌胃大鼠)和对照组(以1.5 mL大豆油灌胃大鼠),每组20只,自孕12 d(gestation day,GD12)至19 d(GD19)连续每天定时给药1次。至GD20行剖宫产取出雄性胎鼠,切取阴茎组织,采用实时定量PCR和免疫组化法分别检测胎鼠阴茎中Smad7,Smad3和Smad2三者mRNA和蛋白质表达水平。结果经qP CR检测分析后发现,Samd7,Smad3和Smad2三者mRNA在正常对照组相对于内参GAPDH的表达分别是1.00,0.84和1.14,在DEHP暴露组其相对表达分别是1.87,1.36和1.49,且三者在实验组的表达与正常对照组比较,均升高(P值分别为0.001,0.041和0.021);观察实验组Smad7和p-Smad2/3蛋白表达水平亦有增加趋势。结论DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中Smads(7,3和2)的过度表达有关。     

儿童肾盏憩室的鉴别诊断与疗效分析

目的探讨儿童肾盏憩室的鉴别诊断与诊疗方法。方法回顾性分析本院泌尿外科2009年1月至2017年2月收治的44例肾囊性占位病变患儿临床资料,其中7例诊断为肾盏憩室,总结分析7例肾盏憩室患儿的影像学检查结果、治疗方法以及转归等情况。结果 7例患儿中,女性3例,男性4例;右侧5例,左侧2例;年龄4个月至10岁,平均年龄6.4岁。7例患儿中,3例因腹痛就诊,4例无临床症状,为体检时彩超发现。憩室直径1.4~6.2 cm,平均直径3.8 cm。4例患儿予随访观察,1例经抗感染治疗后腹痛缓解好转出院,2例予腹腔镜手术治疗。随访时间为3个月至8年。5例保守治疗患儿定期随访憩室大小,未见明显变化;2例腹腔镜手术患儿术后恢复良好,无并发症发生,憩室无复发。结论儿童肾盏憩室易与单纯性肾囊肿相混淆,CT增强后延迟扫描对诊断肾盏憩室有较高的检出率。临床应严格把握手术指证。     

DEHP诱导的隐睾鼠胰岛素样因子3基因CpG岛甲基化状态研究

目的 研究胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)基因在邻苯二甲酸二已酯(DEHP)致小鼠隐睾中DNA甲基化的状态.方法 运用"MethPrimer"软件对INSL3基因进行分析.预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)检测INSL3基因CpG岛的甲基化状况,并应用RT-PCR检测INSL3基因在正常组与实验组睾丸组织中的表达情况.结果实验组INSL3基凶第一外显子区存在CpG岛甲基化;实验组INSL3基因mRNA表达显著下降.结论 INSL3基因第一外显子区CpG岛的异常甲基化导致INSL3在隐睾鼠睾丸中表达降低,可能与隐睾的发生密切相关.     

基质金属蛋白酶-3与儿童常见实体肿瘤的相关性

目的:探讨儿童肿瘤组织中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达与肿瘤恶性程度、浸润转移的相关性.方法:采用免疫组织化学SABC法测定MMP-3在各儿童常见肿瘤组织中表达的强度.结果:MMP-3的表达强度在恶性肿瘤转移组、恶性肿瘤未转移组、良性肿瘤组之间均存在统计学差异(P＜0.05).结论:在儿童常见实体肿瘤中,MMP-3表达与肿瘤恶性程度相关,MMP-3表达越强,肿瘤恶性程度越高,浸润转移可能性也越大.提示MMP-3可作为预测儿童实体瘤转移与预后的一个临床指标.